Identificazione di rare cellule T antigene-specifiche da polmoni di topo con tetrameri del complesso peptide:istocompatibilità maggiore
July 19th, 2024
Forniamo un protocollo dettagliato per l'isolamento e l'identificazione di rare popolazioni di cellule T antigene-specifiche nei polmoni di topo attraverso l'arricchimento di cellule T basato su biglie magnetiche e i tetrameri peptide:complesso maggiore di istocompatibilità (MHC).
Il nostro laboratorio studia lo sviluppo delle cellule T CD4 in diversi contesti di tolleranza e immunità. In tutti i nostri progetti, siamo principalmente interessati a come l'esposizione all'antigene guida lo sviluppo di sottogruppi fenotipici di cellule T che stabiliscono una memoria immunitaria in grado di migliorare la tolleranza a se stessa o l'immunità contro i patogeni. Recentemente ci siamo concentrati sullo sviluppo di sottogruppi di cellule T regolatorie e di memoria che risiedono nel tessuto polmonare.
Queste cellule T residenti nei tessuti svolgono un ruolo importante nel rafforzare la tolleranza agli autoantigeni durante il danno tissutale o nel promuovere le risposte infiammatorie ai patogeni durante la reinfezione. Il nostro laboratorio è specializzato nello studio diretto di cellule T antigene-specifiche, ma anche di reagenti tetrameri MHC peptidici personalizzati. Questo ci permette di studiare queste cellule T senza l'uso di modelli transgenici TCR o altre manipolazioni sperimentali che sono note per causare artefatti sperimentali.
Sebbene possiamo facilmente identificare le cellule T antigene-specifiche con i tetrameri, queste cellule T sono spesso presenti a frequenze molto basse, in particolare quando sono in uno stato naïve o di memoria. È anche difficile isolare queste cellule T dai tessuti non linfoidi dove spesso risiedono a seguito di una risposta immunitaria. Sebbene esistano diversi protocolli consolidati per isolare le cellule T dai polmoni di topo, il protocollo che presentiamo qui è stato ottimizzato per la successiva rilevazione di cellule T antigene-specifiche a bassa frequenza mediante colorazione con tetramero.
All'interno di questo protocollo, abbiamo incluso anche due opzioni per l'associazione dei tessuti per accogliere meglio le risorse della biblioteca. Il nostro protocollo aiuterà i ricercatori ad espandere l'uso dei tetrameri alle cellule T antigene-specifiche nel tessuto polmonare. Ciò porterà a studi in vivo più potenti sullo sviluppo e la funzione delle cellule T di memoria residenti nei tessuti, che sono argomenti di intenso interesse nel campo.
Panoramica
Questo studio presenta un protocollo dettagliato per isolare e identificare popolazioni di cellule T specifiche per l'antigene rare nei polmoni dei topi. La metodologia utilizza l'arricchimento delle cellule T basato su perline magnetiche e tetrameri peptide:complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) per facilitare questo processo.
Componenti chiave dello studio
Area della scienza
- Immunologia
- Biologia delle cellule T
- Ricerca traslazionale
Sfondo
- Il laboratorio si concentra sullo sviluppo delle cellule T CD4 in vari contesti di tolleranza e immunità.
- La ricerca enfatizza come l'esposizione all'antigene influenzi i sottogruppi fenotipici delle cellule T.
- I sottogruppi di cellule T regolatorie e di memoria nel tessuto polmonare sono di particolare interesse.
- Le cellule T residenti nel tessuto sono cruciali per mantenere la tolleranza e rispondere agli agenti patogeni.
Obiettivo dello studio
- Isolare e identificare le cellule T specifiche per l'antigene nel tessuto polmonare.
- Comprendere il ruolo di queste cellule T nella memoria immunitaria e nella tolleranza.
- Utilizzare reagenti personalizzati di tetrameri peptidici MHC per uno studio diretto senza artefatti sperimentali.
Metodi utilizzati
- Arricchimento delle cellule T basato su perline magnetiche.
- Tecnologia dei tetrameri peptide:complesso maggiore di istocompatibilità (MHC).
- Isolamento delle popolazioni di cellule T dai polmoni dei topi.
- Analisi dei fenotipi e delle funzioni delle cellule T.
Risultati principali
- Isolamento riuscito di rare popolazioni di cellule T specifiche per l'antigene.
- Identificazione dei sottogruppi di cellule T che contribuiscono alle risposte immunitarie.
- Incontri sul ruolo delle cellule T residenti nei polmoni nella tolleranza e nell'immunità.
- Validazione della metodologia per studiare le cellule T senza artefatti.
Conclusioni
- Il protocollo consente uno studio efficace delle cellule T specifiche per l'antigene nel tessuto polmonare.
- I risultati migliorano la comprensione dei ruoli delle cellule T nella memoria immunitaria e nella tolleranza.
- L'approccio può essere applicato a vari studi immunologici.
Domande frequenti
Chapters in this video
0:00
Introduction
2:08
Generating Single‐Cell Suspension from Lung Tissue for Identifying Rare Antigen‐Specific T‐Cell Populations
5:25
Enriching the Lung Sample for T Cells via Magnetic Bead Enrichment
7:40
Staining the Antigen‐Specific T Cells with Peptide:MHC Tetramers for Flow Cytometry Analysis and Sorting
