Name: Prelievo sequenziale di sangue dalla vena cava inferiore seguito da vena porta per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 9 s
Description: Impara il prelievo sequenziale di sangue dalla vena porta e dalla vena cava inferiore nei topi per valutare i metaboliti microbici intestinali. Questo metodo permette di misurare con precisione gli acidi grassi a catena corta nel sangue portale.

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<meta charset="utf8"></head><body>Tecnica di campionamento del sangue migliorata per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi

<ol><li>vander Hee, B., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+regulation+of+host+physiology+by+short-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microbial regulation of host physiology by short-chain fatty acids.</a> Trends Microbiol. 29 (8), 700-712 (2021).</li>
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<li>Vinolo, M. A. R., Rodrigues, H. G., Nachbar, R. T., Curi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+inflammation+by+short+chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Regulation of inflammation by short chain fatty acids.</a> Nutrients. 3 (10), 858-876 (2011).</li>
<li>Layden, B. T., Angueira, A. R., Brodsky, M., Durai, V., Lowe, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+and+their+receptors%3A+new+metabolic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids and their receptors: new metabolic targets.</a> Transl Res. 161 (3), 131-140 (2013).</li>
<li>den Besten, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+short-chain+fatty+acids+in+the+interplay+between+diet%2C+gut+microbiota%2C+and+host+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">The role of short-chain fatty acids in the interplay between diet, gut microbiota, and host energy metabolism.</a> J Lipid Res. 54 (9), 2325-2340 (2013).</li>
<li>Tian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+gut+microbiome-derived+propionate+levels+are+associated+with+reduced+sterile+lung+inflammation+and+bacterial+immunity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Elevated gut microbiome-derived propionate levels are associated with reduced sterile lung inflammation and bacterial immunity in mice.</a> Front Microbiol. 10, 159(2019).</li>
<li>Liu, Q., Tian, X., Maruyama, D., Arjomandi, M., Prakash, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+immune+tone+via+gut-lung+axis%3A+Gut-derived+LPS+and+short-chain+fatty+acids%E2%80%99+immunometabolic+regulation+of+lung+IL-1%CE%B2%2C+FFAR2%2C+and+FFAR3+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lung immune tone via gut-lung axis: Gut-derived LPS and short-chain fatty acids’ immunometabolic regulation of lung IL-1β, FFAR2, and FFAR3 expression.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 321 (1), L65-L78 (2021).</li>
<li>De Vadder, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota-generated+metabolites+promote+metabolic+benefits+via+gut-brain+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microbiota-generated metabolites promote metabolic benefits via gut-brain neural circuits.</a> Cell. 156 (1-2), 84-96 (2014).</li>
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<li>Sun, M., Wu, W., Liu, Z., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota+metabolite+short+chain+fatty+acids%2C+GPCR%2C+and+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Microbiota metabolite short chain fatty acids, GPCR, and inflammatory bowel diseases.</a> J Gastroenterol. 52 (1), 1-8 (2017).</li>
<li>Cummings, J. H., Pomare, E. W., Branch, H. W. J., Naylor, C. P. E., MacFarlane, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+in+human+large+intestine%2C+portal%2C+hepatic+and+venous+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids in human large intestine, portal, hepatic and venous blood.</a> Gut. 28 (10), 1221-1227 (1987).</li>
<li>Macfarlane, G. T., Gibson, G. R., Cummings, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+fermentation+reactions+in+different+regions+of+the+human+colon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Comparison of fermentation reactions in different regions of the human colon.</a> J Appl Bacteriol. 72 (1), 57-64 (1992).</li>
<li>Neis, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+versus+proximal+intestinal+short-chain+fatty+acid+release+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Distal versus proximal intestinal short-chain fatty acid release in man.</a> Gut. 68 (4), 764-765 (2019).</li>
<li>Yamashita, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acetate+on+lipid+metabolism+in+muscles+and+adipose+tissues+of+type+2+diabetic+Otsuka+Long-Evans+Tokushima+Fatty+%28OLETF%29+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Biotechnol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Effects of acetate on lipid metabolism in muscles and adipose tissues of type 2 diabetic Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty (OLETF) Rats.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 73 (3), 570-576 (2009).</li>
<li>Ríos-Covián, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+short+chain+fatty+acids+and+their+ink+with+diet+and+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Intestinal short chain fatty acids and their ink with diet and human health.</a> Front Microbiol. 7, 185(2016).</li>
<li>Jaworska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+method+for+evaluating+the+gut-blood+barrier+and+liver+metabolism+of+microbiota+products%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo method for evaluating the gut-blood barrier and liver metabolism of microbiota products.</a> J Vis Exp. (140), e58456(2018).</li>
<li>Ashcroft, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+assess+arteriovenous+differences+across+the+liver+and+hindlimb+muscles+in+mice+following+treadmill+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to assess arteriovenous differences across the liver and hindlimb muscles in mice following treadmill exercise.</a> STAR Protoc. 4 (1), 101985(2023).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Cheever, A. W., Warren, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+vein+ligation+in+mice%3A+Portal+hypertension%2C+collateral+circulation%2C+and+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Portal vein ligation in mice: Portal hypertension, collateral circulation, and blood flow.</a> J Appl Physiol. 18, 405-407 (1963).</li>
<li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clin Nutr. 28 (6), 657-661 (2009).</li>
<li>Hoyles, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiome%E2%80%93host+systems+interactions%3A+Protective+effects+of+propionate+upon+the+blood%E2%80%93brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Microbiome–host systems interactions: Protective effects of propionate upon the blood–brain barrier.</a> Microbiome. 6 (1), 55(2018).</li>
<li>Shimizu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propionate-producing+bacteria+in+the+intestine+may+associate+with+skewed+responses+of+IL10-producing+regulatory+T+cells+in+patients+with+relapsing+polychondritis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Propionate-producing bacteria in the intestine may associate with skewed responses of IL10-producing regulatory T cells in patients with relapsing polychondritis.</a> PLoS One. 13 (9), e0203657(2018).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propionate+protects+against+lipopolysaccharide-induced+mastitis+in+mice+by+restoring+blood%E2%80%93milk+barrier+disruption+and+suppressing+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Propionate protects against lipopolysaccharide-induced mastitis in mice by restoring blood–milk barrier disruption and suppressing inflammatory response.</a> Front Immunol. 8, 1108(2017).</li>
<li>Lucas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-chain+fatty+acids+regulate+systemic+bone+mass+and+protect+from+pathological+bone+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Short-chain fatty acids regulate systemic bone mass and protect from pathological bone loss.</a> Nat Commun. 9 (1), 55(2018).</li>
<li>Xie, C., Wei, W., Zhang, T., Dirsch, O., Dahmen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+systemic+and+hepatic+hemodynamic+parameters+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Monitoring of systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice.</a> J Vis Exp. (92), e51955(2014).</li>
<li>Sänger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrahepatic+vascular+anatomy+in+rats+and+mice+-+Variations+and+surgical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intrahepatic vascular anatomy in rats and mice - Variations and surgical implications.</a> PLoS One. 10 (11), e0141798(2015).</li>
<li>Phillips, B. J., Mirzaie, M., Turco, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+Vein+Injuries%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Emerg+Trauma%22%5BJournal%5D)">Portal Vein Injuries: A Review.</a> J Emerg Trauma. 2 (2), 4(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,2,2 Tribromoetanolo, 97% (Avertin)</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>T48402-25G</td><td>Agente anestetico&nbsp;</td></tr><tr><td>Iniezione di buprenorfina cloridrato 0,3 mg/mL</td><td>PAR Pharmaceutical&nbsp;</td><td>NDC 42023-179-05</td><td>Agente analgesico</td></tr><tr><td>Pinza per medicazione</td><td>Miltex&nbsp;</td><td>6-100</td><td>dissezione&nbsp;</td></tr><tr><td>Graefe Forcipe</td><td>Roboz</td><td>RS-5136</td><td>Dissezione&nbsp;</td></tr><tr><td>Epatina sodica 1000 unità USP/mL</td><td>Hikma</td><td>NDC 0641-0391-12</td><td>Campione di sangue siringhe/provette eparinizzazione</td></tr><tr><td>Prolene 7-0</td><td>Ethicon</td><td>8696G</td><td>Legatura della vena portale</td></tr><tr><td>Forbici</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td>Dissezione&nbsp;</td></tr><tr><td>Emostatici per zanzare Halsted per studenti</td><td>F.S.T&nbsp;</td><td>91308-12</td><td>dissezione&nbsp;</td></tr><tr><td>Nastro chirurgico&nbsp;</td><td>3M Transpore</td><td>1527-1</td><td>Fissazione degli arti del topo</td></tr><tr><td>Siringa da insulina U-100 28G1/2</td><td>EXEL</td><td>26027</td><td>Raccolta di campioni di sangue&nbsp;</td></tr></tbody></table>

prelievo sequenziale di sangue dalla vena cava inferiore seguito da vena porta per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi

Sequential Blood Collection from Inferior Vena Cava Followed by Portal Vein to Evaluate Gut Microbial Metabolites in Mice

Utilizzando il metodo sopra descritto, possiamo raccogliere campioni di sangue dall'IVC e dal PV in sequenza nello stesso topo con un tasso di successo superiore al 95%. I volumi medi di campioni di sangue raccolti sono di 0,25 mL per l'IVC e di 0,35 mL per il PV.
Utilizzando la gascromatografia-spettrometria di massa (GC-MS), abbiamo misurato la concentrazione di SCFA nelle feci, nel sangue PV e nel sangue IVC e siamo stati quindi in grado di tracciare l'assorbimento e il transito di acetato (C2), propionato (C3) e butirrato (C4) dal compartimento del colon dove sono prodotti dalla fermentazione dei batteri intestinali, nella circolazione sistemica.
In particolare, in questi esperimenti, abbiamo studiato gli effetti dell'assunzione di fibre alimentari sulla produzione di SCFA nei topi. Abbiamo fornito ai topi una dieta ricca di fibre (35% di fibre) per 1 settimana o 2 settimane e li abbiamo confrontati con quelli alimentati con una dieta priva di fibre. Ci aspettavamo e abbiamo osservato un aumento dei taxa batterici che fermentano le fibre nei gruppi ad alto contenuto di fibre (dati non mostrati). Abbiamo poi esaminato il contenuto del colon, il sangue PV e il sangue circolante sistemico (IVC) per i livelli di SCFA (quantificati mediante GC-MS presso la Metabolomics Core Facility dell'Università del Michigan)3 (Figura 2). Mentre siamo stati in grado di rilevare un aumento consistente degli SCFA con esposizione alle fibre alimentari nei campioni PV, le misurazioni SCFA nei campioni fecali del colon erano molto più variabili da topo a topo rispetto alle misurazioni del sangue PV e IVC (materia fecale del colon rispetto al sangue PV/IVC per acetato, propionato e butirrato nella Figura 2). Questa variabilità può essere dovuta alla distribuzione non omogenea degli SCFA nella materia fecale o può riflettere un assorbimento variabile degli SCFA da parte dell'epitelio intestinale. Indipendentemente da ciò, ai fini dello studio degli effetti degli SCFA sulla fisiologia extra-intestinale dell'ospite, è probabile che i livelli all'interno del PV e nella circolazione periferica siano più rilevanti da studiare.
Confrontando i livelli di SCFA all'interno del PV con i livelli nel sangue dell'IVC sistemico, siamo stati anche in grado di osservare i livelli di assorbimento di acetato e propionato da parte del fegato (Figura 2A, B). La percentuale di acetato che rimane nel sangue sistemico (rispetto al PV) dopo il passaggio attraverso il fegato è superiore a quella del propionato (più del 50% dell'acetato PV è entrato nella circolazione periferica rispetto a meno del 30% per il propionato). Ciò è coerente con precedenti rapporti secondo cui il propionato viene assorbito o utilizzato dal fegato, con livelli più bassi che entrano nella circolazione sistemica, mentre l'acetato può essere assorbito o utilizzato in altri tessuti periferici, come il tessuto muscolare13,20 (Figura 2A, B). Tuttavia, il lavoro precedente di diversi gruppi ha dimostrato che i livelli di propionato che vengono assorbiti nella circolazione sistemica sono in grado di influenzare significativamente la fisiologia e la patologia in organi distanti 21,22,23,24.
Inoltre, abbiamo scoperto che le concentrazioni di butirrato sia nel PV che nel sangue sistemico erano molto più basse del propionato, sebbene le concentrazioni fecali di butirrato e propionato fossero abbastanza simili. Questi risultati hanno confermato il lavoro precedente secondo cui il butirrato generato dall'intestino nel colon è in gran parte assorbito e utilizzato localmente dagli epiteli intestinali. 11 (Figura 2C). 
Normalmente, durante la dissezione addominale, si osserva che le dimensioni del PV sono inferiori a quelle dell'IVC (Figura 3A). Tuttavia, dopo che la sutura attorno al PV è stata legata (a circa 4 mm inferiore all'ilo epatico) e il vaso è stato legato, il PV aumenta di dimensioni ed è quasi uguale in diametro alla dimensione originale dell'IVC prima della legatura PV (Figura 3B). Come si può vedere nella figura, l'IVC collassa leggermente dopo la legatura PV (Figura 3B). Nel complesso, questo approccio facilita la massima raccolta di sangue dal PV nei topi. Nella nostra esperienza, la raccolta del sangue PV prima e del sangue IVC poi ha prodotto risultati meno ottimali dei risultati. Questo perché abbiamo osservato un collasso significativo dell'IVC dopo la raccolta del sangue PV.
<img alt="Il diagramma di anatomia del fegato, legatura della vena porta, identifica l'ilo epatico, le vene spleniche e duodenali." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66673/66673fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1: Legatura PV. Una sutura viene fatta passare dietro il PV tra la vena duodenale e la vena splenica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66673/66673fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Grafico a scatola che illustra le variazioni dei metaboliti (C2, C3, C4) nelle feci, nel sangue, nel plasma attraverso l'assunzione di fibre." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66673/66673fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Figura 2: Concentrazione di acidi grassi a catena corta (SCFA) nelle feci, nel sangue della vena porta (PV) e nel sangue venoso sistemico. I livelli di SCFA sono stati misurati per tre diversi gruppi di topi sperimentali, tra cui dieta priva di fibre per 2 settimane (n=10 topi), ricca di fibre per 1 settimana (n=9 topi) e ricca di fibre per 2 settimane (n=7 topi). (a) acetato (C2), (b) propionato (C3) e (c) butirrato (C4). I livelli di SCFA nelle feci sono riportati come nM/mg (asse Y sinistro) del materiale fecale e nel plasma PV e della vena cava inferiore (IVC) come μM (asse Y destro). I dati nelle figure sono espressi come media ± SD. Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando analisi di Mann-Whitney non parametriche a 2 code. I valori di P &lt; 0,05 sono stati considerati significativi. I valori p sono rappresentati come segue: *p &lt; 0,05; **p &lt; 0,01; p &lt; 0,001; p &lt; 0,0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66673/66673fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Schema di chirurgia della legatura della vena porta; vasi etichettati come vena porta (PV) e vena cava inferiore (IVC)." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66673/66673fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Figura 3: La PV del topo si dilata e si espande dopo aver legato la legatura a 4 mm sotto l'ilo epatico. (A) PV e IVC prima della legatura PV; (B) PV e IVC dopo la legatura PV. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66673/66673fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Prelievo sequenziale di sangue dalla vena cava inferiore seguito da vena porta per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi

Gut microbial products are known to act both locally within the intestine and get absorbed into circulation, where their effects can extend to numerous ...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Questo film dimostra come acquisire l'emodinamica sistemica e epatici nei topi. L'intero controllo comprende l'acquisizione dei parametri vitali, pressione sanguigna sistemica, pressione venosa centrale, portata arteria epatica comune, e di pressione della vena porta e la portata portale in topi.

Monitoraggio della sistemici e epatica parametri emodinamici nei topi

L'accesso di nutrienti, microbiota metaboliti e farmaci per la circolazione è controllata dalla barriera intestinale-sangue (GBB). Descriviamo un metodo diretto per misurare la GBB permeabilità in vivo, che, contrariamente ai metodi indiretti comunemente usati, praticamente non è interessato dalle funzioni di fegato e rene.

Un metodo In Vivo per valutare la Gut-barriera e metabolismo epatico del Microbiota prodotti

Questo studio segnala il prelievo di sangue dalla vena caudale nei topi utilizzando un sistema di tubo di aspirazione con lente di ingrandimento per occhiali. Il nostro metodo è facile da praticare e poteva essere utilizzato per il campionamento di anima di ripetizione nei topi.

Raccolta del sangue modificate dalle vene di coda dei topi Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto e la lente di ingrandimento per occhiali

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Prelievo di sangue attraverso la puntura della vena subclavia nei topi

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Un modello di topi BLT a doppia umanizzata caratterizzato da un microbioma intestinale umano stabile e un sistema immunitario umano

La funzione di barriera epiteliale intestinale disregolata e le risposte immunitarie sono segni distintivi della malattia infiammatoria intestinale che rimangono scarsamente studiate a causa della mancanza di modelli fisiologici. Qui descriviamo un modello di loop intestinale del topo che impiega un segmento intestinale ben vascolarizzato ed esteriore per studiare la permeabilità della mucosa e il reclutamento di leucociti in vivo.

Valutazione funzionale della permeabilità intestinale e della migrazione transepiteliale neutrofila nei topi utilizzando un modello standardizzato di loop intestinale

Il protocollo descrive un metodo semplice di resezione di un fegato di topo intatto per studi metabolici attraverso la perfusione della vena porta.

Ex Vivo Perfusione epatica attraverso la vena porta nel topo

L'obiettivo qui è quello di delineare un protocollo per studiare i meccanismi della disbiosi nelle malattie cardiovascolari. Questo documento discute come raccogliere e trapiantare asetticamente campioni fecali murini, isolare l'intestino e utilizzare il metodo "Swiss-roll", seguito da tecniche di immunocolorazione per interrogare i cambiamenti nel tratto gastrointestinale.

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In questo protocollo, vengono descritti i metodi rilevanti per la metabolomica arterovenosa ottimizzata per BAT utilizzando GC-MS in un modello murino. Questi metodi consentono l'acquisizione di preziose informazioni sullo scambio di metaboliti mediati da BAT a livello di organismo.

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Qui, presentiamo un protocollo per una tecnica di raccolta del sangue ottimizzata in soggetti murini attraverso la venipuntura venosa facciale utilizzando una lancetta. Utilizziamo questa tecnica insieme alla valutazione citofluorimetrica per caratterizzare i fenotipi cellulari di ceppi transgenici, congenici e reporter. È adatto anche per l'analisi delle citochine sieriche e gli studi sul diabete.

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La puntura cardiaca della sottoclavia è un metodo semplice e affidabile per raccogliere sangue terminale nei topi. È facile da usare e garantisce campioni ad alta purezza.

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Impara il prelievo sequenziale di sangue dalla vena porta e dalla vena cava inferiore nei topi per valutare i metaboliti microbici intestinali. Questo metodo permette di misurare con precisione gli acidi grassi a catena corta nel sangue portale.

Prelievo sequenziale di sangue dalla vena cava inferiore seguito da vena porta per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi (Video) | JoVE Journal

Prelievo sequenziale di sangue dalla vena cava inferiore seguito da vena porta per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi

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