Infezione dei pini in vivo e in vitro con il nematode Bursaphelenchus xylophilus e isolamento dei volatili indotti

Il protocollo descrive l'infezione da nematodi di pino in vivo e in vitro di Pinus pinaster e la loro analisi dei volatilomi mediante gascromatografia (GC) e GC accoppiata a spettrometria di massa (GC-MS).

Abbiamo stabilito un sistema di co-coltura in vitro di germogli di pino con i nematodi del pino per commercializzare e studiare i cambiamenti nella risposta volatile dell'ospite a questi fitoparassiti. Le biocase in serra consentono il controllo della variabilità ambientale. Tuttavia, la diversità genetica delle piantine di pino influenza ancora i profili volatili risultanti.

I germogli di pino in vitro infettati con i nematodi del pino consentono il campionamento di cloni vegetali facilmente ottenibili, riducendo l'influenza della variabilità derivante dalla diversità genetica del pino. I volatili delle piante sono isolati mediante idrodistillazione nell'estrazione per distillazione, ma le tecniche dello spazio di testa consentono la profilazione dei volatili emessi dalla pianta. Le colonne impaccate in resina saranno utilizzate come tecnica non invasiva per profilare i volatili emessi dal pino macinato in vitro infettato con nematode del pino per l'analisi diretta dell'interazione chimica tra l'ospite e il fitoparassita.