Name: Tecnica per la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Impara la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina per studiare la propagazione prion-like nel bulbo olfattivo di un modello murino di Parkinson. Questo metodo non chirurgico permette di valutare la progressione patologica nel tempo.

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<meta charset="utf8"></head><body>Propagazione della α-sinucleina: somministrazione intranasale nella malattia di Parkinson

<ol><li>Tysnes, O. B., Storstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).</li>
<li>Goedert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+and+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases.</a> Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).</li>
<li>Conway, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+oligomerization%2C+not+fibrillization%2C+is+a+shared+property+of+both+alpha-synuclein+mutations+linked+to+early-onset+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).</li>
<li>Braak, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+brain+pathology+related+to+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).</li>
<li>Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Parkinson%27s+disease%3A+possible+routes+by+which+vulnerable+neuronal+types+may+be+subject+to+neuroinvasion+by+an+unknown+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen.</a> J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKordower%2C+JH+%22Nat+Med%22">Nat Med</a>. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+%CE%B1-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338, 949-953 (2012).</li>
<li>Desplats, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+disease+primate+model+with+%CE%B1-Synuclein+propagation+from+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb.</a> Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+into+the+mouse+gastrointestinal+tract+induces+Lewy+body-like+aggregates+in+the+brainstem+via+the+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+transneuronal+propagation+of+alpha-synucleinopathy+triggered+in+olfactory+bulb+mimics+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease.</a> J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+aggregates+after+olfactory+bulb+injection+of+%CE%B1-synuclein+fibrils+is+associated+with+early+neuronal+loss+and+is+reduced+long+term%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term.</a> Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+spread+from+olfactory+bulb+causes+hyposmia%2C+anxiety%2C+and+memory+loss+in+BAC-SNCA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice.</a> Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).</li>
<li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+pathology+involves+the+olfactory+cells+in+Parkinson%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders.</a> Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>De Luca, C. M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+RT-QuIC+seeding+activity+for+%CE%B1-synuclein+in+olfactory+mucosa+samples+of+patients+with+Parkinson%27s+disease+and+multiple+system+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy.</a> Transl Neurodegener. 8, 24(2019).</li>
<li>Stefani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+seeds+in+olfactory+mucosa+of+patients+with+isolated+REM+sleep+behaviour+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder.</a> Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).</li>
<li>Ucciferri, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+central+nervous+system+inflammation%2C+demyelination%2C+and+axon+injury+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (204), e65738(2024).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+%CE%B1-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-dose+intranasal+administration+of+%CE%B1-syn+PFFs+induce+lewy+neurite-like+pathology+in+olfactory+bulbs%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsonism+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs.</a> Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).</li>
<li>Guo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+administration+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+triggers+microglial+iron+deposition+in+the+substantia+nigra+of+Macaca+fascicularis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis.</a> Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).</li>
<li>Macdonald, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+%CE%B1-synuclein+and+neurodegeneration+in+the+central+nervous+system+of+heterozygous+M83+mice+following+the+peripheral+administration+of+%CE%B1-synuclein+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds.</a> Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).</li>
<li>Abdelmotilib, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+fibril-induced+inclusion+spread+in+rats+and+mice+correlates+with+dopaminergic+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).</li>
<li>Tarutani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fragmented+pathogenic+%CE%B1-Synuclein+seeds+on+prion-like+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation.</a> J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).</li>
<li>Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal model for prodromal Parkinson's disease.</a> Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).</li>
<li>Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+removal+and+inactivation+of+alpha-Synuclein+assemblies+from+laboratory+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials.</a> J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).</li>
<li>Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+efficacy+of+different+procedures+that+remove+and+disassemble+alpha-synuclein%2C+tau+and+A-beta+fibrils+from+laboratory+material+and+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces.</a> Sci Rep. 8, 10788(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microscopio a fluorescenza all-in-one BZ-X710</td><td>KEYENCE</td><td>N/A</td><td>MICROSCOPIO all-in-one</td></tr><tr><td>Ampicillina Sale di sodio</td><td>Nacalai tesque</td><td>02739-32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor II</td><td>Sonicbio BR2006A</td><td>Sonicbio Sonicatore a bagno d'acqua.</td><td></td></tr><tr><td>Butorfanolo tartrato</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>WAK-52850</td><td></td></tr><tr><td>Provetta di cellulosa</td><td>MISUMI</td><td>UC20-32-100</td><td></td></tr><tr><td>DeepWellMaximizer</td><td>TAITEC</td><td>MBR-022UP</td><td>Shaker</td></tr><tr><td>DynaCompetent Cells Zip BL21(DE3)</td><td>BioDynamics Laboratory Inc.</td><td>DS255</td><td>Cellula competente</td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107961</td><td>Terreno di montaggio rapido per microscopia</td></tr><tr><td>Graefe Forcipe extra fine Curvo seghettato</td><td>FST</td><td>11152-10&nbsp;</td><td>forcipe</td></tr><tr><td>Forbici fini indurite</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>forbici</td></tr><tr><td>Histofine Topo a colorazione semplice MAX-PO (R)</td><td>Nichirei Bioscience</td><td>414341</td><td>Polimero universale di immuno-perossidasi, anti-coniglio</td></tr><tr><td>ImageJ ver 1.52p</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://imagej.net/</td></tr> <tr><td>innova4200</td><td>New Brunswick scientific</td><td>9105085</td><td>Incubator shaker</td></tr><tr><td>Isopropyl-&beta;- D-tiogalattopiranoside</td><td>Nacalai tesque</td><td>19742-94</td><td></td></tr><tr><td>LB brodo, Lennox</td><td>Nacalai tesque</td><td>20066-24</td><td></td></tr><tr><td>Leica EG 1150 H</td><td>Leica</td><td>14 0388 86 108</td><td>Centro modulare per l'inclusione dei tessuti</td></tr><tr><td>Leica TP 1020</td><td>Leica</td><td>14 0422 85108</td><td>Elaboratore automatico di tessuti&nbsp;</td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Fuji Film</td><td>135-17473</td><td></td></tr><tr><td>Microm HM325 Microtomo rotante</td><td>Thermo Scientific</td><td>902100</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Seiyaku</td><td>4987-211-76210-0</td><td></td></tr><tr><td>Nuova ematossilina Tipo G</td><td>Muto</td><td>65-9197-38</td><td>Soluzione di ematossilina</td></tr><tr><td>Ago alato normale per vena tipo D, 25G</td><td>TERUMO</td><td>NN2332R</td><td>25G ago</td></tr><tr><td>Optima TLX Ultracentrifuge</td><td>Beckman Couler</td><td>8043-30-1197</td><td>Ultracentrifuge</td></tr><tr><td>P10 pipetta</td><td>Gilson</td><td>FA10002P</td><td></td></tr><tr><td>Paraffina</td><td>Leica</td><td>39601095</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldeide</td><td>Nacalai tesque</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>Kit DAB per colorazione perossidasi</td><td>Nacalai tesque</td><td>25985-50</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio delle proteine Pirece BCA</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>Saggio BCA</td></tr><tr><td>pRK172</td><td>Addgene</td><td>#134504</td><td>Plasmide</td></tr><tr><td>Q-Sepharose Fast Flow.</td><td>cytiva</td><td>17051001</td><td>Resina a scambio ionico</td></tr></tbody></table>

tecnica per la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina

Technique for Intranasal Administration of &#945;-Synuclein Aggregates

La Figura 3 mostra diversi esempi di aggregati α-Syn nell'OB. Nel presente studio, abbiamo somministrato aggregati α-Syn nella narice unilaterale. Le due cavità nasali sono separate dal setto nasale e ogni OB proietta separatamente i neuroni sensoriali olfattivi su ciascuna cavità nasale. Pertanto, l'OB sul lato controlaterale può essere utilizzato come controllo.
La patologia P-α-Syn non è stata osservata nell'ostetrica sul lato trattato dopo 1 e 3 mesi (Figura 3A, B). Aggregati p-α-Syn simili ai neuriti di Lewy sono stati osservati nei glomeruli sul lato trattato dopo 6 e 12 mesi. (Figura 3C, D, F, G). Questi aggregati non sono stati osservati nell'OB sul lato di controllo (Figura 3E).
Possiamo stimare la patologia α-Syn contando gli aggregati α-Syn o esaminando le dimensioni, ecc., utilizzando ImageJ (Table of Materials). Ad esempio, in precedenza abbiamo contato e segnalato il numero di aggregati α-Syn in questo modello20. Nell'OB sul lato trattato, gli aggregati simili ai neuriti di Lewy nell'OB sono aumentati significativamente nell'arco di 12 mesi (ANOVA unidirezionale, seguita dal test di Dunnett, p &lt; 0,01; Figura 3H). Nell'OB sul lato di controllo, ci sono pochi aggregati α-Syn.
Uno studio precedente ha dimostrato che i PFF iniettati nel cervello di topo sono stati degradati entro una settimana e che il α-Syn endogeno di topo è stato convertito in aggregati α-Syn19. Nel presente studio, l'aumento della patologia α-Syn nel tempo indica che la α-Syn endogena di topo è stata convertita in aggregati α-Syn mediante somministrazione intranasale di PFF a dose singola. Questi risultati hanno indicato che la patologia α-Syn potrebbe diffondersi dalla mucosa olfattiva all'ostetricia.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig01.jpg"> 
Figura 1: Metodo di somministrazione della cavità nasale del topo. (A) Il topo è posizionato in posizione supina con la testa leggermente inclinata verso il basso. (B) Le narici del topo sono indicate da punte di freccia gialle. (C, D) La soluzione di fibrille α-Syn viene lasciata cadere nella narice del topo (C, freccia rossa) e rapidamente inalata (D, frecce rosse). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig02.jpg"> 
Figura 2: Schema dei passaggi per ottenere i bulbi olfattivi integri. (A) Usando le forbici, incidere l'osso cranico agittalmente e lateralmente (linea tratteggiata gialla). (B) Rimuovere completamente l'osso cranico sui bulbi olfattivi (OB). (C) Capovolgere la testa e rimuovere con cautela il cervello. Recidere i nervi del cervello. (D) Tagliare i nervi olfattivi attaccati all'osso cranico. (E) L'intero cervello con gli OB intatti. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig03.jpg"> 
Figura 3: Aggregati P-α-Syn nei glomeruli del bulbo olfattivo. (A-G) Immunoistochimica P -α-Syn (EP1536Y) dell'OB sul lato trattato 1, 3, 6 e 12 mesi (1 m, 3 m, 6 m e 12 m, rispettivamente) dopo la somministrazione intranasale e (E) sul lato di controllo 12 mesi dopo la somministrazione intranasale. (C, D) Attorno ai glomeruli compaiono aggregati filiformi α-Syn simili a neuriti di Lewy. (F, G) Le immagini ingrandite sono immagini ad alto ingrandimento di p-α-Syn simile al neurite di Lewy 6 e 12 mesi dopo la somministrazione intranasale. (H) La quantità di deposizione di p-α-Syn simile al neurite di Lewy nell'OB sul lato trattato e sul lato di controllo (n = 4-5). I grafici mostrano la media ± SEM. ANOVA unidirezionale seguita dal test di Dunnett; **&lt;0,01. Questa cifra è stata modificata rispetto a un precedente rapporto20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Tecnica per la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by the presence of Lewy bodies, which are aggregates of &#945;-synuclein ...

technique-for-intranasal-administration-of-synuclein-aggregates

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Morbo di Parkinson è stata correlata all'esposizione ai pesticidi. Qui vi mostriamo un metodo per fornire pesticidi utilizzando un tubo gastrico alla concentrazione desiderata e un metodo per analizzare il loro effetto in alfa-sinucleina accumulo nel sistema nervoso enterico.

La somministrazione orale di Rotenone utilizzando un Gavage e Image Analysis di alfa-sinucleina inclusioni nel sistema nervoso enterico

Un metodo per somministrare farmaci per via intranasale topi svegli per lo scopo di indirizzare il cervello è descritto. Questo metodo consente di ripetere il dosaggio per lunghi periodi con la somministrazione intranasale del farmaco senza anestesia, e faccia a cervello di consegna con un'esposizione sistemica minima.

Somministrazione intranasale di terapeutica del sistema nervoso centrale di topi Awake

Questo video dimostra l'immunocolorazione dei neuroni trattati con aggregati di alfa-sinucleina (αS). I neuroni vengono prima trattati con aggregati αS. Vengono quindi fissati, permeabilizzati e trattati con una soluzione bloccante. Vengono aggiunti gli anticorpi primari, seguiti da un anticorpo secondario marcato in fluorescenza e da una colorazione nucleare. Il campione viene quindi montato e osservato al microscopio.

Immunocolorazione dei neuroni trattati con aggregati di alfa-sinucleina

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Induzione della neuroinfiammazione nei topi tramite iniezione di fibrille di alfa-sinucleina

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Somministrazione intranasale di siRNA al cervello del topo utilizzando un dispositivo di posizionamento

Fonte: Kanazawa, T., et al. Nuovi metodi per la somministrazione intranasale in anestesia per inalazione per valutare la somministrazione di farmaci dal naso al cervello. J. Vis. Exp. (2018)Questo video mostra la somministrazione intranasale di farmaci radiomarcati in un topo anestetizzato per ottenere la somministrazione di farmaci dal naso al cervello. Spiega come i farmaci attraversano l'epitelio nasale e viaggiano attraverso le vie neuronali per raggiungere il cervello, nonché come il...

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Iniezione periferica di fibrille alfasinucleina nel peritoneo o linguetta di Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) topi che esprimono umana alfasinucleina con la mutazione A53T familiare e luciferasi di lucciola, può indurre neuropatologia, compreso neuroinflammation , nel loro sistema nervoso centrale.

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L'obiettivo del presente protocollo è quello di fornire un sistema basato su cellule che replica la formazione dell'alfa-synuclein aggrega in vivo. Le inclusioni intracellulari dell'alfa-synuclein sono seminate in neuroni primari di interiorizzazione e propagazione di esogeno somministrato del microsomi nativo con alfa-synuclein aggregati isolati da topi transgenici malato dell'alfa-synuclein.

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Generazione di fibrille preformate alfa-sinucleina da monomeri e uso in vivo

Questo protocollo presenta la rottura di Rayleigh come un processo lieve per aerosolizzare vettori mRNA non virali. Il deposito regionale per vettori mRNA aerosolizzati viene valutato dal modello Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI). L'espressione della proteina di fluorescenza verde (GFP) nelle cellule polmonari umane rappresenta il mantenimento delle funzioni fisicochimiche e biologiche dei vettori mRNA post-aerosolizzati.

Somministrazione intranasale di poliplex di mRNA tramite aerosol di rottura di Rayleigh: un metodo in vitro per la deposizione nasale e i test funzionali

Impara la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina per studiare la propagazione prion-like nel bulbo olfattivo di un modello murino di Parkinson. Questo metodo non chirurgico permette di valutare la progressione patologica nel tempo.

Tecnica per la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina

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