Name: In vivo Imaging a fluorescenza confocale dellattività neurale indotta dalla stimolazione sensoriale in larve di pesce zebra parzialmente trattenute (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-18T12:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Scopri l'imaging confocale a fluorescenza dell'attività neurale in larve di Danio rerio esprimenti GCaMP. Questo protocollo consente di analizzare le dinamiche del calcio in risposta a stimoli sensoriali in vivo.

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<ol><li>Ahrens, M. B., Orger, M. B., Robson, D. N., Li, J. M., Keller, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+functional+imaging+at+cellular+resolution+using+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Method%22%5BJournal%5D)">Whole-brain functional imaging at cellular resolution using light-sheet microscopy.</a> Nat Method. 10 (5), 413-420 (2013).</li>
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<li>Abdelfattah, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+optimization+of+a+rhodopsin-based+fluorescent+voltage+indicator%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Sensitivity optimization of a rhodopsin-based fluorescent voltage indicator.</a> Neuron. 111 (10), 1547-1563.e9 (2023).</li>
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<li>Kawashima, T., Okuno, H., Bito, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+era+for+functional+labeling+of+neurons%3A+activity-dependent+promoters+have+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">A new era for functional labeling of neurons: activity-dependent promoters have come of age.</a> Front Neural Circuits. 8, 37(2014).</li>
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<li>Mohr, M. A., Argast, P., Pantazis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+cellular+structures+in+vivo+using+confined+primed+conversion+of+photoconvertible+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">Labeling cellular structures in vivo using confined primed conversion of photoconvertible fluorescent proteins.</a> Nature Protoc. 11 (12), 2419-2431 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Basso punto di fusione Agarosio</td><td>Invitrogen</td><td>16520-100</td><td>Diluito al 3% di</td></tr> <tr><td>isotiocianato di allile (AITC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>377430</td><td>Stimolante chimico</td></tr><tr><td>E3</td><td>N/A</td><td>N/A Mezzo</td><td>acquoso per larve di pesce zebra</td></tr><tr><td>Piatti con fondo in vetro</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-567-400</td><td>Utilizzato per trattenere il pesce zebra durante gli esperimenti</td></tr> <tr><td>di imagingMicropipetta (10-100 uL)</td><td>Cole-Parmer</td><td>21600-14</td><td>Apparecchio utilizzato per la creazione di diluizioni AITC</td></tr><tr><td>Vetrini per microscopio</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-A3</td><td>Utilizzato per lo screening del fenotipo</td></tr><tr><td>Pinze con finitura a specchio</td><td>DUMONT</td><td>11251-23</td><td>Utilizzato per orientare il pesce zebra nell'agarosio</td></tr><tr><td>myTEMP Mini incubatori digitali</td><td>Benchmark</td><td>H2200-HC</td><td>Area di attesa per pesce zebra; impostato su 28,5&deg; C</td></tr><tr><td>Guanti in nitrile</td><td>MedPRIDE</td><td>MPR-50504</td> Piastre di <td>Petri DPI di base</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>89107-632</td><td>Contenitore per pesci zebra</td></tr><tr><td>Tubi Posi-Click</td><td>DENVILLE</td><td>C-2171</td><td>Utilizzato per la diluizione AITC</td></tr><tr><td>Pipette di trasferimento in poliuretano Samco</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>225</td><td>Apparecchio utilizzato per selezionare l'animale/somministrare bolo diluito di AITC</td></tr><tr><td>Stemi SV11 Apo Microscopio</td><td>Zeiss</td><td>1.25496E+11</td><td>Utilizzato per mettere in scena il pesce zebra</td></tr><tr><td>Larvale transgenico Pesce zebra (da 2 a 7 DPF)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Soggetti di test su animali; Ceppo Tg(elav3:GCaMP6s)</td></tr><tr><td>Microscopio confocale Zeiss (modello LSM9)</td><td>Zeiss</td><td>3523004097</td><td>Imaging dei pesci</td></tr></tbody></table>

in vivo imaging a fluorescenza confocale dell'attività neurale indotta dalla stimolazione sensoriale in larve di pesce zebra parzialmente trattenute

In Vivo Confocal Fluorescence Imaging of Neural Activity Induced by Sensory Stimulation in Partially Restrained Larval Zebrafish

La somministrazione di isotiocianato di allile provoca un segnale neurale associato al calcio nelle larve di pesce zebra La somministrazione di AITC (fase 2.6) provoca un aumento diffuso dell'attività neurale associata a GCaMP6s in tutto il cervello del pesce zebra larvale 11,30. Abbiamo osservato un aumento del segnale fluorescente in una piccola regione del cervello dopo l'applicazione di AITC, come mostrato nella Figura...

In vivo Imaging a fluorescenza confocale dell'attività neurale indotta dalla stimolazione sensoriale in larve di pesce zebra parzialmente trattenute

Zebrafish larvae are a promising vertebrate model system for studying the neural mechanisms of behavior. Their translucence and relatively simple neural ...

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Questo protocollo descrive l'imaging di singoli neuroni o cellule della cresta neurale nel vivere embrioni di zebrafish. Questo metodo è utilizzato per esaminare i comportamenti e la localizzazione cellulare di actina mediante fluorescenza confocale microscopia time-lapse.

Immagini dal vivo della motilità cellulare e citoscheletro dei singoli neuroni e cellule della cresta neurale in embrioni di zebrafish

Questo video dimostra il metodo per studiare il rilevamento visivo delle prede nelle larve di pesce zebra transgenico utilizzando l'imaging a fluorescenza basato su indicatori di calcio con i loro neuroni che esprimono complessi di indicatori di calcio fluorescenti.

Analisi dell'attività neuronale evocata dalla preda in una larva di pesce zebra transgenico

Questo video dimostra la registrazione di segnali elettrici dai neuroni afferenti in una larva di pesce zebra paralizzata posizionando una micropipetta vicino al ganglio della linea laterale e formando un sigillo allentato per la cattura del segnale. La soluzione extracellulare mantiene la vitalità neuronale durante questo processo.

Monitoraggio dei segnali elettrici dai neuroni afferenti in una larva di pesce zebra immobilizzata

Fonte: Schramm, P. et al. Imaging in vivo di tessuto cerebrale completamente attivo in larve di zebrafish sveglie e giovani mediante rimozione del cranio e della pelle. J. Vis. Exp. (2021)Questo video dimostra l'imaging in vivo dei neuroni cerebellari nelle larve transgeniche di zebrafish, che esprimono proteine fluorescenti nei neuroni di Purkinje. Il processo prevede l'anestetizzazione delle larve, l'immobilizzazione in agarosio e la rimozione accurata della pelle pigmentata per migliorare la...

Imaging in vivo del cervello larvale di pesce zebra per la visualizzazione dei neuroni cerebellari

I protocolli qui descritti consentono lo studio delle proprietà elettriche delle cellule eccitabili nelle condizioni fisiologiche più non invasive impiegando embrioni di zebrafish in un sistema in vivo insieme a un indicatore di tensione geneticamente codificato (GEVI) basato sul trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza (FRET) espresso selettivamente nel tipo di cellula di interesse.

Biosensing potenziale del membrane del neurone del motore in embrioni di Zebrafish in tensione

Qui, presentiamo un protocollo per l'ablazione di una sottopopolazione geneticamente con etichetta dei neuroni da un laser del due-fotone da larve di Zebrafish.

Ablazione di una popolazione neuronale utilizzando un Laser del due-fotone e sua valutazione usando formazione immagine del calcio e registrazione del comportamento nelle larve di Zebrafish

Zebrafish è un sistema di modello che ha molte caratteristiche importanti, compreso chiarezza ottica, rapido sviluppo esterno e, di particolare importanza nel campo dell'udito e l'equilibrio, situato esternamente cellule ciliate sensoriali. Questo articolo descrive come transgenici zebrafish può essere utilizzato per analisi sia delle cellule cigliate mechanosensation e funzione presinaptica in toto.

Nel calcio in Vivo Imaging delle cellule ciliate linea laterale in Zebrafish larvale

Qui presentiamo un metodo per immaginare il cervello embrionale del pesce zebra in vivo fino agli stadi larvale e giovanile. Questa procedura microinvasiva, adattata da approcci elettrofisiologici, fornisce l'accesso ai dettagli cellulari e subcellulari del neurone maturo e può essere combinata con studi optogenetici e neurofarmacologici per caratterizzare la funzione cerebrale e l'intervento farmacologico.

Imaging in vivo del tessuto cerebrale completamente attivo in larve di zebrafish svegli e giovani mediante rimozione del cranio e della pelle

Presentato qui è un protocollo per l'imaging in vivo dell'intero cervello del pesce zebra larvale utilizzando la microscopia a fluorescenza tridimensionale. La procedura sperimentale include la preparazione del campione, l'acquisizione di immagini e la visualizzazione.

In vivo Imaging dell'intero cervello delle larve di zebrafish mediante microscopia a fluorescenza tridimensionale

Qui, presentiamo un protocollo per eseguire l'imaging del calcio a due fotoni nel prosencefalo dorsale di zebrafish adulto.

Imaging del calcio a due fotoni dell'attività del prosencefalo nel comportamento del pesce zebra adulto

La giunzione neuromuscolare larvale di pesce zebra è un modello interessante per lo studio della fisiologia sinaptica. È suscettibile di molte tecniche sperimentali, tra cui l'elettrofisiologia e l'imaging ottico. Qui, descriviamo un protocollo per l'imaging della trasmissione sinaptica utilizzando una sonda basata su pHluorin, sotto un microscopio a epifluorescenza verticale.

Imaging dal vivo del riciclaggio delle vescicole sinaptiche nella giunzione neuromuscolare di zebrafish larvale sezionato

Scopri l'imaging confocale a fluorescenza dell'attività neurale in larve di Danio rerio esprimenti GCaMP. Questo protocollo consente di analizzare le dinamiche del calcio in risposta a stimoli sensoriali in vivo.

In vivo Imaging a fluorescenza confocale dellattività neurale indotta dalla stimolazione sensoriale in larve di pesce zebra parzialmente trattenute (Video) | JoVE Journal

In vivo Imaging a fluorescenza confocale dell'attività neurale indotta dalla stimolazione sensoriale in larve di pesce zebra parzialmente trattenute

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