Name: Infezione dei pini in vivo e in vitro con il nematode Bursaphelenchus xylophilus e isolamento dei volatili indotti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Scopri il sistema di co-coltura in vitro di germogli di pino con il nematode Bursaphelenchus xylophilus per analizzare i composti volatili emessi. Questo metodo riduce la variabilità genetica e facilita lo studio delle risposte dell'ospite.

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<meta charset="utf8"></head><body>Ottimizzazione dell'infezione da nematode del pino nel Pinus pinaster

<ol><li>Back, M. A., Bonifácio, L., Inácio, M. L., Mota, M., Boa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wilt+disease%3A+A+global+threat+to+forestry%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Pine wilt disease: A global threat to forestry.</a> Plant Pathol. 73 (5), 1026-1041 (2024).</li>
<li>Mumm, R., Hilker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+chemical+defence+of+pine+against+folivorous+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect chemical defence of pine against folivorous insects.</a> Trend Plant Sci. 11 (7), 351-358 (2006).</li>
<li>Carrasquinho, I., Lisboa, A., Inácio, M. L., Gonçalves, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+in+susceptibility+to+pine+wilt+disease+of+maritime+pine+%28Pinus+pinaster+Aiton%29+half-sib+families%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Forest+Sci%22%5BJournal%5D)">Genetic variation in susceptibility to pine wilt disease of maritime pine (Pinus pinaster Aiton) half-sib families.</a> Annals Forest Sci. 75 (3), 85(2018).</li>
<li>Gaspar, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+pinewood+nematode+on+naturally-emitted+volatiles+and+scCO2+extracts+from+Pinus+pinaster+branches%3A+a+comparison+with+P.+pinea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Impact of the pinewood nematode on naturally-emitted volatiles and scCO2 extracts from Pinus pinaster branches: a comparison with P. pinea.</a> J Supercritical Fluids. 159, 104784(2020).</li>
<li>Rodrigues, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pinus+halepensis%2C+Pinus+pinaster%2C+Pinus+pinea+and+Pinus+sylvestris+essential+oils+chemotypes+and+monoterpene+hydrocarbon+enantiomers%2C+before+and+after+inoculation+with+the+pinewood+nematode+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biodiver%22%5BJournal%5D)">Pinus halepensis, Pinus pinaster, Pinus pinea and Pinus sylvestris essential oils chemotypes and monoterpene hydrocarbon enantiomers, before and after inoculation with the pinewood nematode Bursaphelenchus xylophilus.</a> Chem Biodiver. 14 (1), e1600153(2017).</li>
<li>Faria, J. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+co-cultures+of+Pinus+pinaster+with+Bursaphelenchus+xylophilus%3A+a+biotechnological+approach+to+study+pine+wilt+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">In vitro co-cultures of Pinus pinaster with Bursaphelenchus xylophilus: a biotechnological approach to study pine wilt disease.</a> Planta. 241 (6), 1325-1336 (2015).</li>
<li>Espinosa-Leal, C. A., Puente-Garza, C. A., García-Lara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+plant+tissue+culture%3A+means+for+production+of+biological+active+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">In vitro plant tissue culture: means for production of biological active compounds.</a> Planta. 248 (1), 1-18 (2018).</li>
<li>Bonga, J. M., von Aderkas, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBonga%2C+JM+%22In+Vitro+Culture+of+Trees%22">In Vitro Culture of Trees</a>. , Springer. Netherlands, Dordrecht. (1992).</li>
<li>Faria, J. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematotoxic+and+phytotoxic+activity+of+Satureja+montana+and+Ruta+graveolens+essential+oils+on+Pinus+pinaster+shoot+cultures+and+P.+pinaster+with+Bursaphelenchus+xylophilus+in+vitro+co-cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Indus+Crops+Prod%22%5BJournal%5D)">Nematotoxic and phytotoxic activity of Satureja montana and Ruta graveolens essential oils on Pinus pinaster shoot cultures and P. pinaster with Bursaphelenchus xylophilus in vitro co-cultures.</a> Indus Crops Prod. 77, 59-65 (2015).</li>
<li>Vallarino, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquisition+of+volatile+compounds+by+gas+chromatography-mass+spectrometry+%28GC-MS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Metabol.+Meth+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Acquisition of volatile compounds by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS).</a> Plant Metabol. Meth Mol Biol. , 225-239 (2018).</li>
<li>Kikuchi, T., Aikawa, T., Oeda, Y., Karim, N., Kanzaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+precise+diagnostic+method+for+detecting+the+pinewood+nematode+Bursaphelenchus+xylophilus+by+loop-mediated+isothermal+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">A rapid and precise diagnostic method for detecting the pinewood nematode Bursaphelenchus xylophilus by loop-mediated isothermal amplification.</a> Phytopathology. 99 (12), 1365-1369 (2009).</li>
<li>Faria, J. M. S., Barbosa, P., Bennett, R. N., Mota, M., Figueiredo, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactivity+against+Bursaphelenchus+xylophilus%3A+Nematotoxics+from+essential+oils%2C+essential+oils+fractions+and+decoction+waters%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Bioactivity against Bursaphelenchus xylophilus: Nematotoxics from essential oils, essential oils fractions and decoction waters.</a> Phytochemistry. 94, 220-228 (2013).</li>
<li>Nickle, W. R., Golden, A. M., Mamiya, Y., Wergin, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+taxonomy+and+morphology+of+the+pine+wood+nematode%2C+Bursaphelenchus+xylophilus+%28Steiner+%26Buhrer+1934%29+Nickle+1970%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nematol%22%5BJournal%5D)">On the taxonomy and morphology of the pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner &Buhrer 1934) Nickle 1970.</a> J Nematol. 13 (3), 385-392 (1981).</li>
<li>Viglierchio, D. R., Schmitt, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+methodology+of+nematode+extraction+from+field+samples%3A+baermann+funnel+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nematol%22%5BJournal%5D)">On the methodology of nematode extraction from field samples: baermann funnel modifications.</a> J Nematol. 15 (3), 438-444 (1983).</li>
<li>IPPC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IPPC+DP+10%3A+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+protocols%2C+International+standard+for+phytosanitary+measures%22%5BJournal%5D)">IPPC DP 10: Bursaphelenchus xylophilus.</a> Diagnostic protocols, International standard for phytosanitary measures. 27, 1-40 (2016).</li>
<li>Rodrigues, A. M., Carrasquinho, I., António, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+metabolite+adjustments+associated+with+pinewood+nematode+Resistance+in+Pinus+pinaster%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Primary metabolite adjustments associated with pinewood nematode Resistance in Pinus pinaster.</a> Front Plant Sci. 12, 10(2021).</li>
<li>Gonçalves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Monochamus+galloprovincialis+feeding+on+Pinus+pinaster+and+Pinus+pinea%2C+oleoresin+and+insect+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Effect of Monochamus galloprovincialis feeding on Pinus pinaster and Pinus pinea, oleoresin and insect volatiles.</a> Phytochemistry. 169, September 2019 112159(2020).</li>
<li>Schenk, R. U., Hildebrandt, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medium+and+techniques+for+induction+and+growth+of+monocotyledonous+and+dicotyledonous+plant+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+J+Botany%22%5BJournal%5D)">Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures.</a> Canadian J Botany. 50 (1), 199-204 (1972).</li>
<li>Tereso, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+axillary+and+adventitious+bud+regeneration+from+Portuguese+genotypes+of+Pinus+pinaster+AIT%5BTitle%5D)+AND+%22Propag+Ornam+Plants%22%5BJournal%5D)">Improved axillary and adventitious bud regeneration from Portuguese genotypes of Pinus pinaster AIT.</a> Propag Ornam Plants. 6 (1), 24-33 (2006).</li>
<li>Council of Europe European Directorate for the Quality of Medicines. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22European+Pharmacopoeia%22">European Pharmacopoeia</a>. , 241(2010).</li>
<li>Likens, S. T., Nickerson, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+certain+hop+oil+constituents+in+brewing+products%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Ann+Meet+-+Am+Soc+Brewing+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection of certain hop oil constituents in brewing products.</a> Proc Ann Meet - Am Soc Brewing Chem. 22 (1), 5-13 (1964).</li>
<li>Karimi, A., Gross, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+innovative+headspace+collection+technique%3A+volatile+organic+compound+patterns+emitted+by+different+developmental+stages+of+Halyomorpha+halys%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Horti%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an innovative headspace collection technique: volatile organic compound patterns emitted by different developmental stages of Halyomorpha halys.</a> Front Horti. 3, (2024).</li>
<li>Koedam, A., Scheffer, J. J. C., Baerheim Svendsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+isolation+procedures+for+essential+oils+-+II.+Ajowan%2C+Caraway%2C+Coriander+and+Cumin%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Lebensmittel-Untersuchung+und+-Forschung%22%5BJournal%5D)">Comparison of isolation procedures for essential oils - II. Ajowan, Caraway, Coriander and Cumin.</a> Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und -Forschung. 168 (2), 106-111 (1979).</li>
<li>Abdulra'uf, L. B., Hammed, W. A., Tan, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPME+fibers+for+the+analysis+of+pesticide+residues+in+fruits+and+vegetables%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">SPME fibers for the analysis of pesticide residues in fruits and vegetables: A review.</a> Crit Rev Anal Chem. 42 (2), 152-161 (2012).</li>
<li>Gross, J., Gallinger, J., Rid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collection%2C+identification%2C+and+statistical+analysis+of+volatile+organic+compound+patterns+emitted+by+phytoplasma+infected+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Collection, identification, and statistical analysis of volatile organic compound patterns emitted by phytoplasma infected plants.</a> Methods Mol Biol. 1875, 333-343 (2019).</li>
<li>ISO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ISO+7609%3A1985+Essential+Oils-Analysis+by+Gas+Chromatography+on+Capillary+Columns-General+Method%5BTitle%5D)+AND+%22ISO%3A+Geneva%2C+Switzerland%22%5BJournal%5D)">ISO 7609:1985 Essential Oils-Analysis by Gas Chromatography on Capillary Columns-General Method.</a> ISO: Geneva, Switzerland. , (1985).</li>
<li>Rubiolo, P., Sgorbini, B., Liberto, E., Cordero, C., Bicchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+oils+and+volatiles%3A+Sample+preparation+and+analysis.+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Flav+Fragr+J%22%5BJournal%5D)">Essential oils and volatiles: Sample preparation and analysis. A review.</a> Flav Fragr J. 25 (5), 282-290 (2010).</li>
<li>Fielding, N. J., Evans, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophilus+%28Steiner+and+Buhrer%29+nickle+%28%3D+B.+lignicolus+Mamiya+and+Kiyohara%29%3A+An+assessment+of+the+current+position%5BTitle%5D)+AND+%22Forestry%22%5BJournal%5D)">The pine wood nematode Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) nickle (= B. lignicolus Mamiya and Kiyohara): An assessment of the current position.</a> Forestry. 69 (1), 34-46 (1996).</li>
<li>Faria, J. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+report+on+the+synergistic+interaction+between+essential+oils+against+the+pinewood+nematode+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">First report on the synergistic interaction between essential oils against the pinewood nematode Bursaphelenchus xylophilus.</a> Plants. 12 (13), 2438(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Setaccio analitico a 38 maglie</td><td>Retsch</td><td>60.131.000038</td><td></td></tr><tr><td>6-Benzylaminopurin (6-BAP)</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>B0904</td><td></td></tr><tr><td>Attivato a carbone</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C1302</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchio Clevenger</td><td>WINZER Laborglastechnik</td><td>25-000-02</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di perossido di idrogeno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Acido indolo-3-butirrico (IBA)</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>I0902</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchio di Likens-Nickerson</td><td>VitriLab LDA.</td><td>c/IN29/32</td><td></td></tr><tr><td>Contenitori rotondi Microbox</td><td>Sac O2</td><td>O118/80+OD118</td><td></td></tr><tr><td>n-Pentano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.00882</td><td></td></tr><tr><td>PARAFILM M film sigillante</td><td>MARCA</td><td>HS234526B-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Phyto agar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>P1003</td><td></td></tr><tr><td>Destrosio di patate Agar</td><td>BD DIFCO</td><td>213400</td><td></td></tr><tr><td>Lama per bisturi n. 24</td><td>Olanda Romed</td><td>BLADE24</td><td></td></tr><tr><td>Schenk & Hildebrandt Sale basale medio</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0225</td><td></td></tr><tr><td>Schenk & Miscela vitaminica Hildebrandt</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0411</td><td></td></tr><tr><td>Assemblaggio fibre SPME Polidimetilsilossano (PDMS)</td><td>Supelco</td><td>57300-U</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per fibre SPME</td><td>Supelco</td><td>57330-U</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>Tenax TA- tubi in acciaio inossidabile condizionati + tappati</td><td>Markes International</td><td>C1-AAXX-5003</td><td></td></tr></tbody></table>

infezione dei pini in vivo e in vitro con il nematode bursaphelenchus xylophilus e isolamento dei volatili indotti

Infection of In Vivo and In Vitro Pines with the Pinewood Nematode Bursaphelenchus xylophilus and Isolation of Induced Volatiles

Il nematode del pino si riproduce rapidamente in condizioni ottimali e i tempi di generazione possono essere di soli 4 giorni, con ogni femmina che depone circa 80 uova durante la sua vita28. Utilizzando la metodologia sopra descritta, è possibile ottenere grandi quantità di PWN a seconda della crescita fungina. Entro un periodo di crescita di 8 giorni, le nematodi del pino possono avere un aumento di 100 volte del numero di popolazione (Figura 1). Per aumentare la consistenza delle quantità di PWN, utilizzare PWN sterilizzate poiché la contaminazione con batteri o funghi sconosciuti avrà un impatto negativo sulla popolazione di PWN.
L'infezione riuscita delle piantine di pino con il PWN provocherà i sintomi della PWD circa 20 giorni dopo l'infezione (Figura 2). Tuttavia, P. pinaster è noto per possedere un'elevata variabilità genetica sulla suscettibilità alle PWD e le variazioni sul momento dell'insorgenza dei sintomi sono molto comuni3.
I germogli di pino in vitro non hanno questa variabilità genetica e le condizioni ambientali e nutrizionali sono controllate e impostate in base alle esigenze dell'utente. Le colture in vitro di germogli di pino marittimo crescono bene nel mezzo di allungamento SH, mostrando un tasso di crescita di circa 0,9 mm a settimana6. Idealmente, le PWN sterili possono essere aggiunte a germogli con almeno 5 cm (dalla base all'ago più alto). Poiché i germogli di pino in vitro sono più piccoli e l'area di infezione da PWN è ridotta, la crescita della popolazione di nematodi è meno espressiva, quindi i tempi di raddoppio possono essere compresi tra 6 e7 giorni. Tuttavia, gli aghi clorotici possono essere osservati entro un mese dalla co-coltura (Figura 3). Rispetto ai pini cresciuti in serra, le colture in vitro di germogli di pino consentono la sincronizzazione dei sintomi della PWD, il controllo della temperatura e del fotoperiodo, il controllo dello stato nutrizionale e la prevenzione della contaminazione.
Le piantine di P. pinaster di due anni hanno una resa in olio essenziale di circa lo 0,2% ± lo 0,1% (v/peso fresco) e un profilo volatile ricco di α-pinene, β-pinene o δ-3-carene, con regolare variabilità chimica. Attualmente, sono stati identificati due chemiotipi principali, uno in cui il α-pinene e il β-pinene sono dominanti e un altro in cui il α-pinene e il β-pinene condividono la dominanza con il δ-3-carene5. I germogli in vitro di pino marittimo possono essere coltivati in base al chemiotipo desiderato, i cui volatili sono completamente profilati attraverso GC-MS. Mentre i profili volatili dei volatili ottenuti per distillazione-estrazione possono essere diversi da quelli degli oli essenziali, in P. pinaster sono simili (Figura 5A). Le tecniche di estrazione volatile sono adeguate per valutare i cambiamenti indotti nei profili dei metaboliti volatili del pino. Le tecniche di cattura volatile forniscono informazioni sui volatili emessi dai pini. I profili chimici delle tecniche SPME possono essere diversi, ma le differenze dipendono solitamente dalla quantità di materiale vegetale e dai volatili intrappolati (Figura 5B, C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67149/67149fig01.jpg"> Figura 1: Crescita in vitro del nematode del pino (A) Ceppo di Botrytis cinerea non sporulante coltivato in semi d'orzo idratati sterilizzati e (B) Coltura in vitro di nematode del pino dopo essersi nutrito di micelio fungino. Barra della scala = 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67149/67149fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67149/67149fig02.jpg"> Figura 2: Prove in serra con piantine di pino. (A) Piantine di Pinus pinaster di 2 anni senza e (B) con sintomi della malattia dell'appassimento del pino. Barra della scala = 10 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67149/67149fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67149/67149fig03.jpg"> Figura 3: Esperimenti in vitro con microgermogli di pino. Pinus pinaster in colture di germogli in vitro (A) prima e (B) dopo l'infezione da nematode del pino. La clorosi a causa dell'infezione da nematodi può essere osservata negli aghi per microgermogli (frecce). Barra della scala = 1,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67149/67149fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67149/67149fig04.jpg"> Figura 4: Configurazione per i diversi sistemi di isolamento dei volatili. Isolamento di (A) oli essenziali mediante idrodistillazione (apparato di Clevenger), (B) volatili mediante distillazione-estrazione (apparato di Likens-Nickerson) e volatili dello spazio di testa mediante microestrazione in fase solida (SPME) con (C) fibre o (D) tubi impaccati. Barra della scala = 10 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67149/67149fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67149/67149fig05.jpg"> Figura 5: Cromatogrammi rappresentativi dei volatili dei germogli di Pinus pinaster . (A) olio essenziale, (B) volatili raccolti mediante fibra di microestrazione in fase solida e (C) volatili emessi utilizzando tubi impaccati. Identificato utilizzando una libreria di riferimento costruita in laboratorio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67149/67149fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Infezione dei pini in vivo e in vitro con il nematode Bursaphelenchus xylophilus e isolamento dei volatili indotti

The pinewood nematode (PWN) is a phytoparasite that causes pine wilt disease (PWD) in conifer species. This plant parasitic nematode has heavily ...

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Viene presentato un protocollo per studiare il comportamento di accoppiamento del nematode del pino, Bursaphelenchus xylophilus. Le caratteristiche comportamentali di B. xylophilus sono descritte nel processo di accoppiamento.

Osservazione e quantificazione di comportamento di accoppiamento nel nematode del pino, Bursaphelenchus xylophilus

Qui, introduciamo un metodo dettagliato di ammollo dell'interferenza dell'RNA in Bursaphelenchus xylophilus per facilitare lo studio delle funzioni geniche.

Applicazione dell'interferenza dell'RNA nel nematode del pino, Bursaphelenchus xylophilus

Qui presentiamo un protocollo per ottenere funghi entomopatogeni da una piralide forestale e un modo sostitutivo per valutare le loro attività entomopatogene utilizzando un insetto modello di Coleotteri. Questo metodo è efficiente e conveniente per esplorare le risorse fungine entomopatogene da insetti nocivi che perforano il legno nelle foreste naturali.

Isolamento, identificazione comportamentale e valutazione della patogenicità di funghi entomopatogeni da una piralide forestale

Il presente protocollo descrive un metodo per indurre la dispersione di giovani al terzo stadio (giovani pre-dauer, JIII.) di Bursaphelenchus xylophilus in criptobiosi attraverso la regolazione osmotica di ioni cloruro di potassio (KCl). Questo metodo può fornire supporto tecnico per la ricerca sui meccanismi di resistenza allo stress di B. xylophilus.

Induzione dell'ingresso di giovani in dispersione al terzo stadio di Bursaphelenchus xylophilus nella criptobiosi attraverso la regolazione osmotica

Il protocollo descrive l'infezione delle radici di Solanum tuberosum con nematodi parassiti delle piante in condizioni di serra in vivo e radici transgeniche in vitro di patate per l'analisi istochimica della struttura radicale attraverso la microscopia ottica.

Infezione in vivo e in vitro delle radici della patata con nematodi parassiti delle piante per la valutazione dei cambiamenti strutturali indotti

Clatrina endocitosi mediata dipende da proteine ​​adattatrici che coordinano la selezione delle merci e montaggio cappotto clatrina. Qui si descrivono le modalità di studio adattatore clatrina interazione fisica e l'imaging di cellule in vivo approcci utilizzando come modello il lievito endocitico Sla1p proteina adattatore.

In vivo e in vitro di adattatore-clatrina Interazione

Un push-pull metodo per la raccolta di volatili impianto è descritto. Il metodo permette un confronto tra volatili indotte da alimentazione erbivoro, jasmonate metil esogena, e danni meccanici. Questa tecnica viene utilizzata anche per studiare la risposta volatili di rami danneggiati all'esposizione a sostanze volatili dai rami erbivoro-danneggiato all'interno di impianti di mirtillo.

Volatili Blueberry erbivori indotta e intra-impianto di segnalazione

Un metodo per analizzare la distribuzione di progenitori midollari ematopoietiche citometria di flusso e per isolare in modo efficiente altamente purificate cellule staminali ematopoietiche (CSE) è descritto. La procedura di isolamento è essenzialmente basata su un arricchimento magnetico di c-kit + e le cellule di separazione delle cellule per purificare CSE per studi cellulari e molecolari.

L&#39;analisi fenotipica e l&#39;isolamento di murini cellule staminali ematopoietiche e Lineage-committed progenitori

Epatociti primari costituirà un valido strumento per valutare le funzioni biochimiche, molecolari e metaboliche in un sistema fisiologicamente rilevante sperimentale. Noi descriviamo un protocollo affidabile per la perfusione di fegato di ratto in situ, che genera costantemente epatociti vitali fino to1.0 ×...

Isolamento e la coltura primaria di cellule epatiche di ratto

Una tecnica per identificare i siti di pausa traslabile su mRNA viene descritto. Questa procedura è basata su isolamento di polipeptidi nascenti accumulano sui ribosomi durante traduzione in vitro di un mRNA bersaglio, seguita dall'analisi dimensione delle catene nascenti elettroforesi utilizzando un gel denaturante.

Isolamento dei ribosomi Polipeptidi Bound nascenti<em&gt; In vitro</em&gt; Per identificare i siti di pausa traslazione lungo mRNA

Scopri il sistema di co-coltura in vitro di germogli di pino con il nematode Bursaphelenchus xylophilus per analizzare i composti volatili emessi. Questo metodo riduce la variabilità genetica e facilita lo studio delle risposte dell'ospite.

Infezione dei pini in vivo e in vitro con il nematode Bursaphelenchus xylophilus e isolamento dei volatili indotti

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