Name: Studio dei circuiti retinici e della localizzazione molecolare mediante microscopia immunoelettronica pre-incorporata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: Scopri la microscopia immunoelettronica pre-incorporata per studiare i circuiti retinici e la localizzazione dei neurotrasmettitori nel topo. Questo metodo rivela connessioni sinaptiche precedentemente ignorate nella retina.

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<meta charset="utf8"></head><body>Analisi dei circuiti sinaptici e localizzazione delle proteine nella retina del topo

<ol><li>Chua, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+reconstruction+of+the+early+visual+system+of+an+adult+insect%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A complete reconstruction of the early visual system of an adult insect.</a> Curr Biol. 33 (21), 4611-4623.e4614 (2023).</li>
<li>Ravi Chander, P., Hanson, L., Chundekkad, L., Awatramani, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuits+underlying+multi-feature+extraction+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural circuits underlying multi-feature extraction in the retina.</a> J Neurosci. , JN-RM-0910-23 (2023).</li>
<li>Sirivisoot, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+mouse+anti-canine+PD-L1+monoclonal+antibodies+and+their+expression+in+canine+tumors+by+immunohistochemistry+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Q%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of mouse anti-canine PD-L1 monoclonal antibodies and their expression in canine tumors by immunohistochemistry in vitro.</a> Vet Q. 43 (1), 1-9 (2023).</li>
<li>Raeisi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+phage+display-derived+anti-toxin+antibodies+neutralizing+TcdA+and+TcdB+of+Clostridioides+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of phage display-derived anti-toxin antibodies neutralizing TcdA and TcdB of Clostridioides difficile.</a> Microbiol Spectr. 11 (5), e0531022(2023).</li>
<li>Ryschich, A., Dong, Y., Schäfer, M., Ryschich, E., Karakhanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DWH24%3A+A+new+antibody+for+fluorescence-based+cell+death+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Appl+Fluoresc%22%5BJournal%5D)">DWH24: A new antibody for fluorescence-based cell death analysis.</a> Methods Appl Fluoresc. 11 (4), (2023).</li>
<li>Jastrzebska, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+rhodopsin+monomers+and+dimers+in+detergents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of rhodopsin monomers and dimers in detergents.</a> J Biol Chem. 279 (52), 54663-54675 (2004).</li>
<li>Huang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Shenfu+injection+in+suppressing+inflammation+and+preventing+sepsis-induced+apoptosis+in+murine+cardiomyocytes+based+on+network+pharmacology+and+experimental+validation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Shenfu injection in suppressing inflammation and preventing sepsis-induced apoptosis in murine cardiomyocytes based on network pharmacology and experimental validation.</a> J Ethnopharmacol. 322, 117599(2024).</li>
<li>Maheshwari, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inorganic+phosphate+exporter+heterozygosity+in+mice+leads+to+brain+vascular+calcification%2C+microangiopathy%2C+and+microgliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Inorganic phosphate exporter heterozygosity in mice leads to brain vascular calcification, microangiopathy, and microgliosis.</a> Brain Pathol. 33 (6), e13189(2023).</li>
<li>Mackiewicz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gravity+in+long-term+vitreous+tamponade%3A+In+vivo+investigation+using+perfluorocarbon+liquids+and+semi-fluorinated+alkanes%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Effect of gravity in long-term vitreous tamponade: In vivo investigation using perfluorocarbon liquids and semi-fluorinated alkanes.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 245 (5), 665-675 (2007).</li>
<li>Luján, R., Rubio, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+Immunoelectron+microscopy%3A+Placing+molecular+functions+within+a+neuronal+context%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Editorial: Immunoelectron microscopy: Placing molecular functions within a neuronal context.</a> Front Neuroanat. 16, 1043371(2022).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+changes+and+the+response+of+microglia+in+a+light-induced+photoreceptor+degeneration+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Synaptic changes and the response of microglia in a light-induced photoreceptor degeneration model.</a> Mol Vis. 27, 206-220 (2021).</li>
<li>Chadha, A., Volland, S., Baliaouri, N. V., Tran, E. M., Williams, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+route+of+the+visual+receptor+rhodopsin+along+the+cilium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The route of the visual receptor rhodopsin along the cilium.</a> J Cell Sci. 132 (10), jcs.229526(2019).</li>
<li>Huang, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+nucleocapsid+structural+forms+of+shrimp+white+spot+syndrome+virus+suggests+a+novel+viral+morphogenetic+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple nucleocapsid structural forms of shrimp white spot syndrome virus suggests a novel viral morphogenetic pathway.</a> Int J Mol Sci. 24 (8), 7525(2023).</li>
<li>Tissarinen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+human+placental+heat+shock+protein+5+is+associated+with+spontaneous+preterm+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Elevated human placental heat shock protein 5 is associated with spontaneous preterm birth.</a> Pediatr Res. 94 (2), 520-529 (2023).</li>
<li>Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neural+tract+tracing+study+on+synaptic+connections+for+cortical+glutamatergic+terminals+and+cervical+spinal+calretinin+neurons+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">A neural tract tracing study on synaptic connections for cortical glutamatergic terminals and cervical spinal calretinin neurons in rats.</a> Front Neural Circuits. 17, 1086873(2023).</li>
<li>Zhang, J., Petralia, R. S., Wang, Y. X., Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+quantitative+immunogold+analysis+of+membrane+receptors+at+retinal+ribbon+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution quantitative immunogold analysis of membrane receptors at retinal ribbon synapses.</a> J Vis Exp. 108, e53547(2016).</li>
<li>Ottersen, O. P., Landsend, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+glutamate+receptors+at+the+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organization of glutamate receptors at the synapse.</a> Eur J Neurosci. 9 (11), 2219-2224 (1997).</li>
<li>Greferath, U., Grünert, U., Wässle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+in+the+mammalian+retina+show+protein+kinase+C-like+immunoreactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells in the mammalian retina show protein kinase C-like immunoreactivity.</a> J Comp Neurol. 301 (3), 433-442 (1990).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+synaptic+organization+of+substance+P-like+immunoreactive+neurons+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Distribution and synaptic organization of substance P-like immunoreactive neurons in the mouse retina.</a> Brain Struct Funct. 228 (7), 1703-1724 (2023).</li>
<li>van Opbergen, C. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((34%3BOrphan%26%2334%3B+Connexin43+in+Plakophilin-2+deficient+hearts+revealed+by+volume+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">34;Orphan&#34; Connexin43 in Plakophilin-2 deficient hearts revealed by volume electron microscopy.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 843687(2022).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safe+and+efficient+oral+allergy+immunotherapy+using+one-pot-prepared+mannan-coated+allergen+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Safe and efficient oral allergy immunotherapy using one-pot-prepared mannan-coated allergen nanoparticles.</a> Biomaterials. 303, 122381(2023).</li>
<li>Yamashita, K., Kusakabe, M., Sano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+rapid+method+of+dissociating+hepatocytes+from+fixed+liver+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technol%22%5BJournal%5D)">A simple and rapid method of dissociating hepatocytes from fixed liver of the mouse.</a> Stain Technol. 56 (1), 29-33 (1981).</li>
<li>Tanabe, T., Shin, M., Fujiwara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoelectron+microscopy+study+of+polyamines+using+a+newly+prepared+monoclonal+antibody+against+spermidine%3A+use+of+a+mixture+of+glutaraldehyde+and+paraformaldehyde+as+a+cross-linking+agent+in+the+preparation+of+the+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Immunoelectron microscopy study of polyamines using a newly prepared monoclonal antibody against spermidine: use of a mixture of glutaraldehyde and paraformaldehyde as a cross-linking agent in the preparation of the antigen.</a> J Biochem. 135 (4), 501-507 (2004).</li>
<li>Xiao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+receive+cone+photoreceptor+inputs+through+both+invaginating+synapses+and+flat+contacts+in+the+mouse+and+guinea+pig+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells receive cone photoreceptor inputs through both invaginating synapses and flat contacts in the mouse and guinea pig retinas.</a> J Comp Neurol. 531 (11), 1184-1197 (2023).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+%CE%B1-Synuclein+in+the+mouse+retina+is+confined+to+inhibitory+presynaptic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of α-Synuclein in the mouse retina is confined to inhibitory presynaptic elements.</a> J Comp Neurol. 531 (10), 1057-1079 (2023).</li>
<li>Yazulla, S., Studholme, K. M., Zucker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+organization+of+substance+P-like+immunoreactive+amacrine+cells+in+goldfish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Synaptic organization of substance P-like immunoreactive amacrine cells in goldfish retina.</a> J Comp Neurol. 231 (2), 232-238 (1985).</li>
<li>Sassoè-Pognetto, M., Wässle, H., Grünert, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycinergic+synapses+in+the+rod+pathway+of+the+rat+retina%3A+cone+bipolar+cells+express+the+alpha+1+subunit+of+the+glycine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glycinergic synapses in the rod pathway of the rat retina: cone bipolar cells express the alpha 1 subunit of the glycine receptor.</a> J Neurosci. 14 (8), 5131-5146 (1994).</li>
<li>Hartveit, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+and+developmental+expression+of+the+NMDA+receptor+subunit+NR2A+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Localization and developmental expression of the NMDA receptor subunit NR2A in the mammalian retina.</a> J Comp Neurol. 348 (4), 570-582 (1994).</li>
<li>Perkins, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+miniSOG+in+the+localization+of+mitochondrial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The use of miniSOG in the localization of mitochondrial proteins.</a> Methods Enzymol. 547, 165-179 (2014).</li>
<li>Shu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+tag+for+correlated+light+and+electron+microscopy+of+intact+cells%2C+tissues%2C+and+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded tag for correlated light and electron microscopy of intact cells, tissues, and organisms.</a> PLoS Biol. 9 (4), e1001041(2011).</li>
<li>Kar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+electron+microscopy+reveals+human+retinal+mitochondria+that+align+with+reflective+bands+in+optical+coherence+tomography+%5BInvited%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Volume electron microscopy reveals human retinal mitochondria that align with reflective bands in optical coherence tomography [Invited].</a> Biomed Opt Express. 14 (10), 5512-5527 (2023).</li>
<li>Johnson, J. E. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+regulation+of+ATP+and+Ca2%2B+dynamics+in+vertebrate+rod+and+cone+ribbon+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal regulation of ATP and Ca2+ dynamics in vertebrate rod and cone ribbon synapses.</a> Mol Vis. 13, 887-919 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL ago per siringa</td><td>kangdelai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1% OsO4</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienza 19100</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoetanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>8% Glucotaldeide</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienza 16020</td><td></td></tr><tr><td>8% Paraformaldeide</td><td>Microscopia elettronica Scienza</td><td>157-8</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Acetone Microscopia Elettronica Scienza</td><td>10000</td><td></td></tr><tr><td>Anti-coniglio PKC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4334</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Coniglio SP</td><td>Abcam</td><td>ab67006</td><td></td></tr><tr><td>DAB Kit substrato</td><td>MXB Biotecnologie</td><td>KIT-9701/9702/9703</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per gomito</td><td>Suzhou66 vision company</td><td>54010</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio elettronico</td><td>Phillips</td><td>CM120</td><td></td></tr><tr><td>Resina Epon</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienza 14910</td><td></td></tr><tr><td>pinza</td><td>Suzhou66 vision company</td><td>S101A</td><td></td></tr><tr><td>Carta da filtro Millipore</td><td>Merck Millipore&nbsp;</td><td></td><td></td>PR05538</tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Sigma</td><td>71650</td><td>Un componente del tampone fosfato</td></tr><tr><td>NaH2PO4&middot; H2O</td><td>Sigma</td><td>71507</td><td>Un componente del tampone fosfato</td></tr><tr><td>Acido picrico</td><td>Microscopia elettronica Scienza</td><td>19550</td><td></td></tr><tr><td>Boroidruro di sodio (NaBH4)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>215511</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>917R071</td><td></td></tr><tr><td>Ultramicrotomo</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Uranile acetato</td><td>Microscopia elettronica Science</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>VACTASTAIN ABC kit, Perossidasi (IgG di coniglio)</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-4001</td><td></td></tr></tbody></table>

studio dei circuiti retinici e della localizzazione molecolare mediante microscopia immunoelettronica pre-incorporata

Investigating Retinal Circuits and Molecular Localization by Pre&#45;Embedding Immunoelectron Microscopy

La Figura 1 mostra esempi di esperimenti di controllo senza l'incubazione di anticorpi primari contro la proteina chinasi C alfa (PKCα) o SP, in cui non è stata trovata alcuna immunoreattività (IR).
La Figura 2 illustra la PKCα-IR nella retina del topo. PKCα funge da marcatore per tutte le cellule bipolari dei bastoncelli (RBC) nella retina18. A livello di microscopia elettronica (EM), i globuli rossi possono essere identificati attraverso PKCα-IR, visualizzati dal prodotto di reazione della diaminobenzidina (DAB) ad alta densità elettronica. La Figura 2A illustra un dendrite di globuli rossi PKCα-positivo che forma una sinapsi con un terminale a bastoncello nello strato plessiforme esterno (OPL), mentre la Figura 2B mostra una sinapsi cono-globuli rossi in cui un dendrite di globuli rossi PKCα-positivo è post-sinaptico a un terminale a cono. Inoltre, il prodotto di reazione DAB aiuta a identificare i terminali dei globuli rossi (Figura 2C) e i processi assonali (Figura 2D) nello strato plessiforme interno (IPL).
La Figura 3 mostra l'espressione della sostanza P (SP) nelle connessioni pre e post-sinaptiche nell'IPL della retina del topo. Le cellule amacrine SP-IR sono presinaptiche alle cellule amacrine SP-negative (Figura 3A) così come i processi amacrini SP-IR (dati non mostrati). Inoltre, le cellule amacrine SP-IR sono terminali post-sinaptici-bipolari rispettivamente nei livelli di IPL del sottostrato 3 (S3) e del sottostrato 5 (S5) (Figura 3B, C). La nostra ricerca precedente descrive in dettaglio l'analisi delle sinapsi in cui i processi delle cellule amacrine SP-IR formano output sinaptici su altri processi nell'IPL19. In particolare, la localizzazione subcellulare di SP si trova principalmente nelle vescicole sinaptiche nei terminali presinaptici (Figura 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66543/66543fig01v2.jpg"> Figura 1: Micrografie immunoelettroniche da esperimenti di controllo. Sia il peduncolo conico (CP) con due nastri (punta di freccia) (A) che la sferule dell'asta (RS) con un nastro nell'OPL (B) non hanno mostrato macchie. Barre della scala: 500 nm (A), 200 nm (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66543/66543fig01largev2.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66543/66543fig02.jpg"> Figura 2: Micrografie immunoelettroniche marcate con l'anticorpo PKCα nella retina del topo. (A) RS si connette con un RBC PKCα-positivo (le frecce indicano immunoreattività) e due cellule orizzontali (H) nell'OPL. (B) CP si connette con i globuli rossi PKCα-positivi nell'OPL. (C) e (D) mostrano rispettivamente il processo terminale e assonale dei globuli rossi PKCα-positivo nell'IPL. Barre della scala: 200 nm (A), 500 nm (B), 500 nm (C), 500 nm (D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66543/66543fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66543/66543fig03.jpg"> Figura 3: Micrografie immunoelettroniche marcate con anticorpi SP nell'IPL della retina di topo. (A) La cellula amacrina SP-IR (A+) è presinaptica a una cellula amacrina SP-negativa (A-). Le cellule amacrine SP-IR hanno ricevuto input dai terminali bipolari rispettivamente nei livelli S3 (B) e S5 (C) di IPL. Barre della scala: 200 nm (A), 200 nm (B), 200 nm (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66543/66543fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Studio dei circuiti retinici e della localizzazione molecolare mediante microscopia immunoelettronica pre-incorporata

The retina comprises numerous cells forming diverse neuronal circuits, which constitute the first stage of the visual pathway. Each circuit is ...

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La retina murina neonatale fornisce un modello fisiologico ben caratterizzato dell'angiogenesi, che permette indagini sui ruoli dei geni o farmaci diversi che modulano l'angiogenesi in...

Tutta Monte immunofluorescenza del mouse Retina neonatale per Indagare Angiogenesi<em&gt; In vivo</em

Il protocollo qui descritto è per la valutazione strutturale di una preparazione retinica a montaggio intero. Ciò include le descrizioni della dissezione tissutale, il montaggio su un inserto di membrana in politetrafluoroetilene idrofilizzato (PTFE), il caricamento del bolo con marcatori fluorescenti e un confronto della fissazione con carbodiimmide e paraformaldeide per l'analisi immunoistochimica dei componenti cellulari e sinaptici.

Protocollo ottimizzato per la preparazione dell'intero montaggio retinico per l'imaging e l'immunoistochimica

Il metodo immunogold post-inclusione è uno dei modi più efficaci per fornire analisi ad alta risoluzione della localizzazione subcellulare di molecole specifiche. Qui descriviamo un protocollo per analizzare quantitativamente i recettori del glutammato nelle sinapsi del nastro retinico.

Risoluzione alta analisi quantitativa Immunogold di Recettori di membrana a retina nastro Sinapsi

Dimostriamo di tre tecniche di preparazione dei tessuti differenti per la visualizzazione di immunohistochemical di periciti microvascolare del ratto, vale a dire, cryo-sezioni, intero-monta e ipotonico isolamento della rete vascolare.

Cryo-sezioni della retina, intero-monta e ipotonico Vasculature isolato preparazioni per la visualizzazione di Immunohistochemical dei Pericytes microvascolare

Questo rapporto descrive metodi completi per la preparazione di sezioni della retina del topo congelato per l'immunohistochimica (IHC).  I metodi descritti includono la dissezione della coppa posteriore oculare, la fissazione della paraformaldeide, l'incorporamento nei supporti e nell'orientamento dei tessuti della temperatura di taglio ottimale (OCT), il sezionamento e l'immunostaining.

Preparazione delle sezioni ricrello della retina

Il metanolo può essere utilizzato come mezzo fisso ausiliario per preparazioni retiniche a montaggio intero e conservazione a lungo termine, utile per lo studio delle cellule gangliari retiniche.

Preparato a base di metanolo a montaggio intero per lo studio delle cellule gangliari retiniche

Questo protocollo descrive i passaggi dettagliati per la preparazione di campioni retinici per la microscopia elettronica volumetrica, concentrandosi sulle caratteristiche strutturali dei terminali dei fotorecettori retinici.

Preparazione di campioni retinici per microscopia elettronica volumetrica

Questo protocollo fornisce una procedura di preparazione ottimizzata ed elaborata per campioni di organoidi retinici per la microscopia elettronica a trasmissione. È adatto per applicazioni che prevedono l'analisi delle sinapsi in organoidi retinici maturi.

Preparazione di campioni di organoidi retinici per la microscopia elettronica a trasmissione

Viene descritto un protocollo per la preparazione di criosezioni retiniche di topo e l'esecuzione dell'immunocolorazione sui fotorecettori. Questo articolo consente ai ricercatori di produrre in modo coerente sezioni congelate della retina di topo con morfologia ben conservata e risultati di immunocolorazione di alta qualità.

Criosezione e immunocolorazione della retina del topo

La retina mostra una complessa organizzazione spaziale attraverso la sua struttura laminare. Le moderne tecniche di trascrittomica spaziale e sequenziamento richiedono sezioni di tessuto &lt; 20 μm di spessore, limitandone l'applicabilità nella ricerca retinica. Questo metodo di criosezione appena congelato produce sottili sezioni en face della retina di topo preservando le relazioni spaziali planari, consentendo una mappatura molecolare completa tra le lamine.

En face Criosezione della retina di topo per analisi molecolare spaziale ad alta dimensione

Scopri la microscopia immunoelettronica pre-incorporata per studiare i circuiti retinici e la localizzazione dei neurotrasmettitori nel topo. Questo metodo rivela connessioni sinaptiche precedentemente ignorate nella retina.

Studio dei circuiti retinici e della localizzazione molecolare mediante microscopia immunoelettronica pre-incorporata

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