Name: Un modello fotopolimerizzabile di acido ialuronico-collagene del microambiente di glioma invasivo con flusso interstiziale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 30 s
Description: Esplora un modello 3D di acido ialuronico-collagene per studiare l'invasione del glioblastoma con flusso interstiziale. Questo sistema fotopolimerizzabile combina imaging MRI e analisi computazionale per replicare il microambiente tumorale.

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<meta charset="utf8"></head><body>Replicare l'invasione del glioblastoma con il sistema di idrogel di acido ialuronico-collagene I

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Il glioblastoma è una malattia devastante, caratterizzata da una breve sopravvivenza1 che viene estesa solo moderatamente dai trattamenti clinicamente disponibili 2,3. Questo impedimento a una terapia efficace è in gran parte guidato dalla natura altamente infiltrativa delle cellule staminali del glioma chemioresistente (GSC) che sono inaccessibili alla resezione e seminano tumori ricorrenti4. Allo stesso tempo, le GSC sono altamente plastiche e rispondono a diversi stimoli nel microambiente tumorale (TME) per sopravvivere e invadere 5,6. In particolare, il tumore densamente popolato e la vascolarizzazione permeabile producono un ripido differenziale di pressione al bordo del tumore, aumentando il flusso di liquido interstiziale (IFF) in regioni distinte che sono correlate all'invasione di GSC7. Questo aumento dell'IFF influenzal'8,9,10 e spesso aumenta l'invasionedell'8,9 GSC attraverso vie molecolari suscettibili di inibizione farmacologica. Tuttavia, questo processo è confuso dall'influenza della glia nel TME sull'invasione del glioma; infatti, è stato descritto che la glia modula l'invasione del glioma in numerosi contesti11, e prove preliminari nel nostro laboratorio indicano un'influenza simile della glia sull'invasione del glioma12 potenziata da IFF. Pertanto, il nostro laboratorio ha sviluppato un modello TME 3D sintonizzabile che replica queste regioni invasive del bordo tumorale incorporando sia l'IFF che le interazioni glia-GSC per quantificare l'invasione di GSC e altri esiti (ad esempio, espressione proteica superficiale o intracellulare, espressione dell'RNA, ecc.) influenzati da IFF, glia e/o terapie candidate12 (Figura 1).
Il modello TME è simile ad altri saggi di flusso di fluidi interstiziali basati su inserti di colture tissutali (ad es. saggi statici/di flusso) che sono stati ampiamente pubblicati 8,9,10,13,14,15,16,17,18. Le principali distinzioni di questo modello sono l'incorporazione di una matrice di collagene-acido ialuronico non proprietaria e sintonizzabile, l'inclusione di astrociti e microglia nella matrice a rapporti rappresentativi delle TME12 del paziente e il sistema è interamente racchiuso in una piastra a pozzetti, priva di tubi esterni, serbatoi o pompe. L'acido ialuronico è tra i principali componenti della matrice extracellulare cerebrale19, ma non è sufficiente a consentire il flusso di liquidi; quindi, il collagene I è incluso nella miscela. La reticolazione avviene in due fasi: una polimerizzazione a catena iniziata da radicali liberi in cui dopo l'esposizione alla luce ultravioletta (UV), i radicali liberi vengono prodotti dal fotoiniziatore e generano legami incrociati chimici tra le molecole di acido ialuronico metacrilato20 e la neutralizzazione del collagene conservato in acido e l'esposizione al calore per formare fibre di collagene 21,22,23.
Vari parametri che sono stati ottimizzati per questo test sono stati descritti in lavori precedentemente pubblicati in idrogel di acido ialuronico-collagene modificatocon tiolo 8,12. In particolare, le cellule (GSC24 umane primarie, astrociti corticali umani primari e microglia umane immortalizzate) utilizzate per questo test sono vitali per almeno il 60% per 3 giorni in gel composti da terreni astrobasali integrati con fattori di crescita GSC, 0,5% v/v N-2 e 1% v/v B-27 senza vitamina A12. Nei casi in cui i gel devono essere degradati (ad esempio, per l'estrazione di proteine o la citometria a flusso), vengono utilizzate collagenasi e dispasi e mantengono una vitalità sufficiente (Figura 2).
Per quantificare l'invasione, le GSC devono essere marcate in fluorescenza prima di essere combinate con la glia nella matrice. Ciò può essere ottenuto mediante marcatura con Hoechst 33342 (come descritto di seguito), tracciatori cellulari12, modificazione genetica o trasduzione. Indipendentemente da ciò, la vitalità delle cellule marcate con nuovi marcatori deve essere misurata prima di incorporarle nel modello TME. In alternativa, se l'invasione non sarà quantificata ma i gel verranno raccolti per l'estrazione di proteine, estrazioni di RNA o altri risultati, le cellule spesso non hanno bisogno di essere marcate in fluorescenza durante il processo di preparazione del gel. In tal caso, i gel possono essere fissati in formalina per l'imaging, degradati e lisati con cellule per l'estrazione dell'RNA, oppure degradati utilizzando proteasi per la citometria a flusso e successivamente lisati con tamponi di lisi proteica per Western blot o altri lavori proteici.
Qui, presentiamo un protocollo per incorporare astrociti umani, microglia e GSC derivate da pazienti in un rapporto definito dal paziente, 4:1:112, in una matrice di collagene I da 1,2 mg/mL e 4 mg/mL di acido ialuronico in condizioni statiche di flusso. I parametri specifici utilizzati per un test (ad esempio, rapporti cellulari, rigidità, tipi di cellule, ecc.) possono essere modificati per rappresentare contesti diversi se la vitalità è adeguata.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66604/66604fig01.jpg"> Figura 1: Diagramma del modello TME costituito da GSC, astrociti e microglia in un idrogel sotto una testa di pressione del fluido. Le cellule sono incorporate in un idrogel di collagene-acido ialuronico all'interno di un inserto di coltura tissutale. La forza gravitazionale spinge il flusso netto verso il basso. I pori della membrana dell'inserto di coltura tissutale consentono alle cellule che invadono verso il basso di attaccarsi alla superficie inferiore dell'inserto di coltura tissutale e queste cellule possono essere fissate, visualizzate e quantificate. Creato con BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66604/66604fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66604/66604fig02.jpg"> Figura 2: Vitalità cellulare dopo la degradazione dell'idrogel. I G34 (GSC), gli astrociti e le microglia sono stati seminati nel modello TME a 4:1:1 e incubati per 21 ore a 37 °C. I gel sono stati rimossi e degradati utilizzando 0,3 mg/mL di collagenasi + 0,02 mg/mL di dispasi per un totale di 30, 45 o 60 minuti, pipettando per miscelare ogni 15 minuti (condizione di 30 minuti) o a 30 minuti e poi ogni 15 minuti (condizioni di 45 minuti e 60 minuti). Dopo che i gel sono stati degradati, le cellule sono state colorate con arancio acridina (tutte le cellule) e ioduro di propidio (cellule morte) e contate utilizzando un contatore di cellule automatizzato. La vitalità è riportata per tutte le cellule all'interno del modello TME. Le cellule hanno mantenuto almeno il 70% di vitalità per 30-60 minuti. I dati sono presentati come media ± SEM; n = 3 repliche biologiche. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66604/66604fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

<table><tbody><tr><td>Piastra per coltura tissutale a 12 pozzetti, prodotti scientifici Sterile</td><td>Celltreat&nbsp;</td><td></td><td></td>229112</tr><tr><td>Filtro da 250 mL Sistema, Materiale filtrante PES, 0,22 & micro; m, 50 mm, Sterile</td><td>DOT Scientific 667706</td><td></td><td></td></tr><tr><td>385 nm, 1650 mW (Min) LED montato, 1700 mA&nbsp;</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>M385LP1-C1</td><td></td></tr><tr><td>75cm2 Pallone per colture tissutali - Tappo di sfiato, Celltreat</td><td>sterile Scientific Products</td><td>229341</td><td></td></tr><tr><td>8.0 &mu; m Inserto per piastra per colture cellulari Millicell da 12 mm di diametro</td><td></td><td>PI8P01250</td><td></td></tr><tr><td>etanolo assoluto, 200 proof, grado di biologia molecolare</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T038181000CS</td><td>Etanolo per il controllo delle cellule morte con citometria a flusso.</td></tr><tr><td>Astrocyte Medium (Astrofull)</td><td>ScienCell Research Laboratories</td><td>1801</td><td>Contiene astrobasale, FBS e penicillina/streptomicina.</td></tr><tr><td>Integratore di B-27 (50x), meno vitamina A (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>BSA (MACS)</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo CD71 (eBioscience, Invitrogen)</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>25-0719-41</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini a camera per conteggio cellulare</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CHT4-PD100-002</td><td></td></tr><tr><td>Raschietti cellulari</td><td>Biologix USA&nbsp;</td><td>70-1250</td><td></td></tr><tr><td>Cellometro K2 Contatore di cellule fluorescenti (Nexelcom Bioscience)</td><td>VWR&nbsp;</td><td>Centrifuga NEXCCMK2-SK150-FCS</td><td></td></tr><tr><td>- Eppendorf a bassa velocità</td><td></td><td>5702 R</td><td>Centrifuga per colture cellulari.</td></tr><tr><td>Micropiastre in polistirene trasparente a 96 pozzetti, Corning</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-108</td><td>Piastre con fondo a V per la colorazione con citometria a flusso.</td></tr><tr><td>CO2&nbsp; Incubatrice, 150L, Heracell 150i (Thermo Scientific)</td><td>Thermo Fisher Scientific 50116047</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagene I, Alta Concentrazione,</td><td>Corning a</td> coda di ratto <td>354249</td><td></td></tr><tr>Collagen I, <td>Corning</td> a<td>coda di ratto</td><td>354236</td> <td>Concentrazione "bassa" per il rivestimento di matracci aderenti.</td></tr><tr><td>Collagenasi (CAS # 9001-12-1)</td><td>Stati Uniti Biologico</td><td>C7511-30</td><td></td></tr><tr><td>Adattatore di collimazione per Olympus BX & IX, rivestimento AR: tamponi</td> di cotone <td>Thorlabs</td><td>COP1-A</td><td></td>da 350 a 700 nm</tr><tr><td>, punte di precisione Q-tips&nbsp;</td><td>Amazon</td><td>B01KCJB3R2</td><td></td></tr><tr><td>Dispase (CAS# 9001-92-7)&nbsp;</td><td>Stati Uniti Biological</td><td>D3760</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, alto glucosio (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL</td><td>Invitrogen</td><td>AMF4300</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26140079</td><td>Per la coltura della microglia.</td></tr><tr><td>Soluzione di formalina, tamponata neutra, 10% (Sigma-Aldrich)</td><td>Millipore Sigma</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Foxp3 / Set di tamponi per colorazione con fattore di trascrizione (eBioscience, Invitrogen)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>Cellule staminali di glioma</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Può essere derivato da paziente o linee di cellule staminali di glioma commerciali.</td></tr><tr><td>Guava easyCyte HT System</td><td>Millipore Sigma</td><td>0500-4008</td><td>Citometro a flusso.</td></tr><tr><td>HBSS (Sigma-Aldrich)&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>H6648</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M) (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Driver LED ad alta potenza a 1 canale con modulazione di impulso, 10,0 A max, 50,0 V max&nbsp;</td><td>Interfaccia Thorlabs</td><td>DC2200</td><td>per lampada UV.</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 Soluzione (20 mM) (Thermo Scientific)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>Astrociti umani</td><td>ScienCell Research Laboratories</td><td>1800</td><td>Astrociti primari derivati dalla corteccia cerebrale.</td></tr><tr><td>Proteina ricombinante EGF umana (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG0311</td><td></td></tr><tr><td>Proteina ricombinante umana FGF-basica (FGF-2/bFGF) (aa 10-155)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG0021</td><td></td></tr><tr><td>Microglia umana immortalizzata - hTERT</td><td>Applied Biological Materials&nbsp;</td><td>T0251</td><td></td></tr><tr><td>Incu-mixer MP Vortexer per micropiastre riscaldato, 2 posizioni</td><td>Benchmark Scientific&nbsp;</td><td>H6002</td><td></td></tr><tr><td>Ki67 REAfinity, anticorpo PerCP-Vio 700</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-120-420</td><td></td></tr><tr><td>LED Misuratore di polimerizzazione UV</td><td>Optometro Gigahertz-Optik</td><td>X1-RCH-116</td><td>per misurare l'intensità della luce UV.</td></tr><tr><td>Litio fenil-2,4,6-trimetilbenzoilfosfinato (LAP)&nbsp;</td><td>Biomatrice avanzata</td><td>5269-100MG&nbsp;</td><td>Fotoiniziatore.</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Near-IR fissabile (Invitrogen)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L24975</td><td></td></tr><tr><td>Acido ialuronico metacrilato (fotoHA)</td><td>Microcentrifuga Advanced Biomatrix</td><td>5212-100MG</td><td></td></tr>, <tr><td>Sorvall ST8R (Thermo Scientific)</td><td>Fisher Scientific</td><td>75-997-203</td><td>Centrifuga per colorazione con citometria a flusso.</td></tr><tr><td>Integratore N-2 (100X) (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A Medium (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific 10888022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS (10X), pH 7.4 senza Ca & Mg</td><td>Qualità Biologica</td><td>119-069-101</td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di sodio, pellet ACS (CAS # 1310-73-2)</td><td>VWR&nbsp;</td><td>97064-476</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%), rosso fenolo (Gibco)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione colorante ViaStain AOPI</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CS2-0106</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello fotopolimerizzabile di acido ialuronico-collagene del microambiente di glioma invasivo con flusso interstiziale

A Photopolymerizable Hyaluronic Acid-Collagen Model of the Invasive Glioma Microenvironment with Interstitial Flow

Dati rappresentativi per l'invasione (Figura 3), la vitalità e l'espressione di Ki67 e CD71 tramite citometria a flusso (Figura 4) sono forniti per le linee GSC come precedentemente pubblicato per un idrogel di ialuronano-collagene12 tio-modificato. La presenza di astrociti e microglia all'interno del modello TME ha un effetto differenziale sull'invasione delle GSC a seconda della linea cellulare (Figura 4). In particolare, le GSC G44 e G6224 sono state seminate nel modello TME con e senza astrociti e microglia ed esposte a un carico di pressione del fluido (flusso) o a un flusso netto nullo (statico).
La presenza rispetto all'assenza di astrociti e microglia all'interno del modello TME è stata associata a una riduzione dell'invasione di G44 in condizioni statiche (Figura 3; p &lt; 0,05). Al contrario, né il flusso né la presenza di astrociti e microglia hanno influenzato significativamente l'invasione di G62. Questi diversi effetti del microambiente tumorale e del flusso sull'invasione sono stati descritti per ulteriori linee cellulari12 e dovrebbero essere studiati per nuove linee cellulari che sono incorporate nel sistema modello.
Per analizzare la vitalità, la proliferazione di Ki67+ e la staminalità CD71+ delle GSC nel modello TME, la linea GSC G3424 è stata seminata con astrociti e microglia marcati con colorante fluorescente ed è stata applicata la staticità o il flusso. Quindi, i gel sono stati degradati per isolare le cellule per la citometria a flusso. Le cellule sono state colorate con vivi/morti fissabili, quindi fissate e marcate con anticorpi Ki67 o CD7112. La Figura 4A illustra il protocollo generale di gating per CD71+, Ki67+ G34 vivi differenziato da astrociti e microglia. La proliferazione di G34 (Ki67) è risultata significativamente aumentata nel flusso rispetto all'elettricità statica quando era sola nei gel (p &lt; 0,001) e in presenza rispetto all'assenza di glia all'interno della condizione statica (p &lt; 0,05) (Figura 4B). Sebbene statisticamente non significativo, G34 tendeva ad aumentare l'espressione di CD71 durante il flusso quando era solo nei gel; questa tendenza non è stata osservata in presenza di glia (Figura 4C). Questo metodo può essere utilizzato per quantificare altri marcatori di interesse per ciascun tipo di cellula all'interno del modello TME.
In particolare, a causa della variabilità introdotta da molteplici fattori che possono potenzialmente influenzare l'invasione del glioma (rigidità del gel, gliosi reattiva, cambiamenti fenotipici dovuti alla selezione e al passaggio, ecc.), è spesso utile riportare la dimensione dell'effetto, ed è necessario generare repliche tecniche e condurre un'analisi di potenza per le repliche biologiche prima di saggiare nuove linee cellulari. Generalmente, n = 3-6 repliche biologiche sono accettabili. Per ridurre al minimo la variabilità e massimizzare la potenza, le condizioni dovrebbero essere tutte eseguite all'interno dello stesso esperimento, compresi i confronti tra diverse linee GSC, quando possibile.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66604/66604fig03v2.jpg"> Figura 3: Influenza differenziale del microambiente tumorale sull'invasione stimolata dal flusso attraverso due linee GSC. Le GSC marcate in fluorescenza (G44 e G62) sono state seminate in idrogel da soli (-A/M) o con astrociti e microglia (+A/M). Una testa di pressione del fluido è stata applicata alle condizioni di "flusso"; Il flusso netto di fluido zero è stato applicato a condizioni "statiche". Le GSC invase sono state fissate sulla membrana dell'inserto di coltura tissutale, contate e mediate tra le repliche tecniche. L'invasione media è stata tracciata per ogni replica biologica. L'invasione di G44 è stata significativamente ridotta dalla presenza di A/M all'interno della condizione statica (p &lt; 0,05). Al contrario, né il flusso né la presenza di A/M hanno influenzato l'invasione nel G62. La proporzione di GSC seminate che hanno invaso è tracciata come media ± SEM; n = 3 repliche biologiche; *p &lt; 0,05 per un'ANOVA a 2 vie abbinata seguita dai confronti multipli di Tukey. I dati sono riformattati e ristampati con il permesso di Cornelison et al. 202212. L'analisi statistica è stata rivista per includere solo le linee cellulari di interesse. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66604/66604fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66604/66604fig04.jpg"> Figura 4: Misurazione della vitalità, della proliferazione (Ki67) e della staminalità (CD71) nelle GSC nell'ambito del modello TME. Nel modello TME, le GSC sono state seminate con o senza astrociti marcati con colorante fluorescente (verde) e microglia (rosso intenso) ed esposte a flusso di fluido netto nullo (statico) o a flusso netto (flusso). I gel sono stati degradati e colorati con colorante vivo/morto nel vicino infrarosso e con anticorpi Ki67 o CD71 per citometria a flusso. I controlli dell'isotipo sono visualizzati in grigio. (A) I tipi di cellule sono stati marcati e le cellule vitali sono state quantificate tramite colorazione nel vicino infrarosso viva/morta. (B) La proliferazione del Ki67 nei G34 è significativamente aumentata nel flusso rispetto a quello statico quando è solo nell'idrogel (p &lt; 0,001) e in presenza di astrociti e microglia (A/M) in condizioni statiche (p &lt; 0,05). (C) Al contrario, sebbene statisticamente non significativa, la staminalità G34, rappresentata dall'espressione di CD71, è mantenuta in condizioni statiche includendo astrociti e microglia nel modello TME. I dati sono presentati come media ± SEM; n = 3 repliche biologiche. *p &lt; 0,05 e ***p &lt; 0,0001 per un'ANOVA a due vie seguita dai confronti multipli di Tukey. La figura è riformattata e ristampata con il permesso di Cornelison et al. 202212; sono inclusi dati aggiuntivi che dimostrano le condizioni statiche nei pannelli B e C. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66604/66604fig04large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Un modello fotopolimerizzabile di acido ialuronico-collagene del microambiente di glioma invasivo con flusso interstiziale

Glioblastoma recurrence is a major hindrance to treatment success and is driven by the invasion of glioma stem cells (GSCs) into healthy tissue that are ...

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Questo video dimostra come le gliomasfere, derivate da tumori cerebrali, vengono separate in singole cellule e incapsulate in un idrogel a base di acido ialuronico. Questo processo promuove le interazioni cellula-cellula, formando un modello di glioblastoma strutturato e tridimensionale.

Un idrogel a base di acido ialuronico per la coltura tridimensionale di cellule di glioblastoma

In questo video, le cellule di glioblastoma e microglia vengono miscelate con una soluzione di matrice polimerica e trasferite in un inserto di camera porosa dove si forma un gel, che incorpora le cellule. Le microglia stimolano la migrazione delle cellule di glioblastoma attraverso l'inserto poroso, imitando l'invasione delle cellule tumorali nel tessuto circostante, le cellule vengono quindi fissate e preparate per ulteriori analisi.

Modello di invasione tumorale basato su matrice utilizzando la co-coltura del glioblastoma della microglia

Qui, presentiamo un protocollo per la cultura 3D del ratto cellule di glia cervello-derivato, tra cui gli astrociti, microglia ed oligodendrociti. Dimostriamo che la cellula primaria cultura, sintesi di idrogel di acido ialuronico methacrylated (HAMA), incapsulamento delle cellule e HAMAphoto-polimerizzazione e campione di elaborazione per l'imaging al microscopio confocale e scansione elettrone.

Migliorata 3D idrogel culture di cellule gliali primari In Vitro modellazione del Neuroinflammation

Qui, presentiamo un protocollo per la cultura tridimensionale delle cellule di glioblastoma paziente-derivato all'interno di biomateriali ortogonalmente sintonizzabile progettate per imitare la matrice di cervello. Questo approccio fornisce un in vitro, una piattaforma sperimentale che mantiene molte caratteristiche in vivo delle cellule di glioblastoma in genere perdite nella cultura.

Acido ialuronico base di idrogel per cultura 3-dimensionale delle cellule di Glioblastoma paziente-derivato

Qui, descriviamo un assaggio di invasione facile da usare per il glioblastoma. Questo test è adatto per cellule staminali del glioblastoma. Viene descritta anche una macro Fiji per una facile quantificazione dell'invasione, della migrazione e della proliferazione.

Un modello spheroid 3D per Glioblastoma

Il presente protocollo descrive una piattaforma sperimentale per valutare gli effetti dei segnali meccanici e biochimici sulle risposte chemioterapiche delle cellule di glioblastoma derivate dal paziente in colture 3D matrix-mimetiche utilizzando un dispositivo di illuminazione UV su misura che facilita il fotocrosslinking ad alto rendimento di idrogel con caratteristiche meccaniche sintonizzabili.

Gli array di idrogel consentono una maggiore produttività per gli effetti di screening dei componenti della matrice e delle terapie nei modelli tumorali 3D

Il presente protocollo stabilisce un modello post-resezione di recidiva del glioblastoma (GBM) utilizzando la microscopia per studiare l'effetto terapeutico di un idrogel iniettabile bioresponsivo in vivo.

Modello post-resezione recidiva di glioblastoma per indagini terapeutiche sull'idrogel

Qui, presentiamo un protocollo che consente la fabbricazione rapida, robusta ed economica di sferoidi tumorali seguita dall'incapsulamento dell'idrogel. È ampiamente applicabile in quanto non richiede attrezzature specializzate. Sarebbe particolarmente utile per esplorare le interazioni sferoide-matrice e costruire modelli di fisiologia o patologia tissutale in vitro .

Fabbricazione e incapsulamento di sferoidi tumorali in idrogel di polietilenglicole per lo studio delle interazioni sferoide-matrice

Presentiamo un modello di migrazione del glioblastoma 3D utilizzando gliomasfere magnetiche derivate dal paziente generate da tumori appena diagnosticati e ricorrenti. Questa piattaforma consente la visualizzazione delle dinamiche migratorie specifiche del paziente e la valutazione dell'efficacia terapeutica. Il saggio può essere multiplexato dopo la migrazione per valutare la localizzazione e i modelli di espressione delle proteine.

Test riproducibile di migrazione del glioblastoma 3D con localizzazione sferoide mediata da nanoparticelle magnetiche in condizioni ipossiche

Un nuovo approccio che consente l'analisi ad alta risoluzione delle interazioni delle cellule tumorali con esogeno di acido ialuronico (HA) è descritto. Superficie lavorata sono realizzati mediante la combinazione chimica carbodiimmide e stampa microcontact.

Superfici Micropatterned per studiare le interazioni acido ialuronico con le cellule tumorali

Esplora un modello 3D di acido ialuronico-collagene per studiare l'invasione del glioblastoma con flusso interstiziale. Questo sistema fotopolimerizzabile combina imaging MRI e analisi computazionale per replicare il microambiente tumorale.

Un modello fotopolimerizzabile di acido ialuronico-collagene del microambiente di glioma invasivo con flusso interstiziale

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