Name: Imaging longitudinale intravitale della dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Scopri la microscopia intravitale a due fotoni per studiare la dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale. Questo metodo consente l'imaging longitudinale in vivo delle risposte vascolari all'ematopoiesi patologica.

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<ol><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
<li>Pittet, M. J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging.</a> Cell. 147 (5), 983-991 (2011).</li>
<li>Itkin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+bone+marrow+blood+vessels+differentially+regulate+haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis.</a> Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).</li>
<li>Christodoulou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+imaging+of+native+haematopoietic+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal imaging of native haematopoietic stem and progenitor cells.</a> Nature. 578 (7794), 278-283 (2020).</li>
<li>Upadhaya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+reveals+motility+of+adult+hematopoietic+stem+cells+in+the+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging reveals motility of adult hematopoietic stem cells in the bone marrow niche.</a> Cell Stem Cell. 27 (2), 336-345.e4 (2020).</li>
<li>Hawkins, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+acute+leukaemia+exhibits+dynamic+interactions+with+bone+marrow+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell acute leukaemia exhibits dynamic interactions with bone marrow microenvironments.</a> Nature. 538 (7626), 518-522 (2016).</li>
<li>Duarte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+in+vivo+characteristics+of+acute+myeloid+leukemia+cells+behavior+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Defining the in vivo characteristics of acute myeloid leukemia cells behavior by intravital imaging.</a> Immunol Cell Biol. 97 (2), 229-235 (2019).</li>
<li>Passaro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+permeability+in+the+bone+marrow+microenvironment+contributes+to+disease+progression+and+drug+response+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Increased vascular permeability in the bone marrow microenvironment contributes to disease progression and drug response in acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 32 (3), 324-341.e6 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLT3+inhibitors+upregulate+CXCR4+and+E-selectin+ligands+via+ERK+suppression+in+AML+cells+and+CXCR4%2FE-selectin+inhibition+enhances+anti-leukemia+efficacy+of+FLT3-targeted+therapy+in+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">FLT3 inhibitors upregulate CXCR4 and E-selectin ligands via ERK suppression in AML cells and CXCR4/E-selectin inhibition enhances anti-leukemia efficacy of FLT3-targeted therapy in AML.</a> Leukemia. 37 (6), 1379-1383 (2023).</li>
<li>Pendleton, E. G., Tehrani, K. F., Barrow, R. P., Mortensen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+harmonic+generation+characterization+of+collagen+in+whole+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Second harmonic generation characterization of collagen in whole bone.</a> Biomed Opt Express. 11 (8), 4379-4396 (2020).</li>
<li>Dispositif de liaison d'un animal de laboratoire à au moins un système d'expérimentation, et procédé de fixation d'un tel dispositif. France patent. , WO/2021/123449 (2021).</li>
<li>Horton, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia+induced+by+MLL-ENL+is+cured+by+oncogene+ablation+despite+acquisition+of+complex+genetic+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia induced by MLL-ENL is cured by oncogene ablation despite acquisition of complex genetic abnormalities.</a> Blood. 113 (20), 4922-4929 (2009).</li>
<li>Scott, M. K., Akinduro, O., Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+4-dimensional+tracking+of+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+adult+mouse+calvarial+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo 4-dimensional tracking of hematopoietic stem and progenitor cells in adult mouse calvarial bone marrow.</a> J Vis Exp. (91), e51683(2014).</li>
<li>Jung, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+mouse+bone+marrow%3A+Hemodynamics+and+vascular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of mouse bone marrow: Hemodynamics and vascular permeability.</a> Methods Mol Biol. 1763, 11-22 (2018).</li>
<li>Le, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+longitudinal+visualization+of+bone+marrow+engraftment+process+in+mouse+calvaria+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo longitudinal visualization of bone marrow engraftment process in mouse calvaria using two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 7, 44097(2017).</li>
<li>Spencer, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurement+of+local+oxygen+concentration+in+the+bone+marrow+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct measurement of local oxygen concentration in the bone marrow of live animals.</a> Nature. 508 (7495), 269-273 (2014).</li>
<li>Yang, M., Mahanty, A., Jin, C., Wong, A. N. N., Yoo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+metabolic+imaging+for+sensitive+and+robust+monitoring+of+anti-CD47+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Label-free metabolic imaging for sensitive and robust monitoring of anti-CD47 immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> J Immunother Cancer. 10 (9), e005199(2022).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+strain-specific+morphogenesis+and+angiogenesis+of+murine+calvaria+with+large-scale+optoacoustic+and+Ultrasound+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Tracking strain-specific morphogenesis and angiogenesis of murine calvaria with large-scale optoacoustic and Ultrasound Microscopy.</a> J Bone Miner Res. 37 (5), 1032-1043 (2022).</li>
<li>Lassailly, F., Foster, K., Lopez-Onieva, L., Currie, E., Bonnet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+imaging+reveals+structural+and+functional+heterogeneity+in+different+bone+marrow+compartments%3A+functional+implications+on+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Multimodal imaging reveals structural and functional heterogeneity in different bone marrow compartments: functional implications on hematopoietic stem cells.</a> Blood. 122 (10), 1730-1740 (2013).</li>
<li>Rindone, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+3D+imaging+of+the+cranial+microvascular+environment+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative 3D imaging of the cranial microvascular environment at single-cell resolution.</a> Nat Commun. 12 (1), 6219(2021).</li>
<li>Mills, W. A. 3rd, Coburn, M. A., Eyo, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+the+calvarial+hematopoietic+niche+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">The emergence of the calvarial hematopoietic niche in health and disease.</a> Immunol Rev. 311 (1), 26-38 (2022).</li>
<li>Bixel, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+is+uncoupled+from+osteogenesis+during+calvarial+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis is uncoupled from osteogenesis during calvarial bone regeneration.</a> Nat Commun. 15 (1), 4575(2024).</li>
<li>Koh, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+skull+bone+marrow+is+an+expanding+and+resilient+haematopoietic+reservoir%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adult skull bone marrow is an expanding and resilient haematopoietic reservoir.</a> Nature. 636 (8041), 172-181 (2024).</li>
<li>Kolabas, Z. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+molecular+profiles+of+skull+bone+marrow+in+health+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders.</a> Cell. 186 (17), 3706-3725.e9 (2023).</li>
<li>Rosenhain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+micro-computed+tomography+database+including+3D+whole+body+organ+segmentations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">A preclinical micro-computed tomography database including 3D whole body organ segmentations.</a> Sci Data. 5, 180294(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amira</td><td>Thermo ScientificTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestesia</td><td></td><td></td><td>Isoflurano dal 2% al 3%</td></tr><tr><td>Maschera per anestesia (rilevamento animali)</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unità di anestesia</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B6. Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze</td><td>Laboratori Jackson</td><td>MGI:3809523</td><td></td></tr><tr><td>CalvariaVue</td><td>Ymetry</td><td>https://ymetry.com/site/head-fixation-implants/44-mouse-head-fixation-implant-for-calvaria.html</td><td></td></tr><tr><td>Cemento dentale</td><td>Kemdent</td><td>SUN527</td><td></td></tr><tr><td>Destrano 500 kDa-Cy5&nbsp;</td><td>Tebu-bio</td><td>DX500-S5-1</td><td>3 mg/topo</td></tr><tr><td>Destrano 70 kDa-TRITC</td><td>Sigma</td><td>T1162</td><td>3 mg/topo</td></tr><tr><td>Disinfettante</td><td>MP-Labo</td><td>Dermidina-60ml</td><td></td></tr><tr><td>Rasoio elettrico</td><td>Esculare</td><td>Iside</td><td></td></tr><tr><td>Gel per gli occhi</td><td>Ocry-gel</td><td>10 g</td><td></td></tr><tr><td>Figi&nbsp;</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>v 17 maggio 30</td><td></td></tr><tr><td>Collegamenti Fiji per fare da ponte con Imaris</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>Imaris_Bridge96.jar ; ImarisBridgeUtils.jar</td><td></td></tr><tr><td>Scatola riscaldante&nbsp;</td><td>Datteri</td><td>Thermacage</td><td></td></tr><tr><td>Termoforo per chirurgia</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termoforo per immagini e sonda rettale</td><td>F. Haer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris v9.6.0</td><td>Strumenti Oxford</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gel intrasito</td><td>Chinossia</td><td>2390766</td><td></td></tr><tr><td>LAS AF Software</td><td>Leica</td><td>LAS X 3.5.7.23225</td><td></td></tr><tr><td>Medicazione</td><td></td><td></td><td>Buprecare, 0,01 mg/kg</td></tr><tr><td>Obiettivo HCX IRAPO L 25x/0.95 ACQUA</td><td>Leica</td><td>506374</td><td></td></tr><tr><td>Tampone salino (PBS 1x)</td><td>Sigma</td><td>P4417</td><td>Sterilizzare in autoclave</td></tr><tr><td>Microscopio multifotone SP8 DIVE FALCON&nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maschera stereotossica</td><td>Minerve</td><td>1201261</td><td></td></tr><tr><td>Perle per sterilizzatori</td><td>Sigma</td><td>Z742555</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici</td><td>Moria</td><td>4877A; 2183</td><td></td></tr><tr><td>Coperta di sopravvivenza</td><td>SICUREZZA</td><td>11006</td><td></td></tr><tr><td>Tamponi / Tessuti</td><td></td><td></td><td>Sterilizzare in autoclave</td></tr><tr><td>Siringa 1 mL 26 g</td><td>BD Plastipak</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Regolatore di temperatura</td><td>F. Haer</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Nes-EGFP)33Topi Enik&nbsp;</td><td>Laboratori Jackson</td><td>MGI:5523870</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Topi Frut</td><td>Laboratori Jackson</td><td>MGI:3793852</td><td></td></tr><tr><td>Topi Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rha</td><td>Laboratori Jackson</td><td>MGI:3848982</td><td></td></tr><tr><td>Gel per ultrasuoni&nbsp;</td><td>Laboratori Parker</td><td>Acquario 100</td><td></td></tr></tbody></table>

imaging longitudinale intravitale della dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow

Nella Figura 1 e nella Figura 2, viene mostrato il modello CAD di un impianto di fissazione della testa in titanio posizionato su un cranio di topo scansionato, progettato per seguire la struttura anatomica del cranio e fornire un dispositivo leggero e biocompatibile in grado di aderire saldamente allo stadio del microscopio garantendo stabilità a livello cellulare. Seguendo questo protocollo passo-passo, l'impianto è fissato stabilmente al cranio del topo e può essere fissato saldamente al supporto del microscopio tramite la sua coda di rondine, consentendo un'area di imaging piatta per la ritenzione di liquidi e l'osservazione intravitale nel tempo. Può essere chiuso con un coperchio per ridurre al minimo eventuali danni o infezioni della ferita, consentendo l'imaging ripetuto della stessa area di tessuto per settimane. Una volta sveglio, il topo che indossa un impianto per la testa può camminare liberamente, nutrirsi e avere una routine regolare.
La Figura 3 mostra una vista a scansione a piastrelle del sistema vascolare del midollo osseo calvariale costituito da capillari eterogenei, tra cui arteriole, capillari di transizione e sinusoidi. I vasi sono incorporati in un complesso microambiente tissutale a stretto contatto con la superficie ossea e le cellule mesenchimali perivascolari. Durante lo sviluppo della leucemia, singole cellule leucemiche isolate possono essere rilevate all'interno del microambiente midollare in prossimità dei vasi sanguigni e il loro attecchimento aumenta nel tempo, riempiendo la calvaria nelle fasi avanzate della malattia.
La Figura 4 mostra come le immagini ottenute con questo protocollo possano fornire dati quantitativi, che possono essere analizzati con metodi statistici. Mostriamo come segmentare i vasi con lo strumento a filamento IMARIS e misuriamo la lunghezza e il diametro dei frammenti vascolari, nonché la loro rettilineità. È inoltre possibile valutare la correlazione di questi parametri.
La Figura 5 mostra l'acquisizione di imaging longitudinale di due diverse posizioni del midollo osseo calvario durante la progressione della LMA ai giorni 4, 7 e 10, con il giorno 10 associato a un attecchimento del ~50% del midollo osseo con cellule leucemiche, come misurato tramite citometria a flusso (non mostrata). Possiamo osservare un importante rimodellamento delle dimensioni dei vasi preesistenti, nonché la formazione di nuovi vasi in aree specifiche associate alla perdita ossea locale.
Infine, nella Figura 6, mostriamo come la permeabilità vascolare possa essere misurata come parametro dinamico con l'imaging time lapse che mostra la capacità di diverse barriere vascolari di trattenere un colorante fluorescente nel tempo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig01.jpg"> 
Figura 1: Progettazione e produzione di un portatestina biocompatibile a base di titanio. (A) Parti dell'impianto in situ: 1 anello di osservazione, 2 elemento di cementazione, 3 ancoraggi stabilizzanti, 4 coda, 5 coda di rondine, 6 fori filettati, 7 Bregma. (B) Collegamento dell'impianto della testa al supporto: 8 corpi di fissaggio, 9 morsetti, 10 leva eccentrica, 11 struttura, 12 obiettivo del microscopio. (C) Deformazione dell'impianto rispetto al carico mediante simulazione FEM in cui lo spostamento massimo è di 0,23 μm contro una forza di 0,04 N. (D) Coperchio di protezione e relativa vite. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig02.jpg"> 
Figura 2: Preparazione del topo per l'imaging intravitale. (A) Vista dell'impianto della testa e dell'area di imaging esposta chirurgicamente prima dell'imaging. (B) Impianto della testa saldamente attaccato al cranio del topo. (C) Topo sveglio nella gabbia di recupero con il coperchio chiuso sull'impianto della testa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig03.jpg"> 
Figura 3: Imaging intravitale della vascolarizzazione della calvaria. (A) Proiezione z della vista a scansione a piastrelle della vascolarizzazione della calvaria etichettata da cdh5-DSRED. (B) Ingrandisci le aree raffigurate per descrivere diversi tipi di vasi raffigurati da frecce, arteriole da frecce rosse, capillari di transizione da frecce arancioni, sinusoidi da frecce gialle. (i) e (ii) proiezioni z di tessuto X μm; (iii) singola fetta. (C) Singole fette di diversi campi visivi di vasi BM, che mostrano la superficie ossea (SHG), le cellule perivascolari (nes-GFP+) e il lume vascolare (destrano-TRITC). (D) Nicchia vascolare associata alla progressione della LMA. Sezioni rappresentative dei punti temporali iniziali (in alto) e tardivi (in basso) dello sviluppo dell'AML. La leucemia MLL-AF9 è marcata con tdTOMATO (frecce rosse), mentre i vasi sono marcati con pdgfb-GFP (frecce verdi), la superficie ossea con SHG e i macrofagi in giallo (autofluorescenza, asterisco giallo). Barre di scala = 200 μm (A), 40 μm (B,D-pannello inferiore), 50 μm (C). Abbreviazioni: BM = midollo osseo; GFP = proteina fluorescente verde; LMA = leucemia mieloide acuta; EC= Cellule endoteliali. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig04.jpg"> 
Figura 4: Quantificazione dei parametri vascolari. (A) Misurazione dei parametri vascolari tramite lo strumento del filamento IMARIS in una proiezione z rappresentativa di vasi del midollo osseo marcati con TRITC-destrano. Vengono mostrate le rappresentazioni lineari e a cono. (B) Quantificazione dei parametri della nave nell'immagine mostrata in A. (C) Correlazione tra parametri vascolari che mostrano una correlazione opposta tra rettilineità e lunghezza del vaso (negativo, Spearman r = -3523; p &lt; 0,0001; R2 = 0,2102) vs diametro (positivo; Lanciere r = 0,4110; p &lt; 0,0001; R2 = 0,1299). Barre di scala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig05.jpg"> 
Figura 5: Imaging longitudinale di due diverse posizioni del midollo osseo della calvaria sullo sviluppo di LMA. Le cellule endoteliali che rivestono i vasi sono marcate con cdh5-GFP, la superficie ossea con SHG e i macrofagi in giallo (autofluorescenza). Vengono mostrati il rimodellamento di vasi preesistenti (frecce rosse) e la formazione di nuovi vasi (frecce gialle). Barre di scala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig06.jpg"> 
Figura 6: Permeabilità vascolare. (A) Schemi della misurazione della permeabilità vascolare tramite lo strumento di superficie IMARIS. (B) Proiezione Z della stessa area ripresa longitudinalmente nell'arco di 1 ora. (C) Quantificazione della permeabilità vascolare all'interno delle aree come illustrato in A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig06large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Figura supplementare S1: Cranio preparato. Nel piano mediano, creare un asse tangente alla calvaria, quindi salvare il cranio preparato. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_1_JoVE67332R1_screenfile5_prepared_skull.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura supplementare S2: Piani distanziati di 2 mm. Come creare una serie di piani equidistanti (spaziatura di 2 mm) attraverso il cranio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_2_JoVE67332R1_screenfile4_plans_2mm_spaced.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura supplementare S3: Contorno della superficie osservabile. Create uno schizzo nel piano calvariale e create una spline a forma di pera da AP +6,5 a -2, 6 mm di larghezza a AP 0,0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_3_JoVE67332R1_screenfile3_Observable_Surface_Contour.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura supplementare S4: Osservazione vindow. Crea uno schizzo nel piano calvariale e disegna una forma a C spessa 0,5 mm che si collega alla finestra di osservazione . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_4_JoVE67332R1_screenfile1_1.4.1.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura supplementare S5: Fare clic su un nuovo studio. Vai alla scheda Simulazione (se visibile) o vai a Simulazione | Studiare. Nella finestra di dialogo Studio , scegliere Statico come tipo di studio. Fare clic su OK per creare il nuovo studio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_5_JoVE67332R1_screenfile2_clic_new_study.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura supplementare S6: Fare clic con il pulsante destro del mouse per creare una mesh. Rifinisci la mesh nelle aree in cui sono previste sollecitazioni o deformazioni elevate. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_6_JoVE67332R1_screenfile6_right_clic_create_mesh.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

Imaging longitudinale intravitale della dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale

Intravital longitudinal fluorescence microscopy imaging has emerged as a crucial technique for studying dynamic biological processes, notably in the ...

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La natura delle interazioni tra staminali e progenitrici di cellule ematopoietiche (HSPCs) e nicchie di midollo osseo è poco conosciuta. Modifiche hardware personalizzato e un protocollo di acquisizione multi-step consentono l'utilizzo di due fotoni e microscopia confocale per immagine ex vivo HSPCs etichettati homed all'interno delle aree del midollo osseo, interazioni monitoraggio e movimento.

In Vivo inseguimento 4-dimensionale di emopoietiche staminali e progenitrici celle di topo adulto cranica di Midollo Osseo

I monociti sono regolatori chiave dell'immunità innata e svolgono un ruolo critico nel rinnovamento del sistema fagocitario mononucleare periferico e in caso di infiammazione. Questo manoscritto descrive la procedura di imaging in tempo reale del midollo osseo calvaria di topo per studiare il meccanismo di mobilizzazione dei monociti.

Monitoraggio midollo osseo di topo monociti<em&gt; In Vivo</em

L'impianto di innesti ossei autologhi e allogenici costituiscono accettato approcci per trattare la perdita di massa ossea cranio-facciale. Eppure l'effetto della composizione trapianto sull'interazione tra neovascolarizzazione, la differenziazione cellulare e la formazione delle ossa non è chiaro. Vi presentiamo un protocollo di imaging multimodale mira a chiarire l'interdipendenza angiogenesi-osteogenesi in prossimità dell'innesto.

Tomografia Computerizzata e Optical Imaging di osteogenesi-angiogenesi Accoppiamento per valutare l&#39;integrazione di craniche Bone Autoinnesti e Alloinnesti

Questo articolo descrive un metodo con cui l'architettura vascolare nel cervello può essere quantificata utilizzando la microscopia a due fotoni in vivo ed ex vivo.

Quantificazione dei cerebrale vascolare Architettura con due fotoni Microscopia in un modello murino di Neuroinflammation HIV-indotta

Questo manoscritto descrive una procedura per monitorare il rimodellamento del cerebrovasculature durante accumulo di placca amiloide in vivo utilizzando longitudinale microscopia a due fotoni. Una preparazione assottigliato-teschio consente la visualizzazione di coloranti fluorescenti per valutare la progressione del danno cerebrale in un modello murino della malattia di Alzheimer.

Longitudinale<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging del Cerebrovasculature: Rilevanza per le malattie del sistema nervoso centrale

L'obiettivo di questo articolo è di presentare un metodo che consente una ricostruzione 3-dimensionale dell'albero cerebrovascolare in topi dopo micro tomografia computata e determinazione dei volumi di segmenti vascolari intero che possono essere utilizzati per quantificare il vasospasm cerebrale in modelli murini di emorragia subaracnoidea.

Un metodo volumetrico per la quantificazione di Vasospasm cerebrale in un modello murino di emorragia subaracnoidea

Descriviamo qui il metodo per l'imaging di megacariociti e proplatelet nel midollo dell'osso del cranio di topi viventi usando la microscopia a due fotoni.

In vivo Imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo

Questo protocollo presenta passaggi per acquisire e analizzare immagini fluorescenti di calcio da periciti che riscaldano il cervello e dati sul flusso sanguigno dai vasi sanguigni vicini in topi anestetizzati. Queste tecniche sono utili per gli studi di fisiologia delle cellule murali e possono essere adattate per studiare i transitori di calcio in qualsiasi tipo di cellula.

Calcio dei periciti cerebrali e imaging emodinamico nei topi transgenici in vivo

Il reclutamento di leucociti e piastrine costituisce una componente essenziale necessaria per l'efficace crescita delle arterie collaterali durante l'arteriogenesi. La microscopia multifotonica è uno strumento efficiente per tracciare la dinamica cellulare con alta risoluzione spazio-temporale in vivo e meno fototossicità per studiare il reclutamento e lo stravaso dei leucociti durante l'arteriogenesi.

Multiphoton Intravital Imaging per il monitoraggio del reclutamento dei leucociti durante l'arteriogenesi in un modello murino di arti posteriori

Scopri la microscopia intravitale a due fotoni per studiare la dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale. Questo metodo consente l'imaging longitudinale in vivo delle risposte vascolari all'ematopoiesi patologica.

Imaging longitudinale intravitale della dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale

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