Name: Radiosintesi, controllo di qualità e tomografia a emissione di positroni per piccoli animali di 68nanomolecole marcate con GA (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Scopri la radiosintesi e il controllo di qualità di nanocorpi marcati con 68Ga per imaging PET/CT su piccoli animali. Questo metodo avanzato migliora la visualizzazione del cancro e le strategie teranostiche in ambito clinico.

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<meta charset="utf8"></head><body>Radiosintesi e imaging PET/TC di 68Nanobody marcati con GA in modelli di xenotrapianto

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Misuratore di attività ISOMED 2010</td><td>Nuviatech Healthcare&nbsp;</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga MIKRO 185</td><td>Andreas Hettich GmbH & Co. KG</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>Test delle endotossine Endosafe nexgen-PTS</td><td>Charles</td> <td>River-Blocco</td><td></td></tr> <tr><td>riscaldante NANOCOLOR VARIO C2</td><td>Macherey-Nagel</td><td>919350</td><td></td></tr><tr><td>Sistema HPLC, incluso rilevatore radio</td><td>Knauer & Raytest-Software</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>di analisi delle immagini Pmod 4.4&nbsp;</td><td>PMOD Technologies</td> <td>LLC-Sistema</td><td></td></tr> <tr><td>PET/CT per piccoli animali &beta;-CUBE e X-CUBE</td><td>Molecubes</td> <td>NV-TLC</td><td></td></tr> <tr><td>MiniGITA*</td><td>Elysia-Raytest</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Materiali</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,3 mm di diametro PE10 tubo</td><td>fisher scientific</td><td>22-204008</td><td></td></tr><tr><td>ago 30G</td><td>B|Braun</td><td>4656300</td><td></td></tr><tr><td>Filtro centrifugo; 10 kDa MWCO, 0,5 mL</td><td>Millipore</td><td>UFC501008</td><td></td></tr><tr><td>Striscia di carta per cromatografia iTLC-SG</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td></td></tr><tr><td>Cartuccia di endotossine, sensibilità 0,05 EU/ml&nbsp;</td><td>Charles River</td><td>PTS-2005</td><td></td></tr><tr><td>Colonna HPLC Biosep SEC-s2000</td><td>Provetta per microcentrifuga Phenomenex</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>(1,5 mL)</td><td>Eppendorf</td><td>0030125150</td><td></td></tr><tr><td>striscia pH 0,0 - 6,0</td><td>Merck KGaA</td><td>109531</td><td></td></tr><tr><td>striscia pH 0-14</td><td>Merck KGaA</td><td>109535</td><td></td></tr><tr><td>PS-H+ cartuccia SPE</td><td>Macherey Nagel GmbH &; Co. KG</td><td>731861</td><td></td></tr><tr><td>Fiala sterile 10 mL</td><td>ALK Life Science Solutions</td><td>SEV100</td><td></td></tr><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>68Ge/68Ga-Generator</td><td>NRF-iThembaLABS-Ammoniumacetato</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Merck KGaA</td><td>101116</td><td></td></tr><tr><td>Acido citrico</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>100241</tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Merck KGaA</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Nanobody NM-02</td><td>Radiopharm Theranostics-P-SCN-Bz-DOTA-GA</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CheMatech</td><td>C115</td><td></td></tr><tr><td>Acido trifluoracetico</td><td>Merck KGaA</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Acqua ultrapura</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>101262</tr></tbody></table>

radiosintesi, controllo di qualità e tomografia a emissione di positroni per piccoli animali di 68nanomolecole marcate con ga

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of 68Ga-Labelled Nano Molecules

Uno degli aspetti più importanti del controllo di qualità di un radiofarmaco è l'HPLC, in quanto questo dimostra non solo la purezza chimica e radiochimica (98,2% in questo caso) ma permette anche di dimostrare l'identità del radiofarmaco confrontando il tempo di eluizione e la forma del picco con quelli di un composto di riferimento non radioattivo. Questo composto di riferimento è, in questo caso, un nanocorpo non marcato, che si è dimostrato il composto corretto con tecniche classiche come la spettrometria di massa o la risonanza magnetica nucleare. Queste tecniche non possono essere applicate direttamente al composto radioattivo (non c'è abbastanza massa per generare un segnale), ma confrontando il composto radioattivo con il suo riferimento, si raccolgono prove sufficienti che il composto corretto è stato effettivamente etichettato e non alterato durante la sintesi. Si noti la piccola differenza nel tempo di ritenzione tra il prodotto radioattivo e il riferimento nella Figura 1, corrispondente alla misurazione seriale del flusso HPLC (l'UV viene misurato per primo; il flusso impiega quindi circa 0,2 minuti per raggiungere il rivelatore di radioattività in una configurazione tipica).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig01.jpg"> 
Figura 1: Tipico cromatogramma analitico HPLC per il controllo di qualità di 68nanocorpi marcati con GA NM-02 (GLNM-02). L'assorbanza UV del composto freddo (cioè il pannello superiore) è misurata a 280 nm e mostra un picco a 4,18 min, con uno spostamento di 0,22 min. Il picco del prodotto marcato con 68Ga può essere visto nel rivelatore gamma (cioè nel pannello inferiore). La resa radiochimica è del 98,2%. mAU = milli Unità di assorbanza, NM-02 = il nostro prodotto, UV = canale della luce ultravioletta, nm = nanometro, min = minuto, CPS = conteggi al secondo, GLMN-02 = 68nanocorpi marcati con Ga NM-02, 68Ga-DOTA-GA = [68Ga]Ga-DOTA-GA, γ ChA = canale gamma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
In assenza di HPLC o in aggiunta ad essa, la TLC può essere utilizzata per determinare la resa e la purezza dell'etichettatura del prodotto finale (ma non l'identità, e non così dettagliata come l'HPLC). Grazie alla sua bassa complessità, la TLC è ideale quando il percorso di radiosintesi è ancora in fase di ottimizzazione. La Figura 2 mostra il cromatogramma TLC di 68nanocorpi marcati con Ga NM-02 (purezza radiochimica apparente 99,9%).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig02.jpg"> 
Figura 2: Tipico cromatogramma analitico TLC per il controllo di qualità di 68nanocorpi marcati con Ga NM-02 (GLNM-02). I conteggi delle aree vengono tracciati rispetto alla distanza percorsa dal solvente (citrato) sulla lastra TLC. L'Rf è 0,2 e la purezza radiochimica è del 99,9%. C = Conteggi, mm = millimetro, GLNM-02 = 68nanocorpi marcati con Ga NM-02, TLC = cromatografia su strato sottile. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Nel processo di preparazione dei dati di imaging per la pubblicazione, è pratica standard mostrare almeno un'immagine TC e PET autonoma. Questo approccio consente una valutazione completa della biodistribuzione dei traccianti. La scala TC standard è compresa tra -1000 HU e 1000 HU, il che consente la visualizzazione di tutti i tessuti molli all'interno di un'unica finestra. Come mostrato nella Figura 3A, questo metodo consente una chiara demarcazione dei reni di topo e contemporaneamente consente la valutazione ossea.
Per la bilancia PET, impostare la soglia inferiore a un SUV di 0,0 mantenendo una soglia superiore minima di 1,0 (Figura 3B), preferibilmente utilizzando la normalizzazione del peso corporeo durante il calcolo del SUV (ad esempio, SUVbw). Inoltre, per la quantificazione, SUVmean è preferito rispetto a SUVmax; se si utilizza il SUVmax, utilizzare la media dei 10 voxel più caldi invece del valore del singolo voxel più caldo nel calcolo delvolume corporeo del SUV. Preparare le fusioni di caratteristiche delle immagini PET/CT unendo le sezioni CT e PET (Figura 3C).
Per consentire ulteriormente ai lettori di valutare in modo indipendente la biodistribuzione del tracciante di tutto il corpo, la proiezione della massima intensità della stessa scansione PET può essere presentata utilizzando la stessa scala della fetta PET (Figura 3D).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig03.jpg"> 
Figura 3: Immagini PET/TC in vivo di un topo sottocutaneo portatore di tumore SKOV-3. L'immagine è stata acquisita 3 ore dopo l'iniezione endovenosa di 5 MBq 68di nanocorpo marcato con GA NM-02 (GLNM-02). (A) L'immagine CT è scalata tra -1000 HU e 1000 HU, mentre (B) l'immagine PET è compresa tra un SUV di 0,0 e 5,0. (C) La fusione PET/CT utilizza la stessa scala. (D) Anche l'immagine PET di proiezione a massima intensità (MIP) viene ridimensionata utilizzando un SUV di 0,0 e 5,0. Tutte le immagini PET mostrano una buona captazione tumorale di GLNM-02 e la clearance renale è chiaramente visibile. CT = tomografia computerizzata, PET = tomografia a emissione di positroni, MIP = proiezione di massima intensità, HU = unità Hounsfield, SUV = valore di assorbimento standardizzato. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Nel caso specifico del nanocorpo NM-02 marcato con 68Ga, si può osservare una notevole captazione tumorale nel fianco sinistro del topo. Inoltre, è evidente anche la clearance renale del tracciante. Presentando la proiezione di massima intensità PET, diventa visibile anche l'attività della vescica urinaria, rafforzando la clearance renale del tracciante. In questo caso specifico, vale la pena ricordare che il rene, il tumore e la vescica non possono essere mostrati nella stessa fetta 2D. Includendo la proiezione di massima intensità nelle pubblicazioni, l'intera biodistribuzione del tracciante viene presentata nella stessa immagine.

Radiosintesi, controllo di qualità e tomografia a emissione di positroni per piccoli animali di 68nanomolecole marcate con GA

Small animal Positron Emission Tomography (PET) and Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) imaging techniques are crucial in preclinical ...

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Research

Ricerca

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Cancer Research

Ricerca sul cancro

Abbiamo dimostrato la sintesi radiochimica semiautomatica di procedure [ 18 F] 3F4AP e di controllo della qualità.

Sintesi radiochimica automatizzata di [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: un nuovo tracciante PET per le malattie Demyelinating di imaging

Descriviamo un protocollo per il rilevamento di preclinici in vivo della metastasi del cancro. Si basa su un reporter del radionuclide-fluorescenza combinando lo symporter dello ioduro di sodio, rilevato da non-invasiva [18F] tetrafluoroborate-PET e una proteina fluorescente per semplificata ex vivo conferma. Il metodo è applicabile per preclinici in vivo delle cellule di rilevamento di là di biologia del tumore.

Del radionuclide-fluorescenza Reporter Gene Imaging per monitorare la progressione del tumore nei modelli del roditore del tumore

Qui, presentiamo un protocollo per ottenere68Ga ossido drogato con nucleo di ferro via veloce a microonde-driven sintesi di nanoparticelle. La metodologia rende PET / (T1) MRI nanoparticelle con efficienza superiore al 90% e purezza radiochimica del 99% in una sintesi di 20 min di radiolabeling.

Sintesi di nanoparticelle Core-drogati di ossido di ferro di 68Ga per Dual tomografia a emissione di positroni/Imaging di risonanza magnetica (T1)

Positrone-emissione di positroni (PET) imaging siti coinvolti in studi di ricerca clinica precoce più bisogno di capacità di produzione del radiotraccitore robusto e versatile. Utilizzando il radiotraccitore [18F] clofarabina come esempio, illustriamo come automatizzare la sintesi di un radiotraccitore utilizzando un radiosynthesizer flessibile, lettore di cassette e convalidare la sintesi per uso clinico.

Automazione di un positrone-emissione di positroni (PET) radiotraccitore sintesi protocollo per la produzione di clinica

Qui, rappresentiamo un protocollo per la radioetichettatura completamente automatizzata di [11C]SNAP-7941 e l'analisi della cinetica in tempo reale di questo PET-tracer su P-gp che esprime e non esprime.

Aspetto tecnico della sintesi automatizzata e valutazione cinetica in tempo reale di [11C]SNAP-7941

Questo metodo stima la dose assorbita di diverse strutture per la terapia peptidica-recettore-radionuclide (PRRT) con la possibilità di evitare la sovrapposizione degli organi su proiezioni 2D. Le immagini planari seriali per tutto il corpo permettono la stima delle dosi medie assorbite lungo tutto il corpo, mentre l'approccio ibrido, che combina immagini planari e immagini 3D-SPECT/CT, supera i limiti della sovrapposizione della struttura.

Un protocollo di dosimetria dell'intero corpo per la terapia radionuclide Peptide-Receptor (PRRT): Immagine planare 2D e metodi di immagine ibrido 2D-3D SPECT/CT

La sintesi di fluoro-18 (18F) etichettato radiofarmaceutico per la tomografia a emissione di positroni richiede in genere mesi di esperienza. Quando incorporato in un radiotracciatore, il motivo SiFA (Silicon-fluorride acceptor) consente un semplice protocollo di etichettatura Fdi 18 che è indipendente da attrezzature costose e formazione preparatoria, riducendo la quantità precursore necessaria e utilizzando condizioni di reazione più lievi.

18 mi lato Etichettatura F dei radiotracciati funzionalizzata con un accettatore di fluoruro di silicio (SiFA) per la tomografia a emissione di positroni

Questo studio ha sviluppato un metodo non invasivo e in tempo reale per valutare la distribuzione del ligando di morte programmato 1 in tutto il corpo, basato sull'imaging tomografico a emissione di positroni dell'antagonista D-dodecapeptide [68Ga]. Questa tecnica presenta vantaggi rispetto all'immunoistochimica convenzionale e migliora l'efficienza nell'identificazione dei pazienti appropriati che trarranno beneficio dalla terapia di blocco del checkpoint immunitario.

Sviluppo di un tracciante PET del peptide D marcato con 68gallio per l'imaging dell'espressione programmata del ligando di morte 1

Questo lavoro descrive la produzione automatizzata di fino a 1,7 GBq di [68Ga]Ga-FAPI-46 sul sintetizzatore iPHASE MultiSyn per l'imaging PET della proteina di attivazione dei fibroblasti.

Una radiosintesi automatizzata di [68Ga]Ga-FAPI-46 per uso clinico di routine

Questo protocollo presenta una procedura dettagliata per preparare quattro radiotraccianti al carbonio-11 mediante il "metodo loop" [11C]metilazione. Descriviamo la procedura per sintetizzare [11C]ER-176, con dati per tre radiotraccianti aggiuntivi: [11C]MRB, [11C]mHED e [11C]PiB. Il metodo ad anello fornisce una sintesi efficiente con maggiori rese radiochimiche contro la tradizionale metilazione dei recipienti di reazione [11C].

Miglioramento dell'efficienza e della resa di radiomarcatura dei radioligandi al carbonio-11 per la ricerca clinica utilizzando il metodo Loop

Questa ricerca descrive il processo automatizzato per la produzione di [68Ga]Ga-3BP-3940 con il sintetizzatore GAIA V2, per l'imaging PET della proteina di attivazione dei fibroblasti. Vengono inoltre presentati i risultati dei test di controllo qualità eseguiti su tre lotti di prova.

Preparazione automatizzata di [68Ga]Ga-3BP-3940 su un modulo di sintesi per l'imaging PET del microambiente tumorale

Scopri la radiosintesi e il controllo di qualità di nanocorpi marcati con 68Ga per imaging PET/CT su piccoli animali. Questo metodo avanzato migliora la visualizzazione del cancro e le strategie teranostiche in ambito clinico.

Radiosintesi, controllo di qualità e tomografia a emissione di positroni per piccoli animali di ⁶⁸nanomolecole marcate con GA

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