Stabilire un modello murino di endometrio sottile

L'endometrio sottile è stato ampiamente riconosciuto come la causa critica dell'infertilità. Gli studi sulla patogenesi dell'endometrio sottile si basano su modelli animali, rendendo cruciale la selezione di un modello appropriato. Qui, descriviamo un protocollo dettagliato che produce un modello endometriale sottile affidabile e riproducibile nei topi.

L'operazione è traumatica, poiché dobbiamo sezionare il topo ed esporre il corno uterino del topo per la manipolazione. Un'operazione impropria può causare infezioni o addirittura portare alla morte dei topi. Infatti, prima dell'operazione sperimentale sono necessarie un'attenta formazione ed esperienza.

Abbiamo sviluppato con successo un modello endometriale con un tempo di infusione che varia da uno a tre minuti per replicare i vari gradi di sintomi endometriali sottili osservati nei casi clinici. Questo ci permette di creare modelli con diversi livelli di danno, a seconda delle esigenze specifiche della nostra ricerca. Il metodo utilizzato nel nostro protocollo offre il vantaggio del basso costo, dell'idoneità e del periodo sperimentale.

Studia il meccanismo patologico e il trattamento in tre iniziali rispetto ad altre tecniche. Per iniziare, posizionare il topo anestetizzato supino sul tavolo operatorio preriscaldato e, utilizzando del nastro adesivo, fissare gli arti del topo. Utilizzando forbici e pinze sterili, praticare un'incisione di un centimetro nell'addome, situata a circa un centimetro dall'orifizio uretrale, che si estende fino alla cavità peritoneale.

Sposta delicatamente le interiora con una pinza sterile per localizzare l'utero. Esporre il corno uterino destro e applicare morsetti emostatici all'estremità prossimale vicino alla cervice e all'estremità distale vicino all'ovaio. Con una siringa da 25 gauge, instillare circa 50 microlitri di etanolo al 95% nella cavità uterina, tenendo l'ago parallelo al corno uterino.

Mantenere la siringa da uno a cinque minuti, a seconda dei casi. Quindi, prelevare l'etanolo dalla cavità uterina e sciacquare la cavità uterina con soluzione fisiologica sterile cinque volte per rimuovere l'etanolo residuo. Ora, rimuovi le pinze emostatiche e riporta l'utero e le interiora nella loro posizione originale.

Utilizzando suture chirurgiche riassorbibili 5/0, suturare il peritoneo, seguito dall'epidermide. Per iniziare, posiziona un modello di topo di endometrio sottile eutanasia sul tavolo di dissezione e taglia le suture usando le forbici chirurgiche per esporre l'utero. Quindi, utilizzando una pinza chirurgica, estrarre con cura l'intero utero e staccare l'utero dalle viscere circostanti.

Rimuovere immediatamente entrambe le corna uterine e dividere ciascuna corna in tre o quattro piccoli segmenti. Mettere i tessuti uterini in un millilitro di paraformaldeide al 4% prelevata in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri. Posizionare i campioni fissati in formalina in cassette di tessuto e trasferire le cassette di tessuto attraverso una serie di concentrazioni di etanolo, seguite da xilene e paraffina.

Riempi uno stampo di cera con cera di paraffina fusa riscaldata a 55 gradi Celsius. Utilizzare una pinza riscaldata per trasferire rapidamente i segmenti di tessuto infiltrati dalla cassetta di inclusione allo stampo in cera. Una volta posizionati correttamente i segmenti di tessuto, posizionare la parte inferiore della cassetta di inclusione sopra lo stampo per istologia.

Successivamente, posizionare lo stampo direttamente su una piastra di raffreddamento impostata a quattro gradi Celsius per almeno 20 minuti per far solidificare la paraffina. Quindi, rimuovere il campione dallo stampo e utilizzare un rifinitore di paraffina per tagliare la cera in eccesso attorno ad esso. Lo spessore dell'endometrio e il numero di ghiandole endometriali sono diminuiti significativamente nei gruppi di uno, due e tre minuti rispetto al gruppo di controllo.

Nei gruppi di quattro e cinque minuti sono state osservate una grave adesione uterina e una cavità uterina quasi invisibile e non sono state trovate ghiandole endometriali. La fibrosi endometriale aumentava con la durata dell'infusione di etanolo, come dimostrato da un'eccessiva colorazione in gruppi da uno a cinque minuti rispetto al controllo.