Name: Trasferimento mitocondriale tramite nanotubi di tunneling tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T13:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Scopri il trasferimento mitocondriale bidirezionale tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico ARPE19 tramite nanotubi di tunneling. Questo metodo in vitro aiuta a comprendere i meccanismi di comunicazione cellulare.

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<meta charset="utf8"></head><body>Studio del trasferimento mitocondriale nelle co-colture MSC e ARPE19

<ol><li>Caprara, C., Grimm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+oxygen+to+erythropoietin%3A+Relevance+of+hypoxia+for+retinal+development%2C+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">From oxygen to erythropoietin: Relevance of hypoxia for retinal development, health and disease.</a> Prog Retin Eye Res. 31 (1), 89-119 (2012).</li>
<li>Ferrington, D. A., Fisher, C. R., Kowluru, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+defects+drive+degenerative+retinal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial defects drive degenerative retinal diseases.</a> Trends Mol Med. 26 (1), 105-118 (2020).</li>
<li>Spees, J. L., Olson, S. D., Whitney, M. J., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+between+cells+can+rescue+aerobic+respiration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer between cells can rescue aerobic respiration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1283-1288 (2006).</li>
<li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+from+bone+mesenchymal+stem+cells+protects+against+tendinopathy+both+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer from bone mesenchymal stem cells protects against tendinopathy both in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Res Ther. 14 (1), 104(2023).</li>
<li>Borcherding, N., Brestoff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+power+and+potential+of+mitochondria+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The power and potential of mitochondria transfer.</a> Nature. 623 (7986), 283-291 (2023).</li>
<li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+mitochondrial+transfer+as+a+means+of+tissue+revitalization%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Intercellular mitochondrial transfer as a means of tissue revitalization.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 65(2021).</li>
<li>Rustom, A., Saffrich, R., Markovic, I., Walther, P., Gerdes, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotubular+highways+for+intercellular+organelle+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Nanotubular highways for intercellular organelle transport.</a> Science. 303 (5660), 1007-1010 (2004).</li>
<li>Cordero Cervantes, D., Zurzolo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peering+into+tunneling+nanotubes-the+path+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+j%22%5BJournal%5D)">Peering into tunneling nanotubes-the path forward.</a> Embo j. 40 (8), e105789(2021).</li>
<li>Qin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functions%2C+methods%2C+and+mobility+of+mitochondrial+transfer+between+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">The functions, methods, and mobility of mitochondrial transfer between cells.</a> Front Oncol. 11, 672781(2021).</li>
<li>Jiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+crosstalk+between+mesenchymal+stem+cells+and+various+ocular+cells+through+the+intercellular+trafficking+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic crosstalk between mesenchymal stem cells and various ocular cells through the intercellular trafficking of mitochondria.</a> Theranostics. 10 (16), 7260-7272 (2020).</li>
<li>Domhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+communication+by+exchange+of+cytoplasmic+material+via+tunneling+nano-tube+like+structures+in+primary+human+renal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intercellular communication by exchange of cytoplasmic material via tunneling nano-tube like structures in primary human renal epithelial cells.</a> PLoS One. 6 (6), e21283(2011).</li>
<li>Zhang, J., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+nanotubes%3A+Novel+communication+between+distant+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Membrane nanotubes: Novel communication between distant cells.</a> Sci China Life Sci. 56 (11), 994-999 (2013).</li>
<li>Cheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ipscs+derived+astrocytes+rescue+rotenone-induced+mitochondrial+dysfunction+and+dopaminergic+neurodegeneration+in+vitro+by+donating+functional+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Human ipscs derived astrocytes rescue rotenone-induced mitochondrial dysfunction and dopaminergic neurodegeneration in vitro by donating functional mitochondria.</a> Transl Neurodegener. 9 (1), 13(2020).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+regulates+intercellular+mitochondrial+transport+%26+enhances+mesenchymal+stem+cell+rescue+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Miro1 regulates intercellular mitochondrial transport & enhances mesenchymal stem cell rescue efficacy.</a> Embo J. 33 (9), 994-1010 (2014).</li>
<li>Li, C. J., Chen, P. K., Sun, L. Y., Pang, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+mitochondrial+transfer+by+antioxidants+in+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Enhancement of mitochondrial transfer by antioxidants in human mesenchymal stem cells.</a> Oxid Med Cell Longev. 2017, 8510805(2017).</li>
<li>Paliwal, S., Chaudhuri, R., Agrawal, A., Mohanty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+abilities+of+mesenchymal+stem+cells+through+mitochondrial+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Regenerative abilities of mesenchymal stem cells through mitochondrial transfer.</a> J Biomed Sci. 25 (1), 31(2018).</li>
<li>Lin, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+of+wharton%27s+jelly+mesenchymal+stem+cells+eliminates+mutation+burden+and+rescues+mitochondrial+bioenergetics+in+rotenone-stressed+melas+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer of wharton's jelly mesenchymal stem cells eliminates mutation burden and rescues mitochondrial bioenergetics in rotenone-stressed melas fibroblasts.</a> Oxid Med Cell Longev. 2019, 9537504(2019).</li>
<li>Hu, X., Duan, T., Wu, Z., Xiong, Y., Cao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+mitochondria+transfer%3A+A+new+perspective+for+the+treatment+of+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Biophys+Sin+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">Intercellular mitochondria transfer: A new perspective for the treatment of metabolic diseases.</a> Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 53 (7), 958-960 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25% Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>4% paraformaldeide</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 6 pozzetti</td><td>NEST</td><td>703001</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per centrifuga da 15 mL</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzetti</td><td>NEST</td><td>702001</td><td></td></tr><tr><td>Celle ARPE19</td><td>ATCC</td><td>CRL-2302</td><td>Linee cellulari</td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Beyotime</td><td>ST025</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace violet</td><td>Invitrogen</td><td>C34557</td><td></td></tr><tr><td>Vetrino</td><td>di copertura NEST</td><td>801007</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>C141905005BT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12-GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10565-042</td><td></td></tr><tr><td>Fetale Bovino Siero (FBS)</td><td>VivaCell</td><td>C04002-500</td><td></td></tr><tr><td>FluorSave Reagente</td><td>Millipore</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>MSC</td><td>Nuwacell</td><td>RC02003</td><td>Linee cellulari</td></tr><tr><td>ncMission</td><td>Shownin</td><td>RP02010</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>pCT-Mito-GFP</td><td>SBI</td><td>CYTO102-PA-1</td><td>Plasmide; Inserisci i tuoi dati&nbsp; https://www.systembio.com/mitochondria-cyto-tracer-pct-mito-gfp-cmv</td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>MCE</td><td>HY-B1743A</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta</td><td>Axygen</td><td>TF-1000-R-S</td><td></td></tr><tr><td>Falloidina</td><td>Invitrogen</td><td>A22287</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Piastra Transwell</td><td>Corning</td><td>3470</td><td></td></tr></tbody></table>

trasferimento mitocondriale tramite nanotubi di tunneling tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico in vitro

Mitochondrial Transfer Via Tunneling Nanotubes Between Mesenchymal Stem Cells and Retinal Pigment Epithelium In Vitro

Il diagramma schematico che illustra la co-coltura diretta di cellule staminali mesenchimali (MSC) e cellule ARPE19 è illustrato nella Figura 1. Le MSC, ingegnerizzate per esprimere la mito-GFP, come cellule donatrici e le cellule ARPE19-mito-RFP con membrane citoplasmatiche marcate in viola come cellule riceventi sono state co-coltivate con un rapporto di 1:1. Dopo un periodo di co-coltura di 24 ore, le cellule sono state colorate per la falloidina ed esaminate utilizzando la microscopia confocale. Le popolazioni cellulari risultanti includevano cellule MSC-mito-GFP, cellule ARPE19-mito-RFP, cellule ARPE19-mito-RFP contenenti mito-GFP e cellule MSC-mito-GFP contenenti mito-RFP. In particolare, la presenza di mito-GFP nelle cellule ARPE19 e di mito-RFP nelle MSC suggerisce il trasferimento bidirezionale mitocondriale.
I dettagli specifici della formazione di TNT sono presentati nella Figura 2. Queste strutture possono stabilire connessioni intercellulari tra cellule dello stesso tipo (Figura 2A-C), così come tra cellule di tipi diversi (Figura 2D). I nanotubi a effetto tunnel (TNT) fungono da condotti che collegano le cellule adiacenti, esibendo una caratteristica struttura di membrana ricca di F-actina con estremità aperte che facilitano la continuità citoplasmatica e il trasporto dei mitocondri. Utilizzando l'imaging dell'asse Z, è evidente che i TNT non sono saldamente ancorati alla matrice extracellulare, ma piuttosto sospesi all'interno del terreno di coltura, distinguendoli così dalle sporgenze cellulari convenzionali. Il trasferimento mitocondriale è evidente nella Figura 3, dove le cellule ARPE19 viola-positive mostrano una fluorescenza dispersa e punteggiata di verde, indicativa di mitocondri originati da MSC (Figura 3A). Le MSC viola-negative contenenti fluorescenza a punti rossi rappresentano il trasferimento mitocondriale dalle cellule ARPE19 (Figura 3B). La Figura 4 mostra la formazione di TNT e il trasferimento mitocondriale con imaging a super-risoluzione, da cui possiamo vedere maggiori dettagli sul trasferimento mitocondriale tramite TNT. Il video 1 mostra la dinamica del trasporto mitocondriale attraverso il TNT.
Per dimostrare ulteriormente che il prerequisito per il trasferimento mitocondriale è il contatto fisico, come il TNT, piuttosto che la secrezione e l'assorbimento mitocondriale, abbiamo utilizzato un metodo di co-coltura precedentemente riportato10. Come mostrato nella Figura 5A, le cellule MSC e ARPE19 sono state seminate rispettivamente nella camera superiore e inferiore di una piastra transwell. Erano separati da un filtro con pori da 0,4 μm, che bloccava il contatto diretto tra le MSC e le cellule ARPE19 ma permetteva il passaggio dei mitocondri. Dopo 24 ore di co-coltura, le cellule ARPE19 nella camera inferiore sono state analizzate e una piccola mito-GFP è stata osservata dalle MSC nella camera superiore (Figura 5B). Questi risultati suggeriscono che il trasferimento mitocondriale richiede il contatto diretto tra le MSC e le cellule ARPE19.
Infine, è stata condotta la quantificazione della formazione di TNT e del trasferimento mitocondriale, con i risultati corrispondenti illustrati nella Figura 6. Le MSC erano significativamente più capaci di donare mitocondri rispetto alle cellule ARPE19 (p = 0,0286). Questi risultati indicano che le MSC possiedono la capacità di trasferire i mitocondri alle cellule epiteliali pigmentate retiniche.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig01.jpg"> Figura 1: Vista schematica della co-coltura di MSC e cellule ARPE19. Le MSC che esprimono cellule mito-GFP e ARPE19-mito-RFP marcate con CellTrace Violet sono co-coltivate per 24 ore con un rapporto di 1:1. La mito-GFP nelle cellule viola+ segna il trasferimento dei mitocondri dalle MSC alle cellule ARPE19, mentre la mito-RFP nelle cellule viola segna il trasferimento dei mitocondri dalle cellule ARPE19 alle MSC. Abbreviazioni: GFP = proteina fluorescente verde; RFP = proteina fluorescente rossa; MSCs = cellule staminali mesenchimali. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig02.jpg"> Figura 2: Formazione di TNT tra MSC e cellule ARPE19. Le punte di freccia bianche indicano la formazione di TNT, le punte di freccia verdi indicano i mitocondri con mito-GFP e le punte di freccia rosse indicano i mitocondri con mito-RFP. (A,B) Formazione di TNT tra le cellule ARPE19. (C) Formazione di TNT tra MSC. (D) Formazione di TNT tra MSC e cellule ARPE19. Imaging dell'asse Z che mostra TNT sospesi nel terreno di coltura. Barre di scala = 25 μm. Abbreviazioni: MSC = cellule staminali mesenchimali; TNT = nanotubi a effetto tunnel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig03.jpg"> Figura 3: Trasferimento mitocondriale dalle MSC alle cellule ARPE19. (A) Il cerchio tratteggiato bianco indica il trasferimento mitocondriale (mito-GFP) dalle MSC alle cellule ARPE19 e (B) il cerchio tratteggiato giallo indica il trasferimento mitocondriale (mito-RFP) dalle cellule ARPE19 alle MSC. Barre della scala = 20 μm. Abbreviazione: GFP = proteina fluorescente verde; RFP = proteina fluorescente rossa; MSCs = cellule staminali mesenchimali. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig04.jpg"> Figura 4: Formazione di TNT e trasferimento mitocondriale tra MSC e cellule ARPE19 mediante microscopia a super-risoluzione. (A e B) Trasporto mitocondriale dalle MSC alle cellule ARPE19. (C) Dettaglio dei TNT sotto imaging a super-risoluzione. (D) Mitocondri verdi da MSC presenti nelle cellule ARPE19 all'imaging a super-risoluzione. Barra di scala = 5 μm. Abbreviazioni: MSC = cellule staminali mesenchimali; TNT = nanotubi a effetto tunnel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig05.jpg"> Figura 5: Trasferimento mitocondriale quasi non rilevabile in co-coltura indiretta in un sistema transwell di MSC e cellule ARPE19. (A) Vista schematica della co-coltura di MSCs e cellule ARPE19 in un sistema transwell. (B) Immagini rappresentative delle cellule ARPE19 nella parte inferiore della piastra transwell dopo co-coltura indiretta con MSC per 24 ore. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig06.jpg"> Figura 6: Quantificazione della formazione di TNT e del trasferimento mitocondriale. (A) formazione di TNT, (B) trasferimento mitocondriale. Abbreviazioni: M = MSCs = cellule staminali mesenchimali; A = celle ARPE19; TNTs = nanotubi a effetto tunnel; M-A = formazione di TNT tra le MSC e le cellule ARPE19; M-M = formazione di TNT tra le MSC; A-A = Formazione di TNT tra le cellule ARPE19. n = 4, media ± SD, test U di Mann-Whitney, *p &lt; 0,05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig06large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Figura S1 supplementare: Mappatura del plasmide pCT-Mito-copGFP. Mito-GFP (CYTO102-PA-1) è stato acquistato. Il cito-tracciante dei mitocondri, pCT-Mito-GFP (CMV), si fonde con copGFP tramite un tag Cox8, determinando la marcatura dei mitocondri con copGFP. Questa fusione copGFP è guidata dal promotore CMV, consentendo una robusta espressione in linee cellulari come HeLa, HEK293 e HT1080. Mito-RFP è stato modificato da mito-GFP sostituendo GFP con RFP; porta un gene di resistenza alla puromicina. Il confezionamento lentivirale di questo plasmide viene effettuato da aziende specializzate. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917_Supplementary%20figure.zip" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Video 1: Trasporto mitocondriale mediato da TNT tra MSC e cellule ARPE19. Il TNT viene generato attraverso il movimento bidirezionale delle cellule MSC e ARPE19, facilitando il trasferimento dei mitocondri dalle cellule MSC alle cellule ARPE19. Abbreviazioni: MSC = cellule staminali mesenchimali; TNT = nanotubi a effetto tunnel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917_TNT_Video.zip" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>

Trasferimento mitocondriale tramite nanotubi di tunneling tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico in vitro

Mitochondrial transfer is a normal physiological phenomenon that occurs widely among various types of cells. In the study to date, the most important ...

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L&#39;impianto di Ferumoxides etichetta cellule staminali mesenchimali in difetti della cartilagine

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Scopri il trasferimento mitocondriale bidirezionale tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico ARPE19 tramite nanotubi di tunneling. Questo metodo in vitro aiuta a comprendere i meccanismi di comunicazione cellulare.

Trasferimento mitocondriale tramite nanotubi di tunneling tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico in vitro (Video) | JoVE Journal

Trasferimento mitocondriale tramite nanotubi di tunneling tra cellule staminali mesenchimali ed epitelio pigmentato retinico in vitro

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