Planimetria digitale per la valutazione della cinetica di chiusura della ferita in un modello murino

La nostra ricerca si concentra sulla standardizzazione della misurazione macroscopica della ferita utilizzando un set up di imaging controllato che garantisca coerenza e luce, posizione e distanza o protocolli mirano a ridurre al minimo la variabilità e migliorare l'attualità della misurazione della ferita ravvicinata nei modelli preclinici. Affrontiamo la mancanza di standardizzazione nelle misurazioni microscopiche delle ferite. Le metodologie attuali spesso mancano di condizioni di controllo che portano a dati incoerenti.

Il nostro protocollo offre la nostra configurazione applicabile che garantisce un'illuminazione, un posizionamento e una distanza uniformi, riducendo la probabilità e migliorando la riproducibilità. Il nostro protocollo elimina le fonti comuni di distorsione della misurazione standardizzando le condizioni di imaging. A differenza dei metodi manuali, garantisce la coerenza tra gli esperimenti, consentendo confronti accurati e riducendo la variabilità nelle misurazioni dell'area e del perimetro delle ferite.

Il nostro risultato consente di ottenere dati di misurazione delle ferite più precisi e riproducibili fornendo una metodologia standardizzata. Questa è la base per valutare gli interventi terapeutici e la ricerca preclinica sulle ferite. Per iniziare, fissare un profilo in alluminio scanalato sull'area interna del bordo laterale del tetto.

Posizionare due piastre rettangolari in alluminio con centri in polietilene nelle scanalature dei profili del tetto per consentire lo scorrimento attraverso entrambi i profili. Monta un tubo LED RGB da 20 centimetri con un angolo di 45 gradi sul bordo inferiore del primo pannello utilizzando del nastro biadesivo. Quindi, montare un pannello rettangolare in schiuma con un ritaglio circolare centrale di 7,82 centimetri su ciascun pannello del tetto per consentire l'installazione dell'obiettivo della telecamera.

Per la costruzione del pavimento, tagliare prima dei quadrati con lunghezze laterali di 2,54 centimetri da ciascun angolo del pannello di schiuma bianca di 40 x 40 centimetri. Questo passaggio garantisce che il pannello di schiuma si adatti correttamente ai profili dell'area del pavimento. Dopo aver tagliato gli angoli, posizionare il pannello di schiuma sopra i profili della superficie del pavimento.

Attacca le strisce di fissaggio a strappo ai profili in alluminio A e B per manipolare facilmente gli elementi interni della cabina fotografica. A fissare le chiusure adesive a un centimetro dal bordo di due quadrati di cartone espanso su un lato e posizionarli sulle pareti anteriore e posteriore. Usando il silicone, incolla due pannelli ai lati C e D per formare le pareti laterali sinistra e destra.

Posiziona una maschera stampata in 3D a 11,5 centimetri dal bordo di un rettangolo di schiuma bianca pretagliato di 40 x 28 centimetri per mantenere i topi sotto anestesia per inalazione. Quindi, incollalo al centro della base di riferimento. Fissa il blocco righello stampato in 3D a un centimetro dal lato sinistro della base del mouse per ospitare l'elemento di riferimento della misurazione per l'elaborazione digitale delle immagini.

Quindi, collegare un righello graduato in acciaio inossidabile da 15 centimetri al blocco righello e installare la base di riferimento completa all'interno della cabina per il ridimensionamento dell'immagine. Dopo aver anestetizzato il topo, utilizzare un punzone sterile da biopsia da cinque millimetri per applicare pressione con movimenti circolari per creare un'incisione dermoepidermica a livello della scapola. Rimuovere il lembo con una pinza seghettata e tagliare con le forbici con punta dell'iride.

Utilizzando una pinza da gioielliere, posizionare una pellicola dermica circolare di un centimetro di diametro sulla ferita per prevenire la contaminazione e la contrazione. Per acquisire le immagini delle ferite, posizionare la base di riferimento al centro del pavimento della cabina fotografica. Quindi, posizionare il mouse anestetizzato in posizione prona sulla piattaforma del mouse.

Installa la parete frontale della cabina fotografica e acquisisci immagini macroscopiche. Per aprire l'immagine di backup creata in imagej, selezionare File, Apri e Cerca. Quindi, fai clic su Apri.

Ora ingrandisci l'immagine, seleziona lo strumento linea retta, quindi utilizzando il tasto più ingrandisci il righello accanto al mouse. Disegna una linea retta di 10 millimetri sull'immagine del righello. Vai ad analizzare e impostare la scala.

Immettere 10 come distanza nota. Impostate l'unità di lunghezza su millimetri e fate clic su OK (Okay). Quindi, utilizzare lo strumento rettangolo per selezionare l'area intorno alla ferita con una larghezza e un'altezza di 150 e registrare i valori X e Y.

Quindi, fai clic con il pulsante destro del mouse sul rettangolo e seleziona duplica. Assegna un nome all'immagine duplicata e premi invio. Nella nuova immagine, premere due volte più per ingrandire.

Per separare l'immagine in canali di colore, vai su Immagine, Tipo e Stack RGB. Nell'immagine del canale rosso, fare clic con il pulsante destro del mouse sull'immagine, selezionare duplica e premere OK nella finestra di duplicazione. Quindi, fai clic sull'immagine del canale rosso, seleziona l'immagine, regola e sospira per segmentarla.

Scegliere Predefinito e fare clic su Applica per applicare la soglia. Rettificare la regione di interesse o il ROI per garantire una copertura completa della ferita ed evitare distorsioni della segmentazione. Per definire il perimetro dell'area di interesse, selezionare Modifica, quindi andare su selezione e scegliere Crea selezione.

Successivamente, seleziona Modifica, quindi Selezione e fai clic su Aggiungi al manager per aggiungerlo al gestore del ROI. Per convalidare la segmentazione, apri la finestra ROI manager e seleziona il ROI da esaminare. Fare clic su Altro, Traduci, inserire i valori X e Y registrati e premere OK.

Ingrandisci l'immagine originale, quindi seleziona il ROI nel ROI manager. Utilizzare i tasti freccia per regolare il ROI fino a quando non si allinea con la ferita. Una volta confermata la segmentazione, ottenere le misure della ferita selezionando Analizza e misura.

La percentuale di chiusura della ferita è inizialmente aumentata al 138,04% il secondo giorno a causa di processi infiammatori prima di diminuire e progredire verso le fasi di riparazione e consolidamento con una chiusura costante osservata dopo il settimo giorno. La distanza di retrazione del bordo della ferita è aumentata inizialmente durante la fase infiammatoria, ma ha iniziato a diminuire dopo il terzo giorno, come mostrato dall'equazione di Gilman che indica una contrazione graduale della ferita.