Name: La rimozione parziale immediata dei complessi cumuli-ovociti: un approccio raffinato per losservazione rapida della fecondazione in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Impara un metodo ottimizzato per la rimozione parziale immediata dei complessi cumuli-ovociti nella fecondazione in vitro. Questa tecnica migliora l'efficienza di osservazione della fecondazione e riduce l'esposizione ambientale degli ovociti.

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<meta charset="utf8"></head><body>Migliorare i risultati della fecondazione in vitro con la rimozione parziale delle cellule della granulosa dopo il recupero

<ol><li>Chen, C., Kattera, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+ICSI+of+oocytes+that+failed+to+extrude+the+second+polar+body+6+h+post-insemination+in+conventional+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Rescue ICSI of oocytes that failed to extrude the second polar body 6 h post-insemination in conventional IVF.</a> Hum Reprod. 18 (10), 2118-2121 (2003).</li>
<li>Barlow, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertilization+failure+in+IVF%3A+why+and+what+next%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Fertilization failure in IVF: why and what next.</a> Hum Reprod. 5 (4), 451-456 (1990).</li>
<li>Kuczyński, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+ICSI+of+unfertilized+oocytes+after+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Rescue ICSI of unfertilized oocytes after IVF.</a> Hum Reprod. 17 (9), 2423-2427 (2002).</li>
<li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+early+cumulus+cells+removal+and+early+rescue+ICSI+on+pregnancy+outcomes+in+high-risk+patients+of+fertilization+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effect of early cumulus cells removal and early rescue ICSI on pregnancy outcomes in high-risk patients of fertilization failure.</a> Gynecol Endocrinol. 34 (8), 689-693 (2018).</li>
<li>Turathum, B., Gao, E. M., Chian, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+function+of+cumulus+cells+in+oocyte+growth+and+maturation+and+in+subsequent+ovulation+and+fertilization%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The function of cumulus cells in oocyte growth and maturation and in subsequent ovulation and fertilization.</a> Cells. 10 (9), 2292(2021).</li>
<li>Bárcena, P., Rodríguez, M., Obradors, A., Vernaeve, V., Vassena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+we+worry+about+the+clock%3F+Relationship+between+time+to+ICSI+and+reproductive+outcomes+in+cycles+with+fresh+and+vitrified+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Should we worry about the clock? Relationship between time to ICSI and reproductive outcomes in cycles with fresh and vitrified oocytes.</a> Hum Reprod. 31 (6), 1182-1191 (2016).</li>
<li>Telfer, E. E., Grosbois, J., Odey, Y. L., Rosario, R., Anderson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+a+good+egg%3A+human+oocyte+health%2C+aging%2C+and+in+vitro+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Making a good egg: human oocyte health, aging, and in vitro development.</a> Physiol Rev. 103 (4), 2623-2677 (2023).</li>
<li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+good+practice+in+ultrasound%3A+oocyte+pick+up%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Open%22%5BJournal%5D)">Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up.</a> Hum Reprod Open. 2019 (4), hoz025(2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+profiles+reveal+the+characteristics+of+oocytes+and+cumulus+cells+at+GV%2C+MI%2C+and+MII+in+follicles+before+ovulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ovarian+Res%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic profiles reveal the characteristics of oocytes and cumulus cells at GV, MI, and MII in follicles before ovulation.</a> J Ovarian Res. 16 (1), 225(2023).</li>
<li>Lu, W. H., Gu, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+semen+analysis%3A+a+Chinese+perspective+on+the+fifth+edition+of+the+WHO+laboratory+manual+for+the+examination+and+processing+of+human+semen%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Insights into semen analysis: a Chinese perspective on the fifth edition of the WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen.</a> Asian J Androl. 12 (4), 605-606 (2010).</li>
<li>Delos Santos, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guidelines+for+good+practice+in+IVF+laboratories+%282015%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Revised guidelines for good practice in IVF laboratories (2015).</a> Hum Reprod. 31 (2015), 685-686 (2016).</li>
<li>Nagy, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pronuclear+morphology+evaluation+with+subsequent+evaluation+of+embryo+morphology+significantly+increases+implantation+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Pronuclear morphology evaluation with subsequent evaluation of embryo morphology significantly increases implantation rates.</a> Fertil Steril. 80 (1), 67-74 (2003).</li>
<li>Gardner, D. K., Lane, M., Stevens, J., Schlenker, T., Schoolcraft, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprint+of%3A+Blastocyst+score+affects+implantation+and+pregnancy+outcome%3A+towards+a+single+blastocyst+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Reprint of: Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome: towards a single blastocyst transfer.</a> Fertil Steril. 112 (4), Suppl1 e81-e84 (2019).</li>
<li>Esfandiari, N., Claessens, E. A., Burjaq, H., Gotlieb, L., Casper, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ongoing+twin+pregnancy+after+rescue+intracytoplasmic+sperm+injection+of+unfertilized+abnormal+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Ongoing twin pregnancy after rescue intracytoplasmic sperm injection of unfertilized abnormal oocytes.</a> Fertil Steril. 90 (1), e5-e7 (2008).</li>
<li>Wetzels, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+co-culture+with+human+fibroblasts+on+human+embryo+development+in+vitro+and+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">The effects of co-culture with human fibroblasts on human embryo development in vitro and implantation.</a> Hum Reprod. 13 (5), 1325-1330 (1998).</li>
<li>Kattera, S., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+coincubation+of+gametes+in+in+vitro+fertilization+improves+implantation+and+pregnancy+rates%3A+a+prospective%2C+randomized%2C+controlled+study%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Short coincubation of gametes in in vitro fertilization improves implantation and pregnancy rates: a prospective, randomized, controlled study.</a> Fertil Steril. 80 (4), 1017-1021 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>G-IVFT PLUS</td><td>Vitrolife</td><td>10136</td><td></td></tr><tr><td>OVOIL</td><td>Vitrolife</td><td>10029</td><td></td></tr><tr><td>G-MOPS PLUS</td><td>Vitrolife</td><td>10130</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 3003 piatto</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 3001 piatto</td><td>Corning</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 2001 tubo</td><td>Corning</td><td>352001</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 4013 tazza</td><td>Corning</td><td>354013</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 3037 piatto</td><td>Corning</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetta</td><td>Darwin</td><td>D1150-5P</td><td></td></tr></tbody></table>

la rimozione parziale immediata dei complessi cumuli-ovociti: un approccio raffinato per l'osservazione rapida della fecondazione in vitro

The Immediate Partial Removal of Cumulus-Oocyte Complexes: A Refined Approach for Rapid Observation of In Vitro Fertilization

Nel gruppo sottoposto a brevi procedure di co-incubazione, sono stati esclusi i pazienti che hanno ricevuto il salvataggio. Su 47 pazienti che hanno ricevuto inseminazione a breve termine, non sono state osservate differenze significative in termini di età delle pazienti e numero di ovociti recuperati (Tabella 1). L'immediata rimozione parziale dell'OCCC ha provocato un allentamento dell'OCCC rimanente attorno agli ovociti (Figura 3), facilitando l'individuazione di un secondo globulo polare. Il tempo medio della procedura è stato significativamente più breve nel gruppo di rimozione parziale dell'OCCC (4,42 ± 1,68 min vs. 9,29 ± 5,04 min, P &lt; 0,001) rispetto al gruppo di controllo, nonostante non siano state riscontrate differenze significative nel tasso di scissione, nel tasso ottimale di embrioni e nel tasso ottimale di blastocisti.
In un'altra coorte di 68 pazienti sottoposte a fecondazione in vitro tradizionale (FIV), in cui i controlli di fecondazione sono stati condotti 18-20 ore dopo l'inseminazione, sono state notate somiglianze nell'età delle pazienti e nel numero di ovociti recuperati tra i due gruppi (Tabella 2). Un aumento della scioltezza nella struttura delle cellule della granulosa che circondano l'ovocita è stato osservato in pazienti che sono state sottoposte a rimozione parziale immediata di OCCC durante il prelievo degli ovociti (Figura 4). Sebbene sia stato notato un tempo medio di intervento leggermente più breve nella rimozione parziale del gruppo OCCC (4,93 ± 0,80 min vs. 6,54 ± 7,77 min, P = 0,207), non è stata evidenziata alcuna differenza statisticamente significativa. Mentre le aderenze strette in alcuni casi potrebbero portare a procedure di osservazione prolungate superiori a 40 minuti, le aderenze generalmente allentate dell'OCCC nella maggior parte dei casi dopo lo stoccaggio notturno potrebbero spiegare la mancanza di varianza statistica nei tempi di funzionamento tra i due gruppi. Come nel gruppo precedente, non sono state identificate discrepanze significative nel tasso di scissione, nel tasso ottimale di embrioni e nel tasso ottimale di blastocisti.
Nel complesso, i risultati rappresentativi indicano che la rimozione parziale immediata dell'OCCC riduce significativamente i tempi operativi nelle procedure di inseminazione a breve termine senza compromettere i risultati chiave della fecondazione in vitro come il tasso di scissione, il tasso ottimale di embrioni e il tasso ottimale di blastocisti. Questa tecnica facilita il rilevamento del secondo globulo polare allentando l'OCCC rimanente attorno agli ovociti, il che probabilmente contribuisce a ridurre i tempi operativi. Nel contesto delle procedure di fecondazione in vitro tradizionali, sebbene sia stata osservata una tendenza verso tempi operativi più brevi con l'immediata rimozione parziale dell'OCCC, la differenza non era statisticamente significativa, potenzialmente a causa della variabilità intrinseca nell'adesione delle cellule del cumulo dopo la conservazione notturna. Questi risultati suggeriscono che, sebbene la rimozione parziale immediata dell'OCCC possa migliorare l'efficienza procedurale, in particolare nei contesti di inseminazione a breve termine, il suo impatto sulle tempistiche tradizionali della fecondazione in vitro potrebbe essere meno pronunciato.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66951/66951fig01.jpg"> 
Figura 1: Preparazione della pipetta Pasteur con un bruciatore ad alcool. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66951/66951fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66951/66951fig02.jpg"> 
Figura 2: Immagine tipica dell'OCCC che deve essere elaborata. Gli ovociti tipici con diametro superiore a 2,5 mm da (A e B) due pazienti sono stati sottoposti a rimozione parziale lungo la linea tratteggiata rossa delineata. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66951/66951fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66951/66951fig03.jpg"> 
Figura 3: Micrografie tipiche che descrivono le caratteristiche morfologiche della fecondazione 4-6 ore dopo la co-incubazione con spermatozoi. Ovocita tipico (A) con o (B) senza rimozione parziale di OCCC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66951/66951fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66951/66951fig04.jpg"> 
Figura 4: Micrografie tipiche che descrivono le caratteristiche morfologiche della valutazione dei pronuclei 18-20 ore dopo la co-incubazione con spermatozoi. Ovocita tipico (A) con o (B) senza rimozione parziale di OCCC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66951/66951fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Rimozione parziale del gruppo OCCC</td>
			<td>Gruppo di controllo</td>
			<td>Valore p</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pazienti (n)</td>
			<td>26</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Età (y)</td>
			<td>32.04 ± 4.11</td>
			<td>33,33 ± 3,41</td>
			<td>0.193</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. di ovociti recuperati</td>
			<td>12.85 ± 9.02</td>
			<td>11.38 ± 5.32</td>
			<td>0.493</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tempo di procedura di 4 ore (min)</td>
			<td>4,42 ± 1,68</td>
			<td>9.29 ± 5.04</td>
			<td>&lt;0,001</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso di scissione, n (%)</td>
			<td>98,89 ± 0,04, 24</td>
			<td>100,00 ± 0,00, 19</td>
			<td>0.221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso di embrione ottimale, n (%)</td>
			<td>71.38 ± 35.46, 24</td>
			<td>72.14 ± 35.72, 19</td>
			<td>0.945</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso ottimale di blastociti, n (%)</td>
			<td>58.13 ± 28.29, 19</td>
			<td>65.18 ± 28.09, 12</td>
			<td>0.504</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1: Confronto dei risultati della fecondazione tra i due gruppi con o senza l'immediata rimozione parziale dell'OCCC sottoposti a brevi procedure di co-incubazione.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Rimozione parziale del gruppo OCCC</td>
			<td>Gruppo di controllo</td>
			<td>Valore p</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pazienti (n)</td>
			<td>29</td>
			<td>39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Età (y)</td>
			<td>32.21 ± 4.11</td>
			<td>32,72 ± 4,25</td>
			<td>0.619</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. di ovociti recuperati</td>
			<td>12.93 ± 7.00</td>
			<td>12.44 ± 7.26</td>
			<td>0.777</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 ore di funzionamento (min)</td>
			<td>4,93 ± 0,80</td>
			<td>6.54 ± 7.77</td>
			<td>0.207</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso di scissione, n (%)</td>
			<td>98,81 ± 0,04, 28</td>
			<td>95,93 ± 0,17,37</td>
			<td>0.39</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso di embrione ottimale, n (%)</td>
			<td>72.07 ± 36.75, 28</td>
			<td>72.62 ± 30.01,36</td>
			<td>0.948</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso ottimale di blastociti, n (%)</td>
			<td>62.93 ± 28.30, 21</td>
			<td>63.36 ± 24.61, 28</td>
			<td>0.955</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 2: Confronto dei risultati della fecondazione tra i due gruppi con o senza l'immediata rimozione parziale dell'OCCC sottoposto a fecondazione in vitro tradizionale (FIV).

La rimozione parziale immediata dei complessi cumuli-ovociti: un approccio raffinato per l'osservazione rapida della fecondazione in vitro

Despite the rapid advancements in clinical and laboratory technologies for in vitro fertilization (IVF), a significant proportion (10%-15%) of patients ...

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