Name: Visualizzazione intraoperatoria delliniezione sottoretinica e del distacco di retina nei ratti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: Scopri un protocollo riproducibile e sicuro per l'iniezione sottoretinica e il distacco di retina nei ratti. Questa tecnica intraoperatoria migliora la ricerca sulle degenerazioni retiniche e sulle malattie oculari.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Guymer, R. H., Campbell, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Lancet. 401 (10386), 1459-1472 (2023).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li>
<li>Cheung, N., Mitchell, P., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Lancet. 376 (9735), 124-136 (2010).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+death+and+rescue+in+retinal+detachment+and+degenerations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell death and rescue in retinal detachment and degenerations.</a> Prog Retin Eye Res. 37, 114-140 (2013).</li>
<li>Russell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+voretigene+neparvovec+%28AAV2-hRPE65v2%29+in+patients+with+RPE65-mediated+inherited+retinal+dystrophy%3A+A+randomised%2C+controlled%2C+open-label%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of voretigene neparvovec (AAV2-hRPE65v2) in patients with RPE65-mediated inherited retinal dystrophy: A randomised, controlled, open-label, phase 3 trial.</a> Lancet. 390, 849-860 (2017).</li>
<li>Gagliardi, G., Ben M'Barek, K., Goureau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+replacement+in+macular+degeneration+and+retinitis+pigmentosa%3A+A+pluripotent+stem+cell-based+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell replacement in macular degeneration and retinitis pigmentosa: A pluripotent stem cell-based approach.</a> Prog Retin Eye Res. 71, 1-25 (2019).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+experimental+mouse+model+of+retinal+detachment%3A+Complete+functional+and+histologic+recovery+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel experimental mouse model of retinal detachment: Complete functional and histologic recovery of the retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. 79, e50660(2013).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+Effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: Effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol Vis. 7, 131-137 (2001).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. 101, 672-681 (1994).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+findings+in+a+mouse+model+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence findings in a mouse model of retinal detachment.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subretinal+injection+on+retinal+structure+and+function+in+a+rat+oxygen-induced+retinopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model.</a> Mol Vis. 23, 832-843 (2017).</li>
<li>Sene, A., Apte, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+photoreceptor+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced photoreceptor cell death.</a> Adv Exp Med Biol. 1074, 203-208 (2018).</li>
<li>Zhang, Z. Y., Sun, Y. J., Song, J. Y., Fan, B., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+and+examination+methods+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Experimental models and examination methods of retinal detachment.</a> Brain Res Bull. 169, 51-62 (2021).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am J Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Dentel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+flood+illumination+ophthalmoscopy+in+nonhuman+primates%3A+Findings+in+normal+and+short-term+induced+detached+retinae%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics flood illumination ophthalmoscopy in nonhuman primates: Findings in normal and short-term induced detached retinae.</a> Ophthalmol Sci. 3 (4), 100316(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Atipemazolo (Antidorm 4.27mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, Francia</td><td>/</td><td>Risveglio</td></tr><tr><td>Cloramfenicolo-retinolo (Ophtalon 10mg/g)</td><td>TVM, Lempdes, Francia</td><td>FR/V/3787889 6/1989</td><td>Cura postoperatoria</td></tr><tr><td>Vetrini Mini 8mm</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>/</td><td>https://www.wpiinc.com/var-1040-cover-slips-pkg-100.html?srsltid=AfmBOoraZfMhuUuY_7rQbM5YKfqM2VR1PT0L-UHQ5uQUdjaeZuogbKP1&utm_source=chatgpt.com</td></tr><tr><td>Idrossipropilmetilcellulosa</td><td>FCI S.A.S., Parigi, Francia</td><td>/</td><td>Somministrazione sottoretinica viscosa</td></tr><tr><td>Ketamina (Ketamidor 100 mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, Francia</td><td>/</td><td>Anestesia generale</td></tr><tr><td>Lumera 700</td><td>Carl Zeiss, Oberkochen, Germania</td><td>https://www.zeiss.com/meditec/en/products/surgical-microscopes/ophthalmic-microscopes/opmi-lumera-700.html?utm_source=chatgpt.com</td><td>Microscopio oftalmico</td></tr><tr><td>Medetomidina (Domitor 0,85 mg/mL)</td><td>Vetoquinol S.A., Parigi, Francia</td><td>https://www.vetoquinol.com/en</td><td>Anestesia generale</td></tr><tr><td>Microiniettore Micro 4</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>SYS-MICRO4</td><td>Iniezione</td></tr><tr><td>Ossibuprocaina 1,6 mg/0,4 mL</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, Francia</td><td>https://www.laboratoires-thea.com/en/chlorhydrate-doxybuprocaine-thea?utm_source=chatgpt.com</td><td>Anestesia locale</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies Europe B.V., Bleiswijk, Paesi Bassi</td><td>14190-094</td> Siringa <td>per somministrazione sottoretinica acquosa</td></tr><tr><td>(10 o 20 &micro; L)</td><td>Hamilton, Reno, NV</td><td>80300</td><td>Gel</td></tr><tr><td>lacrimale per iniezione (Lubrithal)</td><td>Dechron, Shrewsbury, Regno Unito</td><td>https://www.dechra.ca/our-products/ca/companion-animal/dog/non-prescription/lubrithal?utm_source=chatgpt.com</td><td>Protezione della cornea</td></tr><tr><td>Tropicamide (Mydriaticum 1 mg/mL)</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, Francia</td><td>/</td><td>Dilatazione della pupilla</td></tr></tbody></table>

visualizzazione intraoperatoria dell'iniezione sottoretinica e del distacco di retina nei ratti

Intraoperative Visualization of Subretinal Injection and Retinal Detachment in Rats

Il successo di un'iniezione sottoretinica si basa su una somministrazione precisa ed esclusiva nello spazio sottoretinico (cioè tra i fotorecettori e gli strati di RPE) attraverso la retinotomia, evitando l'emorragia sottoretinica, poiché il sangue è tossico per i fotorecettori e le cellule RPE. Il successo del parto è confermato dalla visualizzazione intraoperatoria (Figura 2L), dalla fotografia del fondo oculare postoperatorio immediato e dalla tomografia a coerenza ottica (OCT). La fotografia del fondo oculare esclude l'emorragia sottoretinica, mentre le scansioni OCT B confermano il distacco di retina (RD) con liquido sottoretinico chiaro (Figura 1 e Figura 3). Inoltre, la fotografia del fondo oculare può identificare il contatto con la lente o la cataratta indotta che potrebbero passare inosservate durante la procedura (Figura 3C, D). Sia la fotografia che le scansioni OCT possono stimare le dimensioni dell'area staccata o della bolla (Figura 1B-E).
Diversi fattori influenzano le dimensioni della bolla: (1) Posizione del sito di iniezione: più il sito di iniezione è lontano dal disco ottico, più piccola è l'area distaccata; (2) Volume iniettato: un volume di iniezione di 20-25 μL può staccare circa metà della retina nei ratti; (3) Qualità della retina distaccata: nei modelli di degenerazione retinica (ad esempio, P23H, RCS), il distacco può essere difficile a causa dell'aumento della resistenza tra fotorecettori e cellule RPE causata da processi degenerativi, come la gliosi e l'accumulo di materiale sottoretinico. In questi casi, i distacchi di retina indotti sono tipicamente piatti e le scansioni OCT sono fondamentali per delineare chiaramente l'area distaccata.
Una piccola emorragia intravitreale può verificarsi nel sito di iniezione perché i microvasi retinici non possono sempre essere completamente evitati (Figura 3E). Tuttavia, tali emorragie in genere non si estendono nello spazio sottoretinico.
Nei casi di distacco insufficiente, il problema deve essere riconosciuto intraoperatoriamente, rendendo necessaria l'immediata reiniezione attraverso la retinotomia preformata. Durante una sessione sperimentale con 20 ratti, due chirurghi (uno esperto e uno principiante) hanno eseguito il metodo passo dopo passo. Il chirurgo esperto ha ottenuto il successo in 9 procedure su 10, mentre il principiante ha avuto successo in 6 su 10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig1.jpg"> 
Figura 1: Panoramica del processo e dei risultati. (A) Rappresentazione schematica del processo di iniezione sottoretinica in un occhio di ratto, che mostra il volume significativo del cristallino. (B,C) Fotografia del fondo oculare subito dopo l'iniezione (B) e 6 giorni dopo l'iniezione (C). Le punte delle frecce indicano il sito di iniezione. L'area di distacco della retina è delineata da una linea tratteggiata. (D,E) Tomografia a coerenza ottica B-scan immediatamente dopo l'iniezione (D) e 6 giorni dopo l'iniezione (E). ON: nervo ottico. Ingrandimento: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig2.jpg"> 
Figura 2: Fasi del protocollo di iniezione sottoretinica. Il protocollo è stato dimostrato in un ratto Long Evans di 8 settimane in anestesia generale. Per una descrizione dettagliata di ogni fase, fare riferimento al video o alla sezione "Protocollo" nel testo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig3.jpg"> 
Figura 3: Esempi di vari risultati della fotografia del fondo oculare postoperatorio. (A) Aspetto postoperatorio normale con minore dispersione di pigmento nel sito di iniezione (freccia). (B) Aspetto postoperatorio normale con una piccola bolla d'aria intravitreale nel sito di iniezione. Queste piccole bolle d'aria hanno origine dalla siringa e sono innocue, anche nello spazio sottoretinico. (C, D) Contatto con la lente con conseguente opacizzazione minore (C) o significativa (D) della lente (cataratta). (E,F) Sanguinamento intravitreale minore (E) o più esteso (F) localizzato vicino al sito di iniezione, senza diffusione nello spazio sottoretinico. (G) Sanguinamento nel sito di iniezione che si diffonde prevalentemente nello spazio sottoretinico. In questo caso, la retinotomia ha causato una lesione di un vaso sanguigno retinico. (H) Emorragia intravitreale estesa derivante da penetrazione sclerale. Ingrandimento: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Visualizzazione intraoperatoria dell'iniezione sottoretinica e del distacco di retina nei ratti

Subretinal injection, the delivery of a solution between the photoreceptors and the retinal pigment epithelium (RPE), creates a subretinal space where ...

intraoperative-visualization-subretinal-injection-retinal-detachment

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fonte: Park, S. W., et al. Approccio limbare-Iniezione sottoretinica di vettori virali per la terapia genica nell'epitelio pigmentato retinico di topi. J. Vis. Exp. (2015)Il video descrive il metodo per l'iniezione sottoretinica di vettori virali nell'epitelio pigmentato retinico (RPE) in un modello murino. Descrive in dettaglio la procedura, dall'anestesia e dalla preparazione degli occhi alla consegna precisa del vettore lentivirale, garantendo l'integrazione e l'espressione genica nell'EPR.

Iniezione sottoretinica di vettori virali nell'epitelio pigmentato retinico in un modello murino

Creazione di distacchi di retina sperimentali con un'altezza riproducibile e sostenuto di distacco, e senza emorragia subretinica, è importante per lo studio della fisiopatologia della perdita di cellule fotorecettori della retina nella malattia e valutare possibili interventi terapeutici. Qui riportiamo tale metodo in dettaglio.

Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

Qui presentiamo un protocollo accettato dalla comunità in formato multimediale per l'iniezione sottoretinica di un bolo di cellule RPE in ratti e topi. Questo approccio può essere utilizzato per determinare i potenziali di salvataggio, i profili di sicurezza e le capacità di sopravvivenza delle cellule RPE trapiantate dopo l'impianto in modelli animali di degenerazione retinica.

Esecuzione sottoretinico Iniezioni in roditori di agire cellule retiniche epitelio pigmentato in sospensione

L'iniezione diretta nel nervo ottico del ratto è utile per la ricerca rigenerativa. Dimostriamo una tecnica minimamente invasiva per l'iniezione diretta in un nervo ottico di ratto che non comporta l'apertura del cranio. Utilizzando questo metodo, le complicanze chirurgiche sono ridotte al minimo e il recupero è più rapido.

Tecnica mini-invasiva per iniezione in Rat nervo ottico

Le iniezioni sottoretiniche sono la tecnica più comune per somministrare grandi agenti terapeutici come proteine e vettori virali ai fotorecettori e all'epitelio pigmentato retinico. Qui viene descritto un metodo alternativo nei topi che si rivolge con successo allo spazio sottoretinico con danni collaterali minimi e tempi di recupero rapidi.

Un metodo alternativo e validate iniezione per l&#39;accesso ai sottoretinico Spazio<i&gt; via</i&gt; Un approccio Transcleral posteriore

Iniezione subretinal è stato ampiamente applicato negli studi preclinici di terapia sostitutiva delle cellule staminali per degenerazione maculare senile. In questo articolo visualizzato in quel momento, descriviamo una tecnica di iniezione subretinal meno rischioso, riproducibile e precisamente modificati tramite l'approccio trans-sclerale per fornire cellule negli occhi del ratto.

Sviluppo di un protocollo di raffinata per Trans-sclerale Subretinal trapianto delle cellule epiteliali del pigmento retinico umano negli occhi di topo

Qui dimostriamo un nuovo approccio all'utilizzo di tomografia a coerenza ottica spectral-domain ad alta risoluzione (HR-SD-OCT) per assistere la consegna degli agenti di terapia genica nello spazio subretinal, valutare la sua copertura area e caratterizzano la vitalità del fotoricettore.

Tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata Mouse per aiutare l'iniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica

Cellule epiteliali del pigmento retinico potrebbero servire come una terapia di sostituzione delle cellule per la forma avanzata di degenerazione maculare senile secca. Questo protocollo descrive la generazione di un modello di grande-eyed di atrofia geografica e il subretinal trapianto delle cellule epiteliali del pigmento retinico derivati da cellule staminali embrionali umane in questo modello della malattia.

Subretinal trapianto delle cellule epiteliali del pigmento retinico derivato di cellule staminali embrionali umane in un modello di atrofia geografica gran-eyed

Questo protocollo descrive una tecnica unica che utilizza un approccio transcongiuntivale per accedere al nervo ottico del ratto per le iniezioni.

Approccio transcongiuntivale per l'iniezione nel nervo ottico del ratto

Questo studio presenta una metodologia per la somministrazione di terapie nella retina e nei nervi ottici del ratto adulto. Inoltre, viene introdotto un metodo unico di recupero dei tessuti per una raccolta in blocco top-down del nervo ottico e della retina in un ratto adulto.

Somministrazione terapeutica oculare e recupero avanzato dei tessuti nei ratti adulti

Scopri un protocollo riproducibile e sicuro per l'iniezione sottoretinica e il distacco di retina nei ratti. Questa tecnica intraoperatoria migliora la ricerca sulle degenerazioni retiniche e sulle malattie oculari.

Visualizzazione intraoperatoria dell'iniezione sottoretinica e del distacco di retina nei ratti

Esplora altri video