Name: Quantificazione dei leucociti aderenti indotti dal diabete nella vascolarizzazione retinica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: Impara a quantificare i leucociti aderenti nella vascolarizzazione retinica utilizzando la microscopia a fluorescenza. Questa tecnica permette di valutare l'infiammazione e l'efficacia delle terapie nella retinopatia diabetica.

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<li>Veenstra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%3A+Retina-specific+methods+for+maintenance+of+diabetic+rodents+and+evaluation+of+vascular+histopathology+and+molecular+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy: Retina-specific methods for maintenance of diabetic rodents and evaluation of vascular histopathology and molecular abnormalities.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 5 (3), 247-270 (2015).</li>
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<li>Bernhard, W., Avrameas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+visualization+of+cellular+carbohydrate+components+by+means+of+concanavalin+A%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural visualization of cellular carbohydrate components by means of concanavalin A.</a> Exp Cell Res. 64 (1), 232-236 (1971).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr>Siringa <td></td><td></td><td></td><td>da 10 mL</td></tr><tr><td>rubinetto a 4 vie Luer lock Valvola di linea IV</td><td>Baxter</td><td>2C6204</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di concanavalina A</td><td>Vector&nbsp;</td><td>FL-1001</td><td>Preparare in PBS 1 mg/mL</td></tr><tr>Set <td></td><td></td><td>di strumenti di dissezione</td><td>Include emostatici, forbici e pinze</td></tr><tr><td>Software FIJI</td><td></td><td></td><td>per l'elaborazione delle immagini</td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ni</td><td></td></tr><tr><td>Pincipe, Dumont #5, punta di grado biologico</td><td>Microscopia elettronica Sciences (EMS)</td><td>72700-D</td><td></td></tr><tr><td>Ago per sonda 1,25 mm OD punta del cilindro x 30 mm</td><td>Fine Science</td><td>18060-20</td><td></td></tr><tr><td>Halstead Mosquito Forcence</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-10</td><td></td></tr><tr><td>Set di cateteri per flebo con morsetto di regolazione 70 pollici</td><td>Baxter</td><td>2C5417s</td><td></td></tr><tr><td>I.V. Pole</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tessuto</td><td></td><td></td> privo <td>di lanugine Kimpwipes è un'opzione</td></tr><tr><td>Forbici a molla per micro dissezione, Vannas, 3 mm dritte</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5620</td><td></td></tr><tr><td>Micro spatola</td><td>Strumenti per le scienze fini (FST)</td><td>10091-12</td><td></td></tr><tr><td>Nikon</td><td></td><td>NIS-Elements (AR 5.30.03 64 bit)</td><td>Software per l'acquisizione delle immagini</td></tr><tr><td>Piastra di Petri (100 mmx15 mm)</td><td>Corning</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cera dentale rosa</td><td>Microscopia elettronica Scienze ( EMS)</td><td>72670</td><td></td></tr><tr><td>Infusore a pressione</td><td>Infusurge</td><td>4010</td><td></td></tr><tr><td>Lamette da barba, GEM a bordo singolo, acciaio inossidabile a bordo singolo, rivestimento in teflon</td><td>Microscopia elettronica Scienze (EMS)</td><td>71970</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina 0,9%, grado veterinario, 1000 mL</td><td>Baxter</td><td>04925-04-10</td><td></td></tr><tr><td>Piccole forbici da dissezione, estremità smussata curva 22 mm</td><td>ROBOZ</td><td>RS 5983</td><td></td></tr></tbody></table>

quantificazione dei leucociti aderenti indotti dal diabete nella vascolarizzazione retinica

Quantification of Diabetes-induced Adherent Leukocytes in Retinal Vasculature

Un protocollo di perfusione e colorazione ben eseguito mostrerà la vascolarizzazione retinica completa delineata con la concanavalina A (Figura 1). La scarsa perfusione del topo impedisce la marcatura dell'intero albero vascolare e la successiva analisi dei leucociti aderenti al lume (Figura 2), mentre un'eccessiva pressione dovuta a una rapida compressione di una siringa (inferiore a 30-35 s) può causare permeabilità vascolare e rottura dei vasi sanguigni (<str...

Quantificazione dei leucociti aderenti indotti dal diabete nella vascolarizzazione retinica

Leukostasis refers to the attachment of leukocytes to the luminal wall of the vasculature. This interaction of leukocytes with the wall of blood vessels ...

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Fonte: Lani-Louzada, R., et al. Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori. J. Vis. Exp. (2022). Questo video dimostra la quantificazione delle cellule gangliari retiniche da retine di ratto fissate chimicamente e sottoposte a cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare. Il processo include la permeabilizzazione, la colorazione degli anticorpi e la controcolorazione nucleare, seguita dalla visualizzazione...

Quantificazione dei somi a cellule gangliari retiniche a seguito di ipertensione oculare indotta da cauterizzazione 

La microscopia intravitale può essere utilizzata negli animali per visualizzare e misurare i diametri vascolari della retina, la velocità del flusso sanguigno e il flusso sanguigno retinico totale.

Microscopio video intravitale misurazioni della retina flusso sanguigno nei topi

Riportiamo un metodo in vitro che permette la quantificazione del numero effettivo di cellule adesive all'interno di un monostrato di cellule endoteliali.

La quantificazione di adesività delle cellule endoteliali<em&gt; In Vitro</em

La retina condivide importanti somiglianze con il cervello e rappresenta quindi una finestra unica per studiare il sistema vascolare e struttura di un neurone nel cervello non invadente. Questo protocollo descrive un metodo per studiare demenza usando tecniche di imaging retinici. Questo metodo può potenzialmente aiutare nella diagnosi e valutazione del rischio di demenza.

Usando la formazione immagine retinica per studiare la demenza

Discutiamo qui, un protocollo di metodo che vi permetterà una facile analisi del vasculature retinico adulto tg(fli:EGFP) zebrafish come una lettura veloce nelle impostazioni delle patologie vascolari a lungo termine legate alla neoangiogenesi e cambiamenti strutturali.

Lo studio diabete Through the Eyes of un pesce: Microdissection, visualizzazione e analisi della tg(fli:EGFP) adulto Vasculature retinico Zebrafish

Dimostriamo di tre tecniche di preparazione dei tessuti differenti per la visualizzazione di immunohistochemical di periciti microvascolare del ratto, vale a dire, cryo-sezioni, intero-monta e ipotonico isolamento della rete vascolare.

Cryo-sezioni della retina, intero-monta e ipotonico Vasculature isolato preparazioni per la visualizzazione di Immunohistochemical dei Pericytes microvascolare

Questo studio mira a sviluppare un nuovo modello di coltura retinica organotipica umana (HORC) che impedisce di compromettere l'integrità retinica durante la manipolazione dell'espianto. Ciò si ottiene coltivando la retina con il vitreo sovrastante e il pigmento retinico sottostante epitelio-coroide (RPE-coroide) e sclera.

Caratterizzazione di una nuova tecnica di coltura retinica organotipica umana

La retinopatia diabetica è una delle principali cause di cecità. L'istologia, il test di rottura della barriera emato-retinica e l'angiografia a fluorescenza sono tecniche preziose per comprendere la fisiopatologia della retina, che potrebbe migliorare ulteriormente l'efficiente screening farmacologico contro la retinopatia diabetica.

Valutazione fisiopatologica retinica in un modello di ratto

Questo articolo descrive un saggio di colorazione lectina ben consolidato e riproducibile per l'intero monte di preparati retinici e i protocolli necessari per la misurazione quantitativa di parametri vascolari frequentemente alterati nelle retinopatie proliferative e non proliferative.

Quantificazione dei parametri vascolari nelle retine a montaggio intero di topi con retinopatie non proliferative e proliferative

Il modello di ferita diabetica indotta da streptozotocina nei ratti SD maschi è attualmente il modello più utilizzato per studiare la guarigione delle ferite nel diabete mellito di tipo I. Questo protocollo descrive i metodi utilizzati per costruire questo modello. Presenta e affronta anche potenziali sfide ed esamina la progressione e le caratteristiche angiogeniche delle ferite diabetiche.

Un protocollo per la costruzione di un modello di ferita di ratto del diabete di tipo 1

È stato sviluppato un test di protezione per monitorare la resilienza della vascolarizzazione retinica alla morte per insulti correlati al diabete/retinopatia diabetica come lo stress ossidativo e le citochine.

Un test per rilevare la protezione della vascolarizzazione retinica dalla morte correlata al diabete nei topi

Impara a quantificare i leucociti aderenti nella vascolarizzazione retinica utilizzando la microscopia a fluorescenza. Questa tecnica permette di valutare l'infiammazione e l'efficacia delle terapie nella retinopatia diabetica.

Quantificazione dei leucociti aderenti indotti dal diabete nella vascolarizzazione retinica

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