Name: Tecnica di coltura in vitro per lo studio della dinamica cellulare nelle squame di zebrafish (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T12:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: Scopri una tecnica di coltura in vitro per studiare la dinamica cellulare nelle squame di Danio rerio. Questo metodo consente di visualizzare nuclei fluorescenti e cellule apoptotiche per analizzare l'omeostasi ossea.

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<meta charset="utf8"></head><body>Rimozione delle squame di pesce zebra per studi di coltura e biologia ossea

<ol><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNusslein-Volhard%2C+C+%22Zebrafish%22">Zebrafish</a>. , Oxford University Press. New York. (2002).</li>
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<li>Etchin, J., Kanki, J. P., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods Cell Biol. 105, 309-337 (2011).</li>
<li>Choe, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+fluorescent+zebrafish+lines+that+have+revolutionized+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Res%22%5BJournal%5D)">Transgenic fluorescent zebrafish lines that have revolutionized biomedical research.</a> Lab Anim Res. 37, 1-29 (2021).</li>
<li>Brito, R. S., Canedo, A., Farias, D., Rocha, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+an+emerging+model+system+in+ecotoxicology+and+toxicology%3A+Historical+review%2C+recent+advances%2C+and+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Transgenic zebrafish (Danio rerio) as an emerging model system in ecotoxicology and toxicology: Historical review, recent advances, and trends.</a> Sci Total Environ. 848, 157665(2022).</li>
<li>Bergen, D. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+zebrafish+scales+express+a+subset+of+evolutionary+conserved+genes+involved+in+human+skeletal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Regenerating zebrafish scales express a subset of evolutionary conserved genes involved in human skeletal disease.</a> BMC Biol. 20 (1), 1-25 (2022).</li>
<li>Sire, J., Girondot, M., Babiar, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marking+zebrafish%2C+Danio+rerio+%28Cyprinidae%29%2C+using+scale+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Marking zebrafish, Danio rerio (Cyprinidae), using scale regeneration.</a> J Exp Zool. 286 (3), 297-304 (2000).</li>
<li>Carvajal-Agudelo, J. D., McNeil, A., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+simulated+microgravity+and+vibration+on+osteoblast+and+osteoclast+activity+in+cultured+zebrafish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Space+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of simulated microgravity and vibration on osteoblast and osteoclast activity in cultured zebrafish scales.</a> Life Sci Space Res. 38, 39-45 (2023).</li>
<li>Pasqualetti, S., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblast+and+osteoclast+behavior+in+zebrafish+cultured+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoblast and osteoclast behavior in zebrafish cultured scales.</a> Cell Tissue Res. 350, 69-75 (2012).</li>
<li>Pasqualetti, S., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+scale+as+model+to+study+the+bone+mineralization+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Histol%22%5BJournal%5D)">The zebrafish scale as model to study the bone mineralization process.</a> J Mol Histol. 43, 589-595 (2012).</li>
<li>De Vrieze, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prednisolone+induces+osteoporosis-like+phenotype+in+regenerating+zebrafish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporos+Int%22%5BJournal%5D)">Prednisolone induces osteoporosis-like phenotype in regenerating zebrafish scales.</a> Osteoporos Int. 25, 567-578 (2014).</li>
<li>Iwasaki, M., Kuroda, J., Kawakami, K., Wada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+regulation+of+bone+morphogenesis+through+the+development+and+regeneration+of+osteoblasts+in+the+zebrafish+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Epidermal regulation of bone morphogenesis through the development and regeneration of osteoblasts in the zebrafish scale.</a> Dev Biol. 437 (2), 105-119 (2018).</li>
<li>Aman, A. J., Fulbright, A. N., Parichy, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt%2F%CE%B2-catenin+regulates+an+ancient+signaling+network+during+zebrafish+scale+development%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Wnt/β-catenin regulates an ancient signaling network during zebrafish scale development.</a> Elife. 7, e37001(2018).</li>
<li>Carnovali, M., Luzi, L., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+hyperglycemia+affects+bone+metabolism+in+adult+zebrafish+scale+model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr%22%5BJournal%5D)">Chronic hyperglycemia affects bone metabolism in adult zebrafish scale model.</a> Endocr. 54, 808-817 (2016).</li>
<li>Burns, A. R., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scales+of+the+zebrafish%3A+Host-microbiota+interactions+from+proteins+to+populations%5BTitle%5D)+AND+%22COMICR%22%5BJournal%5D)">The scales of the zebrafish: Host-microbiota interactions from proteins to populations.</a> COMICR. 38, 137-141 (2017).</li>
<li>Vieira, E. F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+freshwater+fish+scale+of+the+species+Leporinus+elongatus+as+adsorbent+for+anionic+dyes%3A+An+isothermal+calorimetric+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Therm+Anal+Calorim%22%5BJournal%5D)">The use of freshwater fish scale of the species Leporinus elongatus as adsorbent for anionic dyes: An isothermal calorimetric study.</a> J Therm Anal Calorim. 109 (3), 1407-1412 (2012).</li>
<li>Ighalo, J. O., Eletta, O. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+biosorption+of+pollutants+by+fish+scales%3A+A+mini-review%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Eng+Commun%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the biosorption of pollutants by fish scales: A mini-review.</a> Chem Eng Commun. 208 (9), 1301-1312 (2021).</li>
<li>Eletta, O. A. A., Ighalo, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+fish+scales+as+a+source+of+biosorbent+for+the+removal+of+pollutants+from+industrial+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Res+Inf+Civ+Eng%22%5BJournal%5D)">A review of fish scales as a source of biosorbent for the removal of pollutants from industrial effluents.</a> J Res Inf Civ Eng. 16 (1), 2479-2510 (2019).</li>
<li>Hill, A. J., Teraoka, H., Heideman, W., Peterson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+vertebrate+for+investigating+chemical+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model vertebrate for investigating chemical toxicity.</a> Toxicol. Sci. 86 (1), 6-19 (2005).</li>
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<li>Hutchinson, J. J., Trueman, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+isotope+analyses+of+collagen+in+fish+scales%3A+Limitations+set+by+scale+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">Stable isotope analyses of collagen in fish scales: Limitations set by scale architecture.</a> J Fish Biol. 69 (6), 1874-1880 (2006).</li>
<li>Kumari, S., Rath, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+characterization+of+chitin+and+chitosan+from+%28Labeo+rohit%29+fish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Procedia+Mater+Sci%22%5BJournal%5D)">Extraction and characterization of chitin and chitosan from (Labeo rohit) fish scales.</a> Procedia Mater Sci. 6, 482-489 (2014).</li>
<li>Stepnowski, P., Ólafsson, G., Helgason, H., Jastorff, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+study+on+chemical+and+physical+principles+of+astaxanthin+sorption+to+fish+scales+towards+applicability+in+fisheries+waste+management%5BTitle%5D)+AND+%22Aquac%22%5BJournal%5D)">Preliminary study on chemical and physical principles of astaxanthin sorption to fish scales towards applicability in fisheries waste management.</a> Aquac. 232 (1-4), 293-303 (2004).</li>
<li>Ghods, S., Murcia, S., Ossa, E. A., Arola, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designed+for+resistance+to+puncture%3A+The+dynamic+response+of+fish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Designed for resistance to puncture: The dynamic response of fish scales.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 90, 451-459 (2019).</li>
<li>Yang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+Arapaima+gigas+fish+scales%3A+Structure+and+mechanical+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Protective role of Arapaima gigas fish scales: Structure and mechanical behavior.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3599-3614 (2014).</li>
<li>Zhu, D., Zhang, C., Liu, P., Jawad, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+morphology%2C+structures+and+mechanical+properties+of+teleost+fish+scales+collected+from+New+Zealand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bionic+Eng%22%5BJournal%5D)">Comparison of the morphology, structures and mechanical properties of teleost fish scales collected from New Zealand.</a> J. Bionic Eng. 16, 328-336 (2019).</li>
<li>Witzmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+histological+changes+of+dermal+scales+during+the+fish-to-tetrapod+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Zool%22%5BJournal%5D)">Morphological and histological changes of dermal scales during the fish-to-tetrapod transition.</a> Acta Zool. 92 (3), 281-302 (2011).</li>
<li>Ibañez, A. L., Cowx, I. G., O'Higgins, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+morphometric+analysis+of+fish+scales+for+identifying+genera%2C+species%2C+and+local+populations+within+the+Mugilidae%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Fish+Aquat+Sci%22%5BJournal%5D)">Geometric morphometric analysis of fish scales for identifying genera, species, and local populations within the Mugilidae.</a> Can J Fish Aquat Sci. 64 (8), 1091-1100 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Provette da 0,2 mL</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl&nbsp;</td><td>EMD</td><td>HX0603-4</td><td>Per la stabilizzazione del pH e la preparazione del</td></tr><tr><td>vetrino PRS Concave</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vectashield</td><td>H-1200</td><td>Per la visualizzazione dei nuclei cellulari</td></tr><tr><td>Sale di diazonio (Fast Blue B)</td><td>Sigma</td><td>D9805</td><td>Per la soluzione di substrato AP</td></tr><tr><td>Polvere di Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>D5523</td><td>Per terreni di coltura in scala&nbsp;</td></tr><tr><td>Etile 3-amminobenzoato metanosolfonato (MS222)&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>E10521</td><td>Per la preparazione di 0,1% MS222</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F4135</td><td>Per terreni di coltura in scala&nbsp;</td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico glaciale&nbsp;</td><td>Pescatore</td><td>A38 212</td><td>Per tampone acetato</td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>VWR</td><td>BDH1172-4LP</td><td>Per glicerolo all'80% - bilancia di stoccaggio</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>ThermoFisher&nbsp;</td><td>15630106</td><td>Per terreni di coltura su scala&nbsp;</td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P217-10</td><td>Per la preparazione di PBS</td></tr><tr><td>Lysotracker</td><td>ThermoFisher</td><td>L7528</td><td>Per la visualizzazione dei lisosomi</td></tr><tr><td>Acido maleico</td><td>Sigma</td><td>M0375</td><td>Per tampone Tris-Maleato&nbsp;</td></tr><tr><td>Micropipetta</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td>N,N-dimetilformammide</tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>319937</td><td>Per soluzione substrato AP</td></tr><tr><td>N,N-dimetilformammide&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>319937</td><td>per soluzione di substrato enzimatico</td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>EMD</td><td>SX0720-1</td><td>Per la preparazione di PBS</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S9888</td><td>Per la preparazione di PBS</td></tr><tr><td>NaNO2</td><td>Sigma</td><td>S-2252</td><td>Per il 4% di NaNO2</td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5881</td><td>Per la preparazione di PFA</td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td> al 4%<td>Sigma&nbsp;</td><td>S5881</td><td>Per la fissazione delle incrostazioni e la stabilizzazione del pH</td></tr><tr><td>Naptolo-AS-TR-fosfato</td><td>Sigma</td><td>N6125</td><td>Per soluzione di substrato AP</td></tr><tr><td>Naptolo-AS-TR-fosfato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N6125</td><td>per soluzione di substrato enzimatico</td></tr><tr><td>Pararosanilina cloridrato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P3750</td><td>per PRS</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina 5000 unità penicillina e 5mg streptomicina / ml</td><td>ThermoFisher</td><td>15140122</td><td>Per terreni di coltura su scala&nbsp;</td></tr><tr><td>Dispositivi di protezione individuale (DPI): guanti monouso in nitrile, occhiali di sicurezza/occhiali antispruzzo e camice da laboratorio.</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>PFA&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P6148</td><td>Per il fissaggio della bilancia</td></tr><tr><td>Acetato di sodio&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S2889</td><td>Per tampone acetato</td></tr><tr><td>Microscopio composto standard</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td>Piastra</tr> di <tr><td>agitazione</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Acido tartarico</td><td>Sigma</td><td>T6521</td><td>Per tampone tartrato</td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Roche</td><td>03 118 142 001</td><td>Per tampone tris-maleato&nbsp;</td></tr></tbody></table>

tecnica di coltura in vitro per lo studio della dinamica cellulare nelle squame di zebrafish

In Vitro Culturing Technique for Studying Cellular Dynamics in Zebrafish Scales

Recentemente, questo protocollo di coltura a scala è stato utilizzato per studiare l'omeostasi ossea11. Le squame possono sopravvivere nel terreno di coltura per almeno 2 giorni. Il numero di cellule apoptotiche è stato analizzato in ogni giorno di coltura, fino a un massimo di tre giorni, contando le cellule marcate. Questi risultati hanno mostrato che le cellule apoptotiche aumentavano significativamente il terzo giorno di coltura, indicando che il tempo di coltura dovrebbe essere limitato a due...

Tecnica di coltura in vitro per lo studio della dinamica cellulare nelle squame di zebrafish

Zebrafish scales offer a variety of advantages for use in standard laboratories for teaching and research purposes. Scales are easily collected without ...

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Generazione di Dispersi Presomitic mesoderma colture cellulari, per Immagini del Zebrafish segmentazione Orologio in celle singole

Cheratociti zebrafish migrano in lastre alveolari da espianti e forniscono un modello in vitro per lo studio dei meccanismi di migrazione cellulare collettiva nel contesto di epiteliale guarigione della ferita. Questi protocolli dettaglio un modo efficace per stabilire le culture espianto primarie per l'uso in test di migrazione cellulare collettiva.

Zebrafish Keratocyte espianti per studiare la migrazione delle cellule collettiva e riepitelizzazione in guarigione delle ferite cutanee

Vi presentiamo un protocollo efficiente e facile da usare per la preparazione di colture cellulari primarie di embrioni di zebrafish per la transfezione e live cell imaging nonché un protocollo per preparare cellule primarie dal cervello di zebrafish adulto.

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Qui, presentiamo un protocollo di coltura 3D efficace, facile e veloce per la formazione di sferoidi di due linee cellulari di zebrafish (Danio rerio): ZEM2S (embrione) e ZFL (epatocita normale).

Un metodo di coltura 3D di sferoidi di linee cellulari embrionali e epatiche di zebrafish

Questo protocollo descrive la raccolta e la visualizzazione delle squame elasmoidi del pesce zebra durante la rigenerazione in vivo . Inoltre, viene presentata la coltura ex vivo di queste scaglie fino a 7 giorni dopo la raccolta.

Rigenerazione delle squame di zebrafish in toto e cultura delle squame ex vivo

In questo studio, descriviamo un metodo semplice per eseguire l'analisi del colorante blu di Evans (EBD) sulle larve di pesce zebra.  Questa tecnica è un potente strumento per la caratterizzazione dell'integrità del muscolo scheletrico e la delineazione di modelli di distrofia muscolare di zebrafish, ed è un metodo prezioso per lo sviluppo di nuove terapie.

Analisi delle larve Zebrafish muscolo scheletrico Integrità con Blu di Evans Dye

Qui, presentiamo un protocollo per utilizzare mappe del destino e traccianti di lignaggio per indirizzare le iniezioni nei singoli blastomeri che danno origine al rene degli embrioni di Xenopus laevis.

Tecnica a Target microiniezione per lo sviluppo<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

La mitosi è fondamentale per ogni organismo vivente e i difetti spesso portano al cancro e ai disturbi dello sviluppo. Utilizzando questo protocollo di imaging e il pesce zebra come sistema modello, i ricercatori possono visualizzare la mitosi in un organismo vertebrato vivo e la moltitudine di difetti che si verificano quando i processi mitotici sono difettosi.

Osservando divisione mitotica e Dynamics in un embrione vivo Zebrafish

I protocolli qui descritti consentono lo studio delle proprietà elettriche delle cellule eccitabili nelle condizioni fisiologiche più non invasive impiegando embrioni di zebrafish in un sistema in vivo insieme a un indicatore di tensione geneticamente codificato (GEVI) basato sul trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza (FRET) espresso selettivamente nel tipo di cellula di interesse.

Biosensing potenziale del membrane del neurone del motore in embrioni di Zebrafish in tensione

Questo lavoro presenta un nuovo modello in vivo di lesioni segmentali del rene utilizzando gengive transgenici GFP reni. Il modello permette l'induzione dell'ablazione mirata delle cellule epiteliali del rene per mostrare i meccanismi cellulari di lesioni nefroniche e di riparazione.

Approccio preciso di ablazione cellulare per la modellazione di lesioni acute del rene nello sviluppo di zebrafish

Scopri una tecnica di coltura in vitro per studiare la dinamica cellulare nelle squame di Danio rerio. Questo metodo consente di visualizzare nuclei fluorescenti e cellule apoptotiche per analizzare l'omeostasi ossea.

Tecnica di coltura in vitro per lo studio della dinamica cellulare nelle squame di zebrafish

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