Isolamento del midollo osseo di topo neonatale e preparazione di macrofagi derivati dal midollo osseo
May 24th, 2024
Questo protocollo descrive un metodo semplice e non enzimatico per isolare cellule di midollo osseo neonatale di topo di 7-9 giorni e generare macrofagi differenziati utilizzando un surnatante di cellule L929 come fonte di fattore stimolante le colonie di granulociti (M-CSF). I macrofagi derivati dal midollo osseo sono stati ulteriormente analizzati per gli antigeni di superficie F4/80, CD206, CD11b e la competenza funzionale.
Lo scopo di questo studio è comprendere alcune delle limitazioni nella risposta immunitaria precoce all'infezione batterica. Per raggiungere questo obiettivo, dobbiamo sviluppare e utilizzare modelli di ricerca specifici per i neonati. L'isolamento del midollo osseo da un cucciolo di sette giorni è impegnativo e non ben consolidato.
I macrofagi derivati dal midollo osseo neonatale sono sensibili e inclini allo stress rispetto ad altri BMDM. La tecnica utilizzata in questo protocollo è semplice e riproducibile. Questo metodo guida gli utenti nell'isolamento del midollo osseo da topi neonatali di sette o nove giorni senza l'uso di alcun enzima.
Questo studio fornisce una strategia standardizzata per generare macrofagi derivati dal midollo osseo da topi neonatali che possono essere utilizzati per affrontare domande sull'immunologia neonatale. Questo metodo riproducibile fornisce un modello specifico per l'età per far progredire la ricerca immunitaria neonatale in molte aree di competenza.
Panoramica
Questo protocollo delinea un metodo non enzimatico per isolare le cellule del midollo osseo di topi neonatali e generare macrofagi differenziati. Lo studio si concentra sulle sfide del lavoro con topi neonatali di 7-9 giorni e sulla sensibilità dei loro macrofagi derivati dal midollo osseo.
Componenti chiave dello studio
Area di scienza
- Neuroscienza
- Immunologia
- Biologia cellulare
Sfondo
- Comprendere le risposte immunitarie precoci alle infezioni batteriche.
- Sfide nell'isolare il midollo osseo dai topi neonatali.
- I macrofagi derivati dal midollo osseo neonatale sono sensibili e inclini allo stress.
- Necessità di tecniche riproducibili nella ricerca neonatale.
Obiettivo dello studio
- Sviluppare un metodo affidabile per isolare il midollo osseo dai topi neonatali.
- Generare macrofagi funzionali per studi sulle risposte immunitarie.
- Migliorare la comprensione delle risposte immunitarie neonatali.
Metodi utilizzati
- Isolamento del midollo osseo da topi neonatali di 7-9 giorni.
- Tecnica non enzimatica per l'isolamento cellulare.
- Uso del surnatante delle cellule L929 come fonte di M-CSF.
- Analisi degli antigeni di superficie e della competenza funzionale dei macrofagi.
Risultati principali
- Isolamento con successo di macrofagi derivati dal midollo osseo neonatale.
- Caratterizzazione dei macrofagi utilizzando gli antigeni di superficie F4/80, CD206 e CD11b.
- Dimostrazione della competenza funzionale nei macrofagi generati.
- Validazione del metodo come semplice e riproducibile.
Conclusioni
- Il protocollo fornisce un metodo affidabile per studiare le risposte immunitarie neonatali.
- I macrofagi isolati possono essere utilizzati per ulteriori ricerche immunologiche.
- Questa tecnica potrebbe facilitare i progressi negli studi sulla salute neonatale.
Domande frequenti
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
