Name: Trapianto di cellule ad alta risoluzione in zebrafish embrionale e larvale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Impara il trapianto di cellule ad alta risoluzione in embrioni e larve di zebrafish per studiare la dinamica spaziale e temporale dei segnali neurali durante lo sviluppo. Questo metodo consente il tracciamento a lungo termine delle cellule trapiantate.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Robusto trapianto di cellule di pesce zebra per la ricerca sulla rigenerazione e lo sviluppo

<ol><li>Solini, G. E., Dong, C., Saha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+transplantation+experiments%3A+Past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic transplantation experiments: Past, present, and future.</a> Trends Dev Biol. 10, 13-30 (2017).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22A+Conceptual+History+of+Modern+Embryology%22">A Conceptual History of Modern Embryology</a>. , Springer. New York, NY. (1991).</li>
<li>Spemann, H., Mangold, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+embryonic+primordia+by+implantation+of+organizers+from+a+different+species.+1923%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of embryonic primordia by implantation of organizers from a different species. 1923.</a> Int J Dev Biol. 45 (1), 13-38 (2001).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lineage Tracing.</a> Cell. 148 (1), 33-45 (2012).</li>
<li>Gansner, J. M., Dang, M., Ammerman, M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+22+-+Transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 22 - Transplantation in zebrafish.</a> Methods in Cell Biol. 138, 629-647 (2017).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+interphase+nucleus+in+Japanese+quail+%28Coturnix+coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Biol+Fr+Belg%22%5BJournal%5D)">Details of the interphase nucleus in Japanese quail (Coturnix coturnix japonica).</a> Bull Biol Fr Belg. 103 (3), 435-452 (1969).</li>
<li>Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+movements+and+cell+fate+during+zebrafish+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Suppl%22%5BJournal%5D)">Cell movements and cell fate during zebrafish gastrulation.</a> Dev Suppl. , 65-73 (1992).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+patterning+deciphered+in+avian+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Developmental patterning deciphered in avian chimeras.</a> Development, Growth & Differentiation. 50, S11-S28 (2008).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332 (6031), 811-816 (2011).</li>
<li>Balaban, E., Teillet, M. A., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+quail-chick+chimera+system+to+the+study+of+brain+development+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Application of the quail-chick chimera system to the study of brain development and behavior.</a> Science. 241 (4871), 1339-1342 (1988).</li>
<li>Carmany-Rampey, A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+mosaic+analysis+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Modern mosaic analysis in the zebrafish.</a> Methods. 39 (3), 228-238 (2006).</li>
<li>Kragl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+keep+a+memory+of+their+tissue+origin+during+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration.</a> Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).</li>
<li>Rojo-Laguna, J. I., Garcia-Cabot, S., Saló, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+transplantation+in+planarians%3A+A+useful+tool+for+molecular+analysis+of+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue transplantation in planarians: A useful tool for molecular analysis of pattern formation.</a> Semin Cell Dev Biol. 87, 116-124 (2019).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+choreography+of+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular choreography of appendage regeneration.</a> Cell. 165 (7), 1598-1608 (2016).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+are+barely+required+for+the+patterning+and+cell+dynamics+in+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Muscles are barely required for the patterning and cell dynamics in axolotl limb regeneration.</a> Front Genet. 13, 1036641(2022).</li>
<li>Wells, K. M., Kelley, K., Baumel, M., Vieira, W. A., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+growth+and+size+in+the+axolotl+limb+regenerate%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural control of growth and size in the axolotl limb regenerate.</a> Elife. 10, e68584(2021).</li>
<li>Otsuki, L., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+memory+in+vertebrate+regeneration%3A+a+century%27s+insights+from+the+salamander+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Positional memory in vertebrate regeneration: a century's insights from the salamander limb.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 14 (6), e040899(2022).</li>
<li>de Abreu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model of neurodevelopmental disorders.</a> Neuroscience. 445, 3-11 (2020).</li>
<li>Alper, S. R., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+advantages+of+zebrafish+larvae+as+a+model+for+spinal+cord+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unique advantages of zebrafish larvae as a model for spinal cord regeneration.</a> Front Mol Neurosci. 15, 983336(2022).</li>
<li>Blader, P., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+developmental+genetics+and+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish developmental genetics and central nervous system development.</a> Hum Mol Genet. 9 (6), 945-951 (2000).</li>
<li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J Vis Exp. (29), e1394(2009).</li>
<li>Boulanger-Weill, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interactions+between+newborn+and+mature+neurons+leading+to+integration+into+established+neuronal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional interactions between newborn and mature neurons leading to integration into established neuronal circuits.</a> Curr Biol. 27 (12), 1707-1720 (2017).</li>
<li>Dong, J., Stuart, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+manipulation+in+zebrafish+by+using+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgene manipulation in zebrafish by using recombinases.</a> Methods Cell Biol. 77, 363-379 (2004).</li>
<li>Kawakami, K., Shima, A., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+functional+transposase+of+the+Tol2+element%2C+an+Ac-like+element+from+the+Japanese+medaka+fish%2C+and+its+transposition+in+the+zebrafish+germ+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of a functional transposase of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish, and its transposition in the zebrafish germ lineage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (21), 11403-11408 (2000).</li>
<li>Hwang, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+zebrafish+using+a+CRISPR-Cas+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system.</a> Nat Biotechnol. 31 (3), 227-229 (2013).</li>
<li>Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+primary+motoneuron+identity+in+developing+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Determination of primary motoneuron identity in developing zebrafish embryos.</a> Science. 252 (5005), 569-572 (1991).</li>
<li>Elsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5+-+Cellular+methods%3A+detailed+procedure+for+transplanting+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 5 - Cellular methods: detailed procedure for transplanting single cells.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Poulain, F. E., Gaynes, J. A., Stacher Hörndli, C., Law, M. -Y., Chien, C. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+retinal+axon+guidance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analyzing retinal axon guidance in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 100, 3-26 (2010).</li>
<li>Masai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+mediates+retinal+lamination%2C+maintenance+of+forebrain+compartments+and+patterning+of+retinal+neurites%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">N-cadherin mediates retinal lamination, maintenance of forebrain compartments and patterning of retinal neurites.</a> Development. 130 (11), 2479-2494 (2003).</li>
<li>Raible, D. W., Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+interactions+in+zebrafish+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulative interactions in zebrafish neural crest.</a> Development. 122 (2), 501-507 (1996).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Barsh, G. R., Isabella, A. J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+motor+neuron+topographic+map+determined+by+parallel+mechanisms+of+hox5+expression+and+time+of+axon+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Vagus motor neuron topographic map determined by parallel mechanisms of hox5 expression and time of axon initiation.</a> Curr Biol. 27 (24), 3812-3825 (2017).</li>
<li>Isabella, A. J., Stonick, J. A., Dubrulle, J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+positional+memory+guides+target-specific+axon+regeneration+in+the+zebrafish+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intrinsic positional memory guides target-specific axon regeneration in the zebrafish vagus nerve.</a> Development. 148 (18), 199706(2021).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1%3A+General+methods+for+zebrafish+care%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 1: General methods for zebrafish care.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Grant, P. K., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroepithelial+basement+membrane+serves+as+a+boundary+and+a+substrate+for+neuron+migration+in+the+zebrafish+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">The neuroepithelial basement membrane serves as a boundary and a substrate for neuron migration in the zebrafish hindbrain.</a> Neural Dev. 5 (1), 9(2010).</li>
<li>Konantz, J., Antos, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+genetic+morpholino+approach+using+cardiac+ventricular+injection+to+transfect+multiple+difficult-to-target+tissues+in+the+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Reverse genetic morpholino approach using cardiac ventricular injection to transfect multiple difficult-to-target tissues in the zebrafish larva.</a> J Vis Exp. (88), e51595(2014).</li>
<li>Novoa, B., Figueras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+model+for+the+study+of+inflammation+and+the+innate+immune+response+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: model for the study of inflammation and the innate immune response to infectious diseases.</a> Adv Exp Med Biol. 946, 253-275 (2012).</li>
<li>Speirs, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+fish+neutrophil+and+macrophage+response+to+immune+challenge+from+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Shellfish+Immunol%22%5BJournal%5D)">What can we learn about fish neutrophil and macrophage response to immune challenge from studies in zebrafish.</a> Fish Shellfish Immunol. 148, 109490(2024).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Wienholds, E., Schulte-Merker, S., Walderich, B., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-selected+inactivation+of+the+zebrafish+rag1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target-selected inactivation of the zebrafish rag1 gene.</a> Science. 297 (5578), 99-102 (2002).</li>
<li>Petrie-Hanson, L., Hohn, C., Hanson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rag1+mutant+zebrafish+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of rag1 mutant zebrafish leukocytes.</a> BMC Immunol. 10, 8(2009).</li>
<li>Roh-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-dependent+cytoplasmic+transfer+during+melanoma+invasion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage-dependent cytoplasmic transfer during melanoma invasion in vivo.</a> Dev Cell. 43 (5), 549-562 (2017).</li>
<li>Bukrinsky, A., Griffin, K. J. P., Zhao, Y., Lin, S., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+spi-1-like+%28spi-1l%29+in+zebrafish+myeloid+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Essential role of spi-1-like (spi-1l) in zebrafish myeloid cell differentiation.</a> Blood. 113 (9), 2038-2046 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Siringa serbatoio da 10 mL"Fisher</td> <td>Scientific</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>Filtro sottovuoto monouso da 150 mL, .2 &micro; m, PES</td><td>Corning</td><td>431153</td><td></td></tr><tr><td>Blocco riscaldante 20 x 12 mm</td><td>Corning</td><td>480122</td><td></td></tr><tr><td>rubinetto a 3 vie</td><td>Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>455991</tr><tr><td>3 x 1 Vetrino in vetro smerigliato</td><td>VWR</td><td>48312-004</td><td></td></tr><tr><td>40x obiettivo di immersione dell'acqua</td><td>Nikon</td><td>MRD07420</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio diidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td></td></tr><tr><td>Manipolatore grossolano</td><td>Narishige</td><td>MN-4</td><td></td></tr><tr><td>Pompa a microsiringa personalizzata</td><td>Università dell'Oregon</td><td>N / A</td><td>Prodotto dall'officina meccanica dell'Università dell'Oregon (tsa.uoregon@gmail.com). Di seguito è elencata un'alternativa disponibile in commercio.</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinze</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>1129500</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse FN1 "Microscopio per trapianti"</td><td>Impugnatura</td> dell'elettrodo <td>Nikon N/A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>World Precision Instruments</td><td>5444</td><td></td></tr><tr><td>Lama chirurgica sterile in piuma, #11</td><td>VWR</td><td>21899-530</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore fine, olio idraulico a tre assi&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7.2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-100G</td><td></td></tr><tr><td>Manico per bisturi stile #3 ad alta precisione</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-163</td><td></td></tr><tr><td>Kimble Pipetta Pasteur in borosilicato monouso, punta larga, 5,75 in</td><td>DWK Life Sciences</td><td>63A53WT</td><td></td></tr><tr><td>Adattatore per cromatografia KIMBLE&nbsp;</td><td>DWK Life Sciences</td><td>420408-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Olio minerale leggero</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3516-1L</td><td></td></tr><tr><td>LSE riscaldatore digitale per bagno a secco, 1 blocco, 120 V</td><td>Corning</td><td>6875SB</td><td></td></tr><tr><td>Pompa manuale per microsiringhe</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP</td><td>Alternativa commerciale alla pompa per microsiringhe personalizzata</td></tr><tr><td>Supporto per microelettrodi</td><td>World Precision Instruments</td><td>MPH310</td><td></td></tr><tr><td>Riempitivo per pipette MicroFil</td> World <td>Precision Instruments</td><td>MF28G67-5</td><td></td></tr><tr><td>Smalto per unghie</td><td>Microscopia elettronica Scienze</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Acqua priva di nucleasi</td><td>VWR</td><td>82007-334</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Estrattore per micropipette di tipo fiammato/marrone</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p4458-100ML</td><td>5.000 unità di penicillina e 5 mg di streptomicina/</td></tr><tr><td>mL pompa per pipette 10 mL</td><td>Bel-Art</td><td>37898-0000</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr> Professional <tr><td>Super Glue</td><td>Loctite</td><td>LOC1365882</td><td></td></tr><tr><td>Provette</td> <td>in polistirene a fondo tondoFalcon</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Micrometro da palcoscenico</td><td>Meiji Techno America</td><td>MA285</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe senza ago, 50 mL</td><td>BD Medical</td><td>309635</td><td></td></tr><tr><td>Tricaina Metanosulfonato</td><td>Syndel USA</td><td>SYNCMGAUS03</td><td></td></tr><tr><td>Trilene XL a colata liscia Lenza</td><td>Berkley</td><td>XLFS6-15</td><td></td></tr><tr><td>Tubo, polietilene n. 205</td><td>BD Medical</td><td>427445</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure a basso punto di fusione Agarosio</td><td>Invitrogen</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette calibrate Wiretrol II</td><td>Drummond</td><td>50002010</td><td></td></tr></tbody></table>

trapianto di cellule ad alta risoluzione in zebrafish embrionale e larvale

High-resolution Cell Transplantation in Embryonic and Larval Zebrafish

I risultati degli esperimenti di trapianto sono osservati direttamente visualizzando cellule di donatori marcate in fluorescenza in animali ospiti in momenti appropriati dopo il trapianto utilizzando un microscopio a fluorescenza. Qui, abbiamo trapiantato singoli neuroni del vago anteriore a 3 dpf. Gli animali ospiti sono stati quindi incubati per 12 o 48 ore, anestetizzati, montati in LMA su un vetrino coprioggetti e sottoposti a imaging con un microscopio confocale (Figura 5). A 12 ore dopo il trapianto (hpt), osserviamo un neurone donatore trapiantato con successo (Figura 5A). Possiamo confermare il corretto posizionamento della cellula, poiché si trova tra i neuroni vago dell'ospite nella regione anteriore del nucleo motorio vago dell'ospite; la cellula appare anche intatta e sana, come indicato dall'estensione di diverse sporgenze neuritiche corte (Figura 5A). A 2 giorni dal trapianto (dpt), possiamo nuovamente confermare che un singolo neurone è stato trapiantato con successo nella posizione corretta del nucleo ospite (Figura 5B). A questo punto, osserviamo che il neurone ha esteso un nuovo assone fino al 4° arco faringeo (Figura 5B). L'osservazione diretta rivela anche quando la procedura è fallita. In questo esempio, osserviamo un ospite di 2 dpt in cui non è presente alcun neurone donatore; piuttosto, è evidente un piccolo granello verde, probabilmente un frammento di un neurone di donatore morto dopo il trapianto (Figura 5C). Sebbene le percentuali di successo del trapianto varino in base all'esperienza dell'utente e al numero e al tipo di cellule trapiantate, sperimentiamo un tasso di successo (definito come la presenza di un neurone sopravvissuto che ha esteso un assone nell'ospite a 2-3 dpt) del 66% (n = 453 trapianti) per i trapianti di motoneurone vago eseguiti a 3-4 dpf33.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig01.jpg"> Figura 1: Panoramica dell'apparato per il trapianto. (A) Microscopio a fluorescenza verticale; (B) Obiettivo di immersione in acqua 40x; (C) micromanipolatore grossolano; (D) micromanipolatore fine; (E) portamicroelettrodo; (F) impugnatura dell'elettrodo; (G) rubinetto a tre vie; (H) pompa a microsiringa; (I) tubi in polietilene; (J) adattatori per cromatografia; (K) Siringa serbatoio da 10 mL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig02.jpg"> Figura 2: Montaggio di animali per il trapianto. (A) Un vetrino in vetro smerigliato da 3 pollici x 1 pollice con smalto trasparente applicato in un contorno rettangolare (linea tratteggiata). (B) Animali donatori (freccia) e ospiti (punta di freccia) montati in gocce di agarosio, allineati verticalmente con il sito bersaglio del trapianto (rombencefalo) orientato verso destra. (C) Agarosio con bordo destro e cunei tagliati per esporre il sito bersaglio del trapianto. Riquadro: zoom della regione in scatola. (D) Vetrino da trapianto inondato con soluzione di Ringer con penicillina-streptomicina e tricaina. Barre della scala = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig03.jpg"> Figura 3: Preparazione dell'ago da trapianto. (A) Ago da trapianto rotto in cima a un micrometro da tavolino. (B) Riempitivo per pipette (1) inserito nell'ago da trapianto (2) per riempire l'ago con olio minerale. (C) Vetrino da trapianto preparato e ago in posizione sul microscopio per trapianti. 1: Menisco d'acqua tra l'obiettivo di immersione 40x e il vetrino allagato 2: Ago da trapianto 3: Porta microelettrodo. (D) Punta di un ago da trapianto rotto con menisco d'olio stabile (punta di freccia) visto attraverso il microscopio per trapianti con ingrandimento 40x. Barre di scala = 100 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig03large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig04.jpg"> Figura 4: Il processo di trapianto al microscopio. (A) Ago posizionato all'esterno dell'animale donatore, puntato sui motoneuroni vagi (verde, punta di freccia). (B) Ago posizionato all'interno dell'animale donatore dopo aver prelevato i neuroni del donatore contrassegnati in modo fluorescente (punte di freccia). (C) Ago contenente diversi neuroni donatori (punte di freccia) posizionati all'esterno dell'animale ospite, puntato sui motoneuroni vago dell'ospite anteriore (rosso, asterisco). (D) Animale ospite post-trapianto con ago ritirato. Un gruppo di neuroni di donatori trapiantati che esprimono GFP (punta di freccia) è stato espulso nell'ospite. Barre di scala = 30 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig04large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig05.jpg"> Figura 5: Risultati rappresentativi. (A,B) Trapianti di successo. (A) La regione anteriore di un nucleo motore vago ospite di 12 hpt (magenta) contenente un neurone donatore (verde, nero in A'). Il neurone donatore ha esteso diversi neuriti (frecce in A'). (B) Il nucleo motore vago (B-B') e i rami assoniali faringei (B''-B''', rami assonici etichettati) di un ospite 2 dpt (magenta) contenente un neurone donatore (verde, nero in B', B'''). Il neurone donatore ha esteso un nuovo assone al ramo 4 (punte di freccia). Le figure 5A, B rappresentano diversi animali. (C) Trapianto non riuscito. Il nucleo motore vago di un ospite di 2 dpt (magenta). Non è presente alcun neurone donatore; piuttosto, è presente un piccolo granello (verde, nero in C'), che probabilmente rappresenta un frammento di un neurone donatore morto (punta di freccia). Barre di scala = 20 μm. Abbreviazioni: dpt = giorni dopo il trapianto; HPT = ore dopo il trapianto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Trapianto di cellule ad alta risoluzione in zebrafish embrionale e larvale

Development and regeneration occur by a process of genetically encoded spatiotemporally dynamic cellular interactions. The use of cell transplantation ...

high-resolution-cell-transplantation-in-embryonic-and-larval-zebrafish

Research

Ricerca

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Zebrafish trapianto di cellule consente la combinazione di genetica e dell'embriologia per generare chimere tessuto specifiche. Questo video dimostra gastrula scena trapianti di cellule che hanno permesso al nostro laboratorio per studiare il ruolo delle popolazioni astrogliali e spunti indicazioni specifiche durante la formazione commessura nel proencefalo.

Tessuto Chimere mirate embrionali: Zebrafish gastrula trapianto di cellule

Dimostriamo un protocollo per generare embrioni di zebrafish chimerico per vivere comportamento imaging cellulare durante l'embriogenesi.

Il trapianto di GFP che esprimono blastomeri per dell&#39;immagine in tempo reale dello sviluppo della retina e del cervello in embrioni di zebrafish Chimerico

Il pesce zebra, un piccolo pesce tropicale, è diventata un modello importante per studiare la funzione del gene durante lo sviluppo dei vertebrati e la malattia. L'espressione temporale e spaziale dei geni bersaglio può essere...

Alta Risoluzione intero monte<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione in embrioni di zebrafish per studiare l&#39;espressione genica e la funzione

Qui, presentiamo un protocollo per il trapianto cellulare del muscolo scheletrico del pesce zebra e del rabdomiosarcoma embrionale (ERMS) in un pesce zebra adulto immune compromesso rag2E450fs omozigote mutante. Questo protocollo consente l'analisi efficiente della rigenerazione e della trasformazione maligna delle cellule muscolari.

Normali e maligne trapianto muscolare cellulare in immunitario compromesso Zebrafish adulti

Questo protocollo descrive un metodo per isolare singole cellule da embrioni di zebrafish, arricchimento per cellule di interesse, catturare cellule di zebrafish in sistemi multiplex a singola cellula basati su microfluidica e valutare l'espressione genica da singole cellule.

Isolamento e caratterizzazione di singole cellule da embrioni di zebrafish

Live tracking dei singoli progenitori retinici WT in background genetici distinti consente la valutazione del contributo delle cellule di segnalazione non autonomo durante la neurogenesi. Qui, una combinazione di knockdown gene, generazione chimera tramite trasferimento di embrioni in time-lapse imaging confocale vivo è stata utilizzata per questo scopo.

Imaging in vivo del transgenico espressione genica nei singoli retinica Progenitori in embrioni di zebrafish Chimerico da Cell studio Influenze non autonomo

Vi presentiamo un protocollo efficiente e facile da usare per la preparazione di colture cellulari primarie di embrioni di zebrafish per la transfezione e live cell imaging nonché un protocollo per preparare cellule primarie dal cervello di zebrafish adulto.

Cultura e transfezione di cellule primarie di Zebrafish

Le manipolazioni embriologiche come l'estirpazione e il trapianto di cellule sono strumenti importanti per studiare lo sviluppo precoce. Questo protocollo descrive un dispositivo di trapianto semplice ed efficace per eseguire queste manipolazioni in embrioni di zebrafish.

Un dispositivo di trapianto semplice ed efficace per embrioni di zebrafish

Questo lavoro descrive un protocollo per il sistema modulare di transgenesi Tol2, un metodo di clonazione basato su gateway per creare e iniettare costrutti transgenici in embrioni di zebrafish.

Il sistema Zebrafish Tol2: un approccio di transgenesi modulare e flessibile basato su gateway

Descriviamo un protocollo per lo xenotrapianto nel tuorlo di embrioni trasparenti di zebrafish ottimizzato con un metodo di stadiazione semplice e rapido. Le analisi post-iniezione includono la sopravvivenza e la valutazione del carico di malattia delle cellule xenotrapiantate mediante citometria a flusso.

Un metodo semplice, rapido ed efficace per l'analisi dello xenotrapianto tumorale in embrioni trasparenti di zebrafish

Impara il trapianto di cellule ad alta risoluzione in embrioni e larve di zebrafish per studiare la dinamica spaziale e temporale dei segnali neurali durante lo sviluppo. Questo metodo consente il tracciamento a lungo termine delle cellule trapiantate.

Trapianto di cellule ad alta risoluzione in zebrafish embrionale e larvale

Esplora altri video