Name: Elettroporazione basata su substrato poroso con monitoraggio dellimpedenza elettrica transepiteliale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Scopri l'elettroporazione su substrato poroso con monitoraggio dell'impedenza elettrica transepiteliale. Questo metodo ottimizza la consegna intracellulare mantenendo alta la vitalità cellulare e caratterizzando gli stadi intermedi del processo.

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<meta charset="utf8"></head><body>Metodo TEEI per l'analisi dell'elettroporazione e la previsione della consegna in celle A431

<ol><li>Brooks, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+and+highly+controllable+methods+for+in+vitro+intracellular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">High throughput and highly controllable methods for in vitro intracellular delivery.</a> Small. 16 (51), e2004917(2020).</li>
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<li>Canatella, P. J., Karr, J. F., Petros, J. A., Prausnitz, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+study+of+electroporation-mediated+molecular+uptake+and+cell+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Quantitative study of electroporation-mediated molecular uptake and cell viability.</a> Biophys J. 80 (2), 755-764 (2001).</li>
<li>Pliquett, U., Gift, E. A., Weaver, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+electric+field+and+anomalous+heating+caused+by+exponential+pulses+with+aluminum+electrodes+in+electroporation+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectrochem+Bioenerg%22%5BJournal%5D)">Determination of the electric field and anomalous heating caused by exponential pulses with aluminum electrodes in electroporation experiments.</a> Bioelectrochem Bioenerg. 39 (1), 39-53 (1996).</li>
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<li>Boukany, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanochannel+electroporation+delivers+precise+amounts+of+biomolecules+into+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Nanochannel electroporation delivers precise amounts of biomolecules into living cells.</a> Nat Nanotechnol. 6 (11), 747-754 (2011).</li>
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<li>Patino, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+high-throughput+localized+electroporation+workflow+with+deep+learning-based+analysis+for+cell+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Multiplexed high-throughput localized electroporation workflow with deep learning-based analysis for cell engineering.</a> Sci Adv. 8 (29), 7637(2022).</li>
<li>Sagvolden, G., Giaever, I., Pettersen, E. O., Feder, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+adhesion+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cell adhesion force microscopy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (2), 471-476 (1999).</li>
<li>Ishibashi, T., Takoh, K., Kaji, H., Abe, T., Nishizawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porous+membrane-based+culture+substrate+for+localized+in+situ+electroporation+of+adherent+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+Actuators+B%3A+Chem%22%5BJournal%5D)">A porous membrane-based culture substrate for localized in situ electroporation of adherent mammalian cells.</a> Sensors Actuators B: Chem. 128 (1), 5-11 (2007).</li>
<li>Mukherjee, P., Nathamgari, S. S. P., Kessler, J. A., Espinosa, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+numerical+and+experimental+investigation+of+localized+electroporation-based+cell+transfection+and+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Combined numerical and experimental investigation of localized electroporation-based cell transfection and sampling.</a> ACS Nano. 12 (12), 12118-12128 (2018).</li>
<li>Brooks, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+equivalent+circuit+model+for+localized+electroporation+on+porous+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">An equivalent circuit model for localized electroporation on porous substrates.</a> Biosens Bioelectron. 199, 113862(2022).</li>
<li>Brooks, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+electrical+impedance+increase+following+porous+substrate+electroporation+enables+label-free+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Transepithelial electrical impedance increase following porous substrate electroporation enables label-free delivery.</a> Small. 20 (25), 2310221(2023).</li>
<li>Vindiš, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+electrotransfer+into+mammalian+cells+using+commercial+cell+culture+inserts+with+porous+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Gene electrotransfer into mammalian cells using commercial cell culture inserts with porous substrate.</a> Pharmaceutics. 14 (9), 1959(2022).</li>
<li>Ye, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+electroporation+with+real-time+impedance+assessment+using+a+constriction+microchannel%5BTitle%5D)+AND+%22Micromachines%22%5BJournal%5D)">Single-cell electroporation with real-time impedance assessment using a constriction microchannel.</a> Micromachines. 11 (9), 856(2020).</li>
<li>Bednarek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+methods+for+measuring+the+permeability+of+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro methods for measuring the permeability of cell monolayers.</a> Methods Protoc. 5 (1), 17(2022).</li>
<li>Harhaj, N. S., Antonetti, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tight+junctions+and+loss+of+barrier+function+in+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tight junctions and loss of barrier function in pathophysiology.</a> Int J Biochem Cell Biol. 36 (7), 1206-1237 (2004).</li>
<li>Hunter, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHunter%2C+RJ+%22Zeta+potential+in+colloid+science%3A+Principles+and+applications%22">Zeta potential in colloid science: Principles and applications</a>. 2, Academic Press. (2013).</li>
<li>Wong, P. K., Wang, T. -H., Deval, J. H., Ho, C. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrokinetics+in+microdevices+for+biotechnology+applications%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE%2FASME+Trans+Mechatron%22%5BJournal%5D)">Electrokinetics in microdevices for biotechnology applications.</a> IEEE/ASME Trans Mechatron. 9 (2), 366-376 (2004).</li>
<li>Qian, K., Wang, Y., Lei, Y., Yang, Q., Yao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+and+theoretical+study+on+cell+swelling+for+osmotic+imbalance+induced+by+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectrochemistry%22%5BJournal%5D)">An experimental and theoretical study on cell swelling for osmotic imbalance induced by electroporation.</a> Bioelectrochemistry. 157, 108637(2024).</li>
<li>Fox, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+of+cells+in+microfluidic+devices%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Electroporation of cells in microfluidic devices: A review.</a> Anal Bioanal Chem. 385 (3), 474-485 (2006).</li>
</ol>

L'elettroporazione è una tecnica in cui le cellule sono esposte a un campo elettrico, creando pori temporanei nella membrana cellulare attraverso i quali i carichi, tra cui proteine, RNA e DNA, possono passare 1,2. La versione più utilizzata è l'elettroporazione di massa (BEP). La BEP viene eseguita riempiendo una cuvetta con un elettrolita contenente milioni di cellule, esponendo l'elettrolita ad alta tensione e consentendo al carico di entrare nelle cellule attraverso la diffusione o l'endocitosi1. Ci sono molti vantaggi per BEP, tra cui un'elevata produttività e numerosi sistemi disponibili in commercio. Tuttavia, ci sono limitazioni all'erogazione del BEP. Il posizionamento incoerente delle celle rispetto agli elettrodi e la schermatura del campo elettrico dalle celle adiacenti causano una significativa variabilità nell'esposizione al campo elettrico durante BEP 3,4. L'alta tensione richiesta per la BEP ha anche un impatto negativo significativo sulla vitalità delle celle5. Sin dal suo inizio nel 20116, c'è stato un crescente interesse per un metodo di elettroporazione chiamato elettroporazione del substrato poroso (PSEP), anche se a volte viene indicato con altri nomi, tra cui elettroporazione localizzata e nano- o micro-elettroporazione 1,7,8. A differenza della sospensione cellulare di BEP, il PSEP viene condotto su cellule aderenti a un substrato poroso. Non solo uno stato aderente è preferito per la maggior parte delle linee cellulari umane9, ma i pori nel substrato si concentrano anche sulla corrente elettrica, localizzando il potenziale elettrico transmembrana (TMP) in regioni specifiche della membrana cellulare10,11. Questa localizzazione consente una significativa riduzione della tensione applicata, diminuendo il danno e aumentando la vitalità cellulare. Questa combinazione di effetti aiuta a controllare lo sviluppo dei pori della membrana cellulare, risultando in un'erogazione più coerente ed efficiente 1,5,12.
Uno studio recente ha introdotto un dispositivo PSEP con un array di elettrodi placcati in oro a sei pozzetti per contenere inserti a membrana porosa13 disponibili in commercio (Figura 1A, B), una pratica che è stata introdotta per la prima volta da Vindis et al.14. Il dispositivo è in grado di applicare impulsi e misurare l'impedenza elettrica attraverso il monostrato cellulare, nota come impedenza elettrica transepiteliale (TEEI), in tempo reale13. L'interfaccia utente del dispositivo consente il controllo completo della forma d'onda e della polarità dell'elettroporazione. È importante sottolineare che le misurazioni dell'impedenza in tempo reale possono essere utilizzate per prevedere i risultati della somministrazione senza la necessità di costosi reagenti o marcatori fluorescenti, un concetto noto come consegna senza etichetta15.
La piattaforma PSEP è costituita da due principali componenti elettrici personalizzati: il corpo principale del dispositivo, che ospita il generatore di impulsi e l'apparecchiatura di misurazione TEEI, e l'array di elettrodi, dove vengono inseriti i substrati porosi e avviene l'elettroporazione. I diagrammi per tutta l'elettronica personalizzata e i componenti stampati in 3D sono disponibili all'indirizzo GitHub: https://github.com/YangLabUNL/PSEP-TEEI. Oltre all'elettronica personalizzata, è necessario anche un computer per il corretto funzionamento della piattaforma. Il software personalizzato richiede l'esecuzione di MATLAB (versione 2021a o successiva) e Microsoft Excel per l'archiviazione e l'accesso ai dati per l'analisi. Il programma controlla l'elettronica personalizzata e fornisce l'interfaccia utente grafica (GUI) per la regolazione delle impostazioni. Questi programmi sono stati resi disponibili anche su GitHub: https://github.com/YangLabUNL/PSEP-TEEI.
I dati preliminari suggeriscono che questo processo è possibile per diversi tipi di cellule aderenti (Figura 1C), ma questo articolo discuterà solo la preparazione delle cellule A431 utilizzando parametri che sono stati trovati ottimali per questa linea cellulare da Brooks et al.13. Inoltre, poiché il carico di ioduro di propidio (PI) è citotossico, vengono eseguiti due esperimenti, il primo con un terreno di trasfezione PI ad alta concentrazione per quantificare l'efficienza di somministrazione e il secondo con solo terreni di coltura cellulare per misurare il TEEI su scale temporali più lunghe. Questi esperimenti utilizzano forme d'onda di elettroporazione identiche, consentendo di correlare i risultati (Figura 1D).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66971/66971fig01.jpg"> Figura 1: Schema di assemblaggio dell'array di elettrodi e dati fondamentali. (A) Modello CAD di un inserto all'interno di un pozzetto dell'array di elettrodi. (B) Modello CAD dell'array di elettrodi. (C) Aumento dell'impedenza dovuto al PSEP per linee cellulari selezionate, n = 3 per linea cellulare. Barra di errore: errore standard della media. (D) Efficienza della consegna vs. TEEI aumenta i dati di correlazione. L'efficienza di somministrazione è stata calcolata dividendo il numero di cellule marcate nelle immagini PI e calceina dagli esperimenti di somministrazione per il numero totale di cellule identificate con Hoechst. Il numero di celle è stato determinato utilizzando una pipeline CellProfiler personalizzata, n = 6 per tensione. Barra di errore: (asse x e y) errore standard della media. Questa figura è riprodotta da Brooks et al.13 con il permesso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66971/66971fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

<table><tbody><tr><td>Provetta da centrifuga conica da 15 ml</td><td>Thermo Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>Emocitometro monouso a 2 chip</td><td>Bulldog Bio</td><td>DHC-N01</td><td></td></tr><tr><td>75 cm2 Fiaschetta per coltura tissutale</td><td>fisherbrand</td><td>FB012937</td><td></td></tr><tr><td>A431 Celle</td><td>ATCC</td><td>CRL-1555</td><td></td></tr><tr><td>Calceina AM</td><td>Invitrogen</td><td>C3099</td><td></td></tr><tr><td>Classe II Tipo A2 Cabina di biosicurezza</td><td>Labgard</td><td>NU-543-600</td><td></td></tr><tr><td>Componenti personalizzati</td><td>YangLab</td><td></td><td>https://github.com/YangLabUNL/PSEP-TEEI</td></tr><tr><td>Tubo da centrifuga monouso (50 mL)</td><td>fisherbrand</td><td>05-539-6</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>A5670401</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di aspirazione dei fluidi</td><td>vacuubrand</td><td>20727403</td><td></td></tr><tr><td>HERACELL 240i</td><td>Thermo Scientific</td><td>51026331</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Scientific</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina al plasma umano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FIBRP-RO</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente invertito</td><td>Zeiss</td><td>491916-0001-000</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertito</td><td>Labomed</td><td>TCM 400</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>cytiva</td><td>SH30256.02</td><td></td></tr><tr><td>Provetta PCR 200 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>72.737</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina / Streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140148</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta (0,2-2 &micro; L)</td><td>fisherbrand Elite</td><td>FBE00002</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta (100-1000 &; micro; L)</td><td>fisherbrand Elite</td><td>FBE01000</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta (20-200 &5; L)</td><td>fisherbrand Elite</td><td>FBE00200</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta (2-20 &; micro; L)</td><td>fisherbrand Elite</td><td>FBE00020</td><td></td></tr><tr><td>Propidium Iodure</td><td>Invitrogen</td><td>P1304MP</td><td></td></tr><tr><td>Provetta di reazione 1,5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST 16R Centrifuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>75004240</td><td></td></tr><tr><td>Thincert (24 pozzetti)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>662 641</td><td>0,4 &micro; m diametro dei pori, 2x106 cm-2 densità dei pori,</td></tr><tr><td>piatto di coltura tissutale in PET trasparente (24 pozzetti)</td><td>fisherbrand</td><td>FB012929</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20mL</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco</td><td>15090046</td><td></td></tr></tbody></table>

elettroporazione basata su substrato poroso con monitoraggio dell'impedenza elettrica transepiteliale

Porous Substrate-Based Electroporation with Transepithelial Electrical Impedance Monitoring

Il protocollo fornito stabilisce un metodo per l'utilizzo delle misure TEEI per esaminare i processi intermedi di elettroporazione e fare previsioni di consegna, in particolare per la linea cellulare A431 e il carico PI. Sebbene la modifica di questo protocollo sia discussa più avanti nell'articolo, è importante notare ora che, sebbene i valori specifici possano cambiare, le tendenze generali nella risposta rimangono coerenti. Ad esempio, i dati TEEI che scendono al di sotto del basale iniziale corrispondono alla morte cellulare, mentre l'aumento massimo del valore TEEI al di sopra del minimo corrisponde all'efficienza di consegna13. Queste tendenze generali e le loro implicazioni sono esaminate di seguito.
Come mostrato nella Figura 2A, durante l'utilizzo della piattaforma PSEP può emergere una serie di tendenze di misurazione TEEI e imaging cellulare. Il risultato ideale di questo protocollo è quello di produrre una curva simile ai dati di salute ottimizzati mostrati nella Figura 2Ai. Questo è caratterizzato come il risultato ideale, in quanto non vi è alcun calo al di sotto della linea di base, indicando pochissima o nessuna morte cellulare. Inoltre, la curva sana ottimizzata ha il maggiore aumento di TEEI rispetto al minimo, indicando un alto grado di efficienza di erogazione13. Queste inferenze sono supportate dall'imaging post-PSEP del monostrato cellulare, che rivela una morte cellulare trascurabile e un monostrato cellulare sano e completamente confluente (Figura 2Aiii). Inoltre, un esperimento di consegna riuscito che utilizza forme d'onda PSEP identiche può essere caratterizzato dalle immagini mostrate nella Figura 2B. La corretta applicazione della forma d'onda dell'elettroporazione e la concentrazione del carico si traducono in un elevato grado di coerenza dell'erogazione e vitalità delle celle.
La salute e la confluenza del monostrato cellulare sono fondamentali per il successo dell'applicazione delle previsioni di consegna basate su TEEI16,17. Anche con una forma d'onda ottimizzata, un monostrato cellulare malsano o incompleto provoca una diminuzione della risposta TEEI, come illustrato dai dati non integri ottimizzati nella Figura 2Aii. Tuttavia, si noti che le immagini per questo risultato (Figura 2Avi) corrispondono ancora all'interpretazione della risposta TEEI fornita da Brooks et al.13. Non vi è alcun calo al di sotto della linea di base, indicando una morte cellulare prossima allo zero (Figura 2C, D). Inoltre, l'aumento ridotto rispetto al minimo corrisponde a un impatto negativo sull'efficienza di erogazione, poiché un minor numero di celle nel monostrato riduce l'erogazione totale di PI (Figura 2C, D).
Se viene applicata una forma d'onda non ottimizzata, è possibile vedere diminuzioni ancora più significative nella risposta TEEI. A seconda dell'energia totale e dell'intervallo di tempo in cui viene applicata, le forme d'onda non ottimizzate possono produrre risultati che vanno dalla diminuzione dell'efficienza all'annichilazione quasi totale del monostrato di celle (Figura 2Ai, iii, v). Sia le curve non ottimizzate che quelle molto non ottimizzate mostrano una diminuzione significativa rispetto al basale, indicando una sostanziale morte cellulare. Tuttavia, forme d'onda sempre meno ottimizzate ostacolano il recupero cellulare, con conseguente riduzione dell'efficienza di erogazione.
L'efficienza di somministrazione è stata calcolata dividendo il numero di cellule marcate nelle immagini PI e calceina dagli esperimenti di somministrazione per il numero totale di cellule identificate con Hoechst. La morte è stata calcolata prendendo le cellule contrassegnate con PI negli esperimenti di misurazione TEEI e dividendo per il numero totale di cellule identificate con Hoechst. Il numero di celle è stato determinato utilizzando una pipeline CellProfiler personalizzata per entrambe le metriche.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66971/66971fig02.jpg"> Figura 2: Curve di risposta TEEI e imaging per condizioni comuni. (A) (i) Dati di risposta TEEI che illustrano la variazione percentuale di TEEI per condizioni ottimizzate e non ottimizzate. (ii) Confronto della risposta TEEI tra monostrati sani e non sani in condizioni di forma d'onda ottimizzate. (iii-v) Imaging rappresentativo dei potenziali risultati per condizioni di forma d'onda ottimizzate e non ottimizzate che mostrano la morte cellulare (rosso) e le cellule viventi (verde). (vi) Imaging rappresentativo di un monostrato malsano dopo l'applicazione di condizioni di forma d'onda ottimizzate che mostrano la morte cellulare (rosso) e le cellule viventi (verde). (B) Immagini che mostrano la consegna di PI (rosso), cellule viventi (verde) e posizioni dei nuclei (blu). Tutte le immagini sono state schiarite per una maggiore chiarezza. Barre della scala: 1000 μm. (C) Il TEEI diminuisce dal basale pre-PSEP al minimo post-PSEP e aumenta dal minimo post-PSEP al picco post-PSEP per determinate tensioni. (D) Efficienza di erogazione e percentuali di morte cellulare per determinate tensioni. Le barre di errore rappresentano il SEM (n = 6). (C,D) riprodotto da Brooks et al.13 con permesso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66971/66971fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Elettroporazione basata su substrato poroso con monitoraggio dell'impedenza elettrica transepiteliale

Porous substrate electroporation (PSEP) is an emerging method of electroporation that provides high throughput and consistent delivery. Like many other ...

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Qui, presentiamo un protocollo per fabbricare un dispositivo microfluidico a due strati unico per studiare la regolazione elettromeccanica dell'omeostasi del tessuto epiteliale. Il dispositivo applica correnti elettriche fisiologiche statiche perpendicolari al piano del tessuto, influenzando l'adesione, la proliferazione e l'estrusione cellula-cellula. L'imaging su cellule vive e le misurazioni dello stress meccanico rivelano i meccanismi di questi processi.

Rivelazione del controllo elettromeccanico dell'omeostasi tissutale utilizzando un dispositivo microfluidico a due strati

Scopri l'elettroporazione su substrato poroso con monitoraggio dell'impedenza elettrica transepiteliale. Questo metodo ottimizza la consegna intracellulare mantenendo alta la vitalità cellulare e caratterizzando gli stadi intermedi del processo.

Elettroporazione basata su substrato poroso con monitoraggio dell'impedenza elettrica transepiteliale

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