Name: Modello di guarigione delle ferite da ustione simile a una scacchiera di topi basato su un dispositivo di riscaldamento digitale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Scopri un protocollo per creare ferite da ustione a spessore completo nei topi usando un dispositivo di riscaldamento digitale. Questo modello riproducibile consente analisi affidabili della guarigione delle ferite.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modello coerente di lesioni da ustione nei topi per la valutazione delle medicazioni terapeutiche

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Puntale per pipetta da 1 mL</td><td>KIRGEN,USA</td><td>KG1333</td><td>Utilizzato per localizzare i siti delle ferite da ustione</td></tr><tr><td>3 M Tegaderm film</td><td>3M,USA</td><td>1624WCN 6 cm x 7 cm</td><td>Per la copertura della ferita dopo l'induzione dell'ustione</td></tr><tr><td>4% paraformaldeide (PFA)</td><td>Biosharp,China</td><td>BL539A</td><td>Utilizzato per fissare i campioni di pelle</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Sigma-Aldrich,USA</td><td>PHR8955-50MG</td><td>Per la gestione del dolore dei topi</td></tr><tr><td>C57BL/6 topi</td><td>Chengdu Dashuo azienda animale sperimentale, Cina</td><td>nessuno</td><td>Per l'istituzione del modello di ustione</td></tr><tr><td>Crema depilatoria</td><td>Veet, Cina</td><td>...</td><td>Per la depilazione del dorso dei topi</td></tr><tr><td>Dispositivo di riscaldamento digitale</td><td>Shenzhen Kapper Technology Company, Cina</td><td>No.936D</td><td>Per l'induzione della combustione dei topi</td></tr><tr><td>Rasoio elettrico</td><td>AUX, Cina</td><td>AUX-A5</td><td>Per la depilazione del dorso dei topi Carta</td></tr><tr><td>da filtro</td><td>...</td><td>&mdash;</td><td>Utilizzato per dispiegare i campioni di pelle</td></tr><tr><td>Software GraphPad</td><td>&mdash;</td><td>Prisma GraphPad 9.5.0</td><td>Per l'analisi dell'area della ferita da ustione</td></tr><tr><td>Guanti resistenti al calore</td><td>...</td><td>&mdash;</td><td>Utilizzato per tenere la punta del dispositivo di riscaldamento digitale</td></tr><tr><td>Kit per colorante di ematossilina ed eosina</td><td>Solarbio, Cina</td><td>G1120</td><td>Per l'analisi istologica dei vetrini</td></tr><tr><td>Software ImageJ</td><td></td><td>ImageJ 1.54f</td><td>Per l'analisi dell'area della ferita da ustione</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD, Cina</td><td>R510-22-10</td><td>Per l'anestesia dei topi</td></tr> Kit di <tr><td>colorazione tricromica di Masson</td><td>Solarbio, Cina</td><td>G1340</td><td>Per l'analisi istologica dei vetrini</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olimpo, Giappone</td><td>VS200 ASW</td><td>Utilizzato per scansionare l'H& E e Masson vetrini colorati</td></tr><tr><td>cassetta di tessuto</td><td>CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD, Cina</td><td>31050102W</td><td>Per la disidratazione della paraffina tissutale e l'inclusione della paraffina</td></tr></tbody></table>

modello di guarigione delle ferite da ustione simile a una scacchiera di topi basato su un dispositivo di riscaldamento digitale

Chessboard-like Burn Wound Healing Model of Mice Based on Digital Heating Device

In questo protocollo, il dispositivo di riscaldamento digitale ha creato ferite da ustione simili a quelle di una scacchiera con una durata di combustione di 10 s a 97 °C (Figura 1). La punta del dispositivo è realizzata in rame puro, noto per la sua eccellente conduzione del calore e le sue capacità di riscaldamento rapido. L'impugnatura tenuta dallo sperimentatore è realizzata in policarbonato, che fornisce resistenza al calore e non infiammabilità. Rispetto ai metodi preriscaldati a singola piastra/barra metallica o ad acqua bollente, questo dispositivo dimostra prestazioni di sicurezza superiori e riduce il tempo di anestesia nei topi, accorciando di conseguenza la durata complessiva dell'esperimento.
Il processo generale di induzione e analisi della combustione è mostrato nella Figura 2. Ogni animale aveva sei ferite da ustione sul dorso, disposte come illustrato nella Figura 2E. È stata valutata la dimensione della ferita in questi animali e sono stati raccolti campioni di pelle per l'analisi istologica, inclusa la colorazione tricromica H&amp;E e Masson nei giorni post-ustione 1, 3, 7, 10 e 14, rispettivamente.
Ogni ferita da ustione era di forma circolare con un'area uguale e una profondità uniforme dopo l'induzione dell'ustione. Il colore del bordo della lesione da ustione è passato dal bianco ceroso al rosso, accompagnato da una zona iperemica a causa dell'immediata risposta infiammatoria alla lesione. Inoltre, la dimensione della ferita da ustione è leggermente aumentata nelle 72 ore successive all'ustione (Figura 4A).
L'analisi microscopica delle sezioni delle ferite con colorazione tricromica H&amp;E e Masson (Figura 4B) ha rivelato la completa distruzione dello strato epidermico e il danneggiamento dell'intero spessore del derma, colpendo sia il grasso sottocutaneo che il muscolo. L'esame istologico ha indicato che il processo di guarigione della ferita era nella fase infiammatoria del giorno 3, caratterizzata da vasodilatazione e una sostanziale infiltrazione di cellule infiammatorie. Una notevole riduzione dell'area della ferita è stata osservata il giorno 7 post-ustione rispetto al giorno 3, come si vede nelle immagini microscopiche dei campioni. Il tessuto di granulazione e le fibre cardiovascolari si depositano densamente il giorno 14, il che significa che la guarigione delle ferite entra nella fase di rimodellamento. Le ferite si sono riprese senza infezioni evidenti durante il processo di guarigione.
Inoltre, le capacità di guarigione delle ferite sono state valutate quantificando i dati di guarigione delle ferite e analizzando i tracciati delle ferite (Figura 5). È stato osservato che il recupero della ferita è migliorato nelle ferite trattate con idrogel peptidico TKH12,14, evidenziato da aree della ferita significativamente più piccole nei giorni 7, 10 e 14.
L'intervallo tra le ferite adiacenti (Figura 6), trasversale o longitudinale, non ha confermato alcuna differenza rispetto alla pelle non ustionata. L'epidermide, il derma e i tessuti sottocutanei erano intatti e non c'era infiltrazione di linfociti e vasodilatazione. Il processo di guarigione delle due ferite non interferisce l'una con l'altra. Pertanto, diversi farmaci o medicazioni possono essere applicati al trattamento delle ferite sulla base del modello per valutare l'effetto in vivo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig01.jpg"> 
Figura 1: Dispositivo di riscaldamento digitale per l'induzione della combustione. Il dispositivo di riscaldamento digitale utilizzato per indurre ustioni. (a) Il regolatore di temperatura consente impostazioni di temperatura comprese tra 50 e 450 °C. (b) La base del supporto viene utilizzata per trattenere la punta di combustione. (c) La punta del dispositivo può essere commutata in diverse dimensioni. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig02.jpg"> 
Figura 2: Schema del modello di ferita a scacchiera. Uno schema passo dopo passo per riprodurre il modello di ferita simile a una scacchiera descritto nell'articolo. (A) Un topo di 8 settimane viene utilizzato come modello per esperimenti di guarigione delle ferite. (B) I peli vengono rimossi dall'area designata per la ferita. (C) I sei siti di ferita sono contrassegnati utilizzando un puntale per pipetta da 1 mL. (D) Un dispositivo di riscaldamento digitale viene utilizzato per creare sei ferite da ustione al centro di ciascun sito contrassegnato (E). (F) Un'immagine ravvicinata del dorso dopo l'induzione della bruciatura. (G) I campioni di pelle (circa 1 cm × 1 cm) vengono raccolti nei giorni 3, 7, 10 e 14. (H) I campioni di pelle vengono appiattiti utilizzando carta filtrata e trasferiti in cassette di inclusione. (I) Viene eseguita la disidratazione della paraffina e (J) i campioni vengono sezionati a uno spessore di 5 μm. (K) Le sezioni sono colorate con ematossilina ed eosina (H&amp;E) e tricromia di Masson. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig03.jpg"> 
Figura 3: Processo di induzione di lesioni da ustione a tutto spessore. (A) Il diametro di una punta per pipetta da 1 ml e (B) la punta del dispositivo di riscaldamento digitale sono rispettivamente di 9 mm e 4 mm. (C) L'area dorsale del mouse viene rasata con un rasoio elettrico. (D) La crema depilatoria viene applicata per 3 minuti. (E) L'area rasata viene pulita e asciugata e i punti di ferita vengono contrassegnati con un puntale per pipetta sterilizzato da 1 ml. (F) Il dispositivo di riscaldamento digitale viene applicato a 97 °C per 10 s per creare sei ustioni. (G) Il ghiaccio viene applicato sulle ferite da ustione per la gestione del dolore. (H) L'intera parte posteriore del topo mostra le sei ferite da ustione a tutto spessore. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig04.jpg"> 
Figura 4: Immagini rappresentative delle ferite da ustione e analisi istologica. (A) Immagini delle ferite da ustione nei giorni 3, 7, 10 e 14, che mostrano la progressione della guarigione. (B) Le immagini istologiche colorate con H&amp;E e il tricromo di Masson dimostrano la guarigione delle ferite e la rigenerazione della pelle. Barre di scala = 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig05.jpg"> 
Figura 5: Variazione delle dimensioni della ferita nel tempo. (A) La variazione delle dimensioni della ferita negli animali di controllo e trattati con idrogel TKH nel tempo, analizzata utilizzando il software ImageJ. (B) Vengono presentati i dati corrispondenti sulle tracce della ferita. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig06.jpg"> 
Figura 6: Ustioni adiacenti e analisi istologica. (A) Immagini rappresentative delle ustioni adiacenti il giorno 1. (B) Campioni di ferite adiacenti raccolti per l'analisi istologica il giorno 3 (cerchiati in rosso). (C) La carta da filtro viene utilizzata per appiattire i campioni di tessuto prima della disidratazione della paraffina. (D) Analisi in tricromia di H&amp;E e Masson delle ferite adiacenti. Barre della scala: 1 mm e 200 μm (ingrandite). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig06large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Modello di guarigione delle ferite da ustione simile a una scacchiera di topi basato su un dispositivo di riscaldamento digitale

Severe burn injuries are among the most traumatic and physically debilitating conditions, impacting nearly every organ system and resulting in ...

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Fonte: Wang, Y., et al. In vivo Indagine della terapia antimicrobica con luce blu per infezioni da ustioni da Acinetobacter baumannii multi-resistente a farmaci utilizzando immagini a bioluminescenza. J. Vis. Esp. (2017)Questo video mostra come stabilire un'infezione da ustioni in un modello murino applicando un blocco di ottone riscaldato seguito da un inoculo batterico patogeno. I batteri colonizzano la matrice extracellulare esposta e formano un biofilm, permettendo studi in vivo sulle...

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Modello suino di infezione da biofilm e ferite invisibili

Questo protocollo descrive un modello riproducibile di ustione multi-profondità in un minipig dello Yucatan.

Un modello di ustione suina per studiare il processo di guarigione nelle ferite da ustione di profondità multipla

Le ferite rappresentano una sfida sanitaria globale. Questo studio ha sviluppato una cabina fotografica standardizzata utilizzando la planimetria digitale per ridurre al minimo la variabilità della misurazione della ferita. Il monitoraggio delle ferite nei topi per 14 giorni ha rivelato un aumento iniziale dell'area e del perimetro della ferita, seguito da una chiusura graduale. Questa metodologia può aiutare a valutare la cinetica di chiusura della ferita in modelli preclinici.

Planimetria digitale per la valutazione della cinetica di chiusura della ferita in un modello murino

Scopri un protocollo per creare ferite da ustione a spessore completo nei topi usando un dispositivo di riscaldamento digitale. Questo modello riproducibile consente analisi affidabili della guarigione delle ferite.

Modello di guarigione delle ferite da ustione simile a una scacchiera di topi basato su un dispositivo di riscaldamento digitale (Video) | JoVE Journal

Modello di guarigione delle ferite da ustione simile a una scacchiera di topi basato su un dispositivo di riscaldamento digitale

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