Un approccio chirurgico per lo schiacciamento del nervo ottico in un modello di coniglio

Ciao e benvenuto. In questo video, dimostreremo un protocollo per l'esecuzione dello schiacciamento del nervo ottico, o ONC, in un modello di coniglio utilizzando tecniche chirurgiche oftalmiche standard. Questa tecnica sperimentale genera modelli di lesione controllata del nervo ottico, essenziali per lo studio delle neuropatie ottiche e l'esplorazione di interventi terapeutici. Applicando l'ONC nei conigli, miriamo a migliorare la nostra comprensione delle lesioni del nervo ottico nelle malattie neurodegenerative e a sviluppare nuove strategie terapeutiche. Procediamo alla sezione dettagliata del protocollo. Innanzitutto, posizionare una sutura corneale a spessore parziale attraverso la cornea periferica superiore vicino al limbus. Eseguire un congiuntivale superiore dalle 10 alle due usando le forbici Westcott e le pinze da 12 millimetri. Sezionare con cura la capsula di Tenone per esporre il retto superiore sottostante e i muscoli ottici superiori. Usa un gancio muscolare per isolare il muscolo retto superiore. Ora, la sutura Vicryl a doppio braccio verrà fatta passare a tutto spessore attraverso il centro del retto superiore. Questo è legato con un nodo da chirurgo. L'ago viene fatto passare uno spessore parziale attraverso la lunghezza del muscolo, dal centro al bordo del muscolo. L'ago viene caricato all'estremità posteriore e quindi passato a tutto spessore dalla parte inferiore del muscolo in avanti. Il portaago viene fatto passare attraverso l'anello e l'ago viene afferrato. Quando l'ago viene tirato, la sutura bloccherà quella metà del muscolo. Il secondo ago viene utilizzato per fissare l'altra metà del muscolo in modo simile. Usa le forbici Westcott per staccare il muscolo retto superiore dal globo, assicurandoti di non tagliare i punti di sutura. Infradurre delicatamente il globo con una sutura corneale e ritrarre la sutura muscolare superiormente. Sezionare delicatamente il tessuto orbitale circostante per esporre completamente il nervo ottico. Evitare di tagliare i tessuti e utilizzare solo la dissezione smussata. Prestare attenzione per evitare di danneggiare la vena del vortice. Un gancio muscolare può essere utilizzato per isolare il nervo ottico. Il nervo ottico del coniglio è leggermente superiore e circondato da grassi retro-orbitali. Il nervo è bianco e ha un diametro di circa un millimetro. Clamp il nervo ottico usando un porta-aghi per 60 secondi per indurre una lesione da schiacciamento. Il sito di schiacciamento è di circa tre millimetri posteriormente alla testa del nervo ottico per evitare di danneggiare l'arteria oftalmica. Ora, riavvicina il muscolo retto superiore alla sua posizione originale sul globo. Passare i due aghi, precedentemente utilizzati, per fissare parzialmente il muscolo retto superiore attraverso l'inserzione muscolare originale. Stringere la sutura e posizionare un nodo da chirurgo. Completa la procedura suturando la congiuntiva al limbus con tre suture neuroptive. Durante il recupero e il periodo di postazione, fornire analgesia e cure di supporto all'animale. Per valutare la funzione visiva, misuriamo il rapporto tra il diametro della pupilla e il diametro bianco-bianco in condizioni di illuminazione mesopica e flash. Prima dell'ONC, la pupilla si restringeva significativamente in risposta alla luce. Già il primo giorno dopo l'ONC, il diametro della pupilla mostrava cambiamenti minimi o nulli, indicando una significativa perdita della funzione visiva. Abbiamo anche registrato i potenziali evocati visivi del flash, VEP, sia dallo schiacciamento del nervo ottico che dagli occhi controlaterali non trattati. Le misurazioni Flash VEP riflettono la risposta dalla retina, attraverso il nervo ottico, al cervello. Mentre la latenza P1 è rimasta costante, l'ampiezza P1 è diminuita significativamente negli occhi ONC, indicando una significativa perdita della funzione visiva. Per valutare la perdita di assoni dopo la procedura ONC, abbiamo utilizzato l'imaging a fluorescenza delle sezioni longitudinali del nervo ottico. Nel gruppo non trattato, il tracciante dell'assone anterogrado CTB ha mostrato una marcatura continua in tutto il nervo ottico. Tuttavia, nel gruppo schiacciato, la marcatura degli assoni si è fermata al sito di schiacciamento, indicando una lesione nervosa. I profili di intensità della fluorescenza lo hanno confermato quantitativamente, mostrando un calo significativo dell'intensità media dell'assone marcato con CTB distale al sito di schiacciamento. In conclusione, abbiamo presentato una guida passo passo per la procedura ONC in un modello di coniglio, garantendo una replica affidabile. Non abbiamo osservato complicazioni. L'efficacia della tecnica ONC nella creazione di lesioni del nervo ottico e compromissione della vista è stata convalidata attraverso la risposta pupillare e le valutazioni VEP. Questo modello di coniglio offre un'alternativa economica ai modelli animali più grandi, con una maggiore somiglianza anatomica e fisiologica con gli esseri umani. Grazie per aver guardato.