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JoVE Journal Biochemistry
Real-Time cAMP Dynamics in Live Cells Using the Fluorescent cAMP Difference Detector In Situ

Dinamica del cAMP in tempo reale in cellule vive utilizzando il rivelatore di differenza fluorescente cAMP in situ

Full Text
1,660 Views
06:03 min
March 22, 2024

DOI: 10.3791/66451-v

Isabella Cattani-Cavalieri1, Jordyn Margolis1, Camelia Anicolaesei1, Francisco J. Nuñez1, Rennolds S. Ostrom1

1Department of Biomedical and Pharmaceutical Sciences,Chapman University School of Pharmacy

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Il protocollo presentato in questo studio illustra l'efficacia del cAMP Difference Detector In Situ nella misurazione del cAMP attraverso due metodi. Un metodo utilizza uno spettrofotometro per la lettura di piastre a 96 pozzetti con celle HEK-293. L'altro metodo dimostra le singole cellule HASM sotto un microscopio a fluorescenza.

Ci occupiamo dell'organizzazione dei micro domini KP ciclistici con particolare attenzione a chiarire come questi compartimenti si formano e si sostengono. Cerchiamo di scoprire i componenti chiave che consentono alle cellule di discernere i segnali spaziali all'interno di questi domini, esplorando la variazione nella loro interpretazione e come queste caratteristiche sono alterate in malattie come l'asma e la BPCO. Infettare le cellule primarie utilizzando il vettore di Beckman è una sfida.

A tal fine, la condizione deve essere ottimizzata per il singolo tipo di cellula al fine di ottenere un'espressione sufficiente del biosensore. Questo protocollo consente il rilevamento e il monitoraggio in tempo reale, che va da minuti a ore, e la misurazione della dinamica del ciclocampo all'interno delle cellule viventi. Di conseguenza, i segnali generati da questo saggio sono direttamente correlati ai livelli ciclici di P, riducendo significativamente la potenziale interferenza da parte degli altri componenti cellulari e fornendo risultati affidabili.

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Biosensore CAMP CADDis Epac2 proteina fluorescente dinamica CAMP misurazione in tempo reale cellule HEK-293 celle HASM piastra a 96 pozzetti microscopia fluorescente screening ad alto rendimento segnalazione CAMP

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