Istituzione di un modello murino con ipersensibilità alla tosse tramite inalazione di acido citrico

La tosse cronica compromette significativamente la qualità della vita, causando un aspetto pressante e un notevole onere economico. Ci concentriamo sulla pertinacia della tosse, in particolare sul meccanismo dell'ipersensibilità alla tosse. Stabiliamo un modello murino con ipersensibilità alla tosse, che verrà utilizzato per ulteriori studi sul meccanismo della tosse cronica. Rispetto ad altri modelli animali, in particolare i porcellini d'India, è più facile da mantenere, più economico e suscettibile di manipolazione genetica. Il nostro protocollo è semplice da usare. Il modello è più facile da contrastare. L'MA è più fattibile. Questo modello sarà prezioso anche per ulteriori studi sul meccanismo e sui potenziali nuovi trattamenti per la tosse cronica.

[Narratore] Per iniziare, posiziona i topi in due camere indipendenti, ciascuna collegata a un nebulizzatore a ultrasuoni. Esporre il gruppo modello a 0,1 molari di aerosol di acido citrico e il gruppo di controllo a 0,9% di aerosol salino normale. Impostare la velocità di atomizzazione al valore massimo di tre millilitri al minuto e regolare l'esposizione a due ore al giorno per due settimane. Dopo ogni sessione, rimetti i topi nelle rispettive gabbie. Imposta il sistema di pletismografia di tutto il corpo non invasivo per misurare la sensibilità alla tosse. Collegare le camere, i trasduttori di flusso, il flusso di polarizzazione e altri componenti. Calibrare il sistema facendo clic sul pulsante Calibra per garantire misurazioni accurate. Quindi, crea un nuovo studio sulla tosse nel software di sistema per topi. Configurare i parametri dello studio in modo da consentire un minuto per l'acclimatazione, 10 minuti per il tempo di risposta e 10 minuti per l'erogazione della soluzione chimica. Dopodiché, posiziona ogni topo cosciente in camere individuali, assicurandoti che ci sia solo un topo per camera. Quindi, aggiungere un millilitro della soluzione chimica appropriata, come soluzione fisiologica, acido citrico o capsaicina al nebulizzatore per registrare il numero di eventi di tosse una volta iniziata la procedura. Preparare gli strumenti per la misurazione dell'iperreattività delle vie aeree. Crea uno studio dose-risposta nel software di sistema per topi. Configurare i parametri di misurazione e la sequenza di attività. Un minuto per l'acclimatazione, 30 secondi per l'erogazione di metacolina, tre minuti per il tempo di risposta e un minuto per il recupero. Posiziona ogni topo cosciente in camere individuali, assicurandoti che ci sia solo un topo per camera. Quindi, aggiungere 50 microlitri di PBS o metacolina al nebulizzatore e iniziare lo studio. Registrare il valore di Penh, che indica la broncocostrizione in risposta all'aumento delle concentrazioni di metacolina. La sensibilità alla tosse è aumentata significativamente nel gruppo modello dopo una settimana e ha persistito per tutto il periodo di esposizione. Durante lo studio non è stata osservata alcuna mortalità né nel gruppo modello né nel gruppo di controllo. Dopo l'esposizione, il numero di eventi di tosse spontanea era significativamente più alto nel gruppo modello rispetto al gruppo di controllo. Anche la sensibilità alla tosse indotta da soluzione fisiologica, acido citrico e capsaicina era significativamente più alta nel gruppo modello dopo l'esposizione. L'iperreattività delle vie aeree è rimasta comparabile tra i due gruppi senza differenze significative dopo la modellazione. Per iniziare, raccogli il sangue dal seno orbitale del topo soppresso in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri. Mettere la provetta sul ghiaccio, centrifugare il sangue a 3000 G per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Utilizzare una pipetta per raccogliere il surnatante e aliquotarlo. Quindi, apri il torace per esporre la trachea e inserisci un ago a permanenza calibro 22 nella trachea. Lavare la trachea tre volte con 0,5 millilitri di PBS pre-raffreddato e raccogliere il liquido di lavaggio broncoalveolare. Quindi, centrifugare il fluido raccolto a 500 G per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Raccogli il surnatante, aliquotalo e conservalo a -80 gradi Celsius. Risospendere il pellet in 100 microlitri di PBS. Aprire il torace per esporre i polmoni e rimuovere con cura i tessuti polmonari. Mettere i tessuti polmonari raccolti in fiale criogeniche. Non sono state osservate differenze significative tra i gruppi nella conta totale delle cellule infiammatorie e differenziali nel liquido di lavaggio broncoalveolare.