Name: Diagnosi post-mortem della rabbia negli animali mediante il test di reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in tempo reale LN34 aggiornato e multiplexato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Scopri il protocollo LN34 RT-PCR per la diagnosi post-mortem della rabbia nei campioni di tessuto cerebrale animale. Questo metodo multiplexato migliora l'accuratezza diagnostica e supporta gli sforzi di controllo della rabbia.

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<ol><li>Meechan, P. J., Potts, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeechan%2C+PJ+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. (2020).</li>
<li>Terrestrial Manual 2023. , World Organization for Animal Health. At
 <a target="_blank" href="https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals">https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals</a> (2023).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/handle/10665/310836">https://iris.who.int/handle/10665/310836</a> (2018).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 2, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1</a> (2019).</li>
<li>Genevie, R., et al. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , At
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf</a> (2003).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Expert+Consultation+on+Rabies%3A+Third+Report%22">WHO Expert Consultation on Rabies: Third Report</a>. , World Health Organization. Geneva. (2018).</li>
<li>Gigante, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-site+evaluation+of+the+LN34+pan-lyssavirus+real-time+RT-PCR+assay+for+postmortem+rabies+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for postmortem rabies diagnostics.</a> PLoS One. 13 (5), e0197074(2018).</li>
<li>Wadhwa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pan-Lyssavirus+Taqman+Real-Time+RT-PCR+assay+for+the+detection+of+highly+variable+rabies+virus+and+other+lyssaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR assay for the detection of highly variable rabies virus and other lyssaviruses.</a> PLoS Negl Trop Dis. 11 (1), e0005258(2017).</li>
<li>Gigante, C. M., Wicker, V., Wilkins, K., Seiders, M., Zhao, H., Patel, P., Orciari, L., Condori, R. E., Dettinger, L., Yager, P., Xia, D., Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+pan-lyssavirus+LN34+assay+for+streamlined+rabies+diagnostics+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of pan-lyssavirus LN34 assay for streamlined rabies diagnostics by real-time RT-PCR.</a> Journal Virological Methods. , In press (2024).</li>
<li>Rao, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+modified+preexposure+prophylaxis+vaccination+schedule+to+prevent+human+rabies%3A+recommendations+of+the+advisory+committee+on+immunization+practices-United+States%2C+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Use of a modified preexposure prophylaxis vaccination schedule to prevent human rabies: recommendations of the advisory committee on immunization practices-United States, 2022.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 71 (18), 619(2022).</li>
<li>Condori, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+LN34+Pan-Lyssavirus+Real-Time+RT-PCR+assay+for+rabies+diagnosis+and+rapid+genetic+typing+from+formalin-fixed+human+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Using the LN34 Pan-Lyssavirus Real-Time RT-PCR assay for rabies diagnosis and rapid genetic typing from formalin-fixed human brain tissue.</a> Viruses. 12 (1), 120(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7500 Veloce</td><td>Biosistemi applicati</td><td>N/A</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr><tr><td>7500 Fast Dx&nbsp;</td><td>Biosistemi applicati</td><td>N/A</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr><tr><td>ABI ViiA 7</td><td>Biosistemi applicati</td><td>N/A</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr><tr><td>Kit RT-PCR One-Step AgPath-ID &nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM1005</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr><tr><td>Beadbug6</td><td>Benchmark Scientific</td><td>D1036</td><td></td></tr><tr><td>Kit Direct-zol RNA MiniPrep &nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>R2052</td><td></td></tr><tr><td>Perline verdi MagNA Lyser&nbsp;</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuga</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>5425 R</td><td></td></tr><tr><td>Piastre di reazione ottiche a 96 pozzi</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>Coperchi adesivi ottici</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4311971</td><td>Alternativa: caps</td></tr><tr><td>Applicatore con punta in fibra di poliestere e tamponi &nbsp;</td><td>Tampone di applicazione in fibra di poliestere BD BBL</td><td>220690</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6Flex</td><td>Biosistemi applicati</td><td>4485691</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr><tr><td>Disinfettante ammonico quaternario (1:256)</td><td>LYSOL</td><td>WBB56939</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr><tr><td>RNase AWAY</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>7002PK</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi monouso, bisturi con meccanismo di sicurezza &nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>Tubi microcentrifughe sterili al polipropilene (1,5 mL), privi di nucleasi</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Tubi microcentrifughe sterili al polipropilene (2 mL), prive di nucleasi</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.600</td><td></td></tr><tr><td>Reagente Trizol</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>15596026</td><td>Non sostituire senza validazione</td></tr></tbody></table>

diagnosi post-mortem della rabbia negli animali mediante il test di reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in tempo reale ln34 aggiornato e multiplexato

Postmortem Diagnosis of Rabies in Animals by the Updated, Multiplexed LN34 Real-Time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay

Diagnosi post-mortem della rabbia negli animali mediante il test di reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in tempo reale LN34 aggiornato e multiplexato

Rabies is a fatal zoonotic disease caused by Lyssavirus rabies (RABV) and related negative strand RNA viruses from the Lyssavirus genus (family ...

postmortem-diagnosis-rabies-animals-updated-multiplexed-ln34-real

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Biology

Biologia

Il test immunohistochimico rapido diretto (DRIT) offre un'Organizzazione Mondiale per la Salute Animale e l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OIE/OMS) riconosciuta alternativa al test di anticorpo fluorescente diretto (DFA) per la diagnosi della rabbia. Questo test consente di applicazioni sul campo che possono essere eseguite in circa 1 h su impronte cerebrali utilizzando la microscopia leggera.

Sorveglianza della rabbia migliorata utilizzando un test immunoistochimico rapido diretto

È stata sviluppata una reazione a catena della polimerasi della trascrizione inversa nidificata di Pan-Lyssavirus per rilevare in modo specifico tutti i Lyssaviruses conosciuti. La validazione utilizzando campioni di cervello di rabbia di diverse specie animali ha mostrato che questo metodo ha una sensibilità e una specificità equivalenti al test anticorpale fluorescente standard oro e potrebbe essere utilizzato per la diagnosi di rabbia di routine.

Valutazione di una reazione a catena della polimerasi di trascrizione inversa nidificata universale per la rilevazione di Lyssaviruses

L'obiettivo di questo protocollo è quello di dimostrare tecniche di necroscopia sicure in animali piccoli e grandi per ottenere campioni di tessuto soddisfacenti per i test sulla rabbia.

Tecniche di necropsia della rabbia negli animali grandi e piccoli

Questo RT-PCR in tempo reale utilizzando dsDNA tintura intercalating è adatto per diagnosticare le infezioni da lyssavirus. Il metodo inizia con l'RNA estratto dalla rabbia sospetti campioni ante mortem o post-mortem, dettagliando la preparazione del mix master, l'aggiunta di RNA, l'impostazione della macchina in tempo reale e la corretta interpretazione dei risultati.

Pan-lyssavirus in tempo reale RT-PCR per la diagnosi di rabbia

Presentiamo un protocollo completo per la diagnosi post-mortem della rabbia animale in condizioni di campo utilizzando un rapido test diagnostico immunocromatico (RIDT), dal campionamento della biopsia cerebrale all'interpretazione finale. Descriviamo anche ulteriori applicazioni utilizzando il dispositivo per l'analisi molecolare e la genotipizzazione virale.

Test diagnostico immunocromatico rapido sulla rabbia sul campo per impostazioni limitate alle risorse con ulteriori applicazioni molecolari

Qui, presentiamo un protocollo di test immunoistochimico per la rilevazione dell'antigene del virus della rabbia come test diagnostico alternativo per i tessuti fissati alla formalina.

Test immunoistochimico per il rilevamento dell'antigene del lyssavirus da tessuti fissati con formalina

Questo protocollo presenta un approccio basato su qRT-PCR per determinare il numero di copia genica della nucleoproteina del virus della rabbia (N) all'interno di varie strutture anatomiche cerebrali bovine utilizzando la trascrizione in vitro.

Quantificazione del virus della rabbia in varie strutture cerebrali bovine

Il Solaris qPCR saggi di espressione genica sono nuovi pre-progettati qPCR primer / sonda combinazioni progettato per semplificare il processo di qPCR senza sacrificare la specificità e la robustezza del test.

Quantitativa Real-Time PCR utilizzando il Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Quantitativa real-time PCR (QRT-PCR) è un efficace strumento per diagnosticare i livelli di mRNA nei tessuti degli insetti diversi e fasi di sviluppo. In questo rapporto si mostra l'uso di qRT-PCR per accertare i livelli di mRNA in diversi tessuti larvali e gli stadi di sviluppo delle specie di insetti invasivi, smeraldo piralide cenere.

Analisi dell&#39;espressione genica in Borer Emerald Ash ( Agrilus planipennis) Utilizzando quantitativa Real Time-PCR

PCR è emerso come una tecnica comune in molti laboratori di biologia molecolare. A condizione: ecco un breve resoconto di diversi protocolli convenzionali di PCR. Poiché ogni reazione è un esperimento unico, condizioni ottimali richiesti per generare un prodotto variare. Comprendere le variabili in una reazione permetterà di migliorare notevolmente l'efficienza di risoluzione dei problemi, aumentando così la possibilità di ottenere il risultato desiderato.

Polymerase Chain Reaction: protocollo Basic Plus Strategies Risoluzione dei problemi e ottimizzazione

Scopri il protocollo LN34 RT-PCR per la diagnosi post-mortem della rabbia nei campioni di tessuto cerebrale animale. Questo metodo multiplexato migliora l'accuratezza diagnostica e supporta gli sforzi di controllo della rabbia.

Diagnosi post-mortem della rabbia negli animali mediante il test di reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in tempo reale LN34 aggiornato e multiplexato (Video) | JoVE Journal

Diagnosi post-mortem della rabbia negli animali mediante il test di reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in tempo reale LN34 aggiornato e multiplexato

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