Name: Dispositivo di stretching equibiassiale per microscopia a fluorescenza confocale a cellule vive ad alto ingrandimento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Scopri come studiare le risposte cellulari agli stimoli meccanici con un dispositivo di stretching equibiassiale pneumatico. Questo metodo consente l'osservazione in microscopia a fluorescenza confocale ad alto ingrandimento su cellule vive.

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<ol><li>Huang, L., Mathieu, P. S., Helmke, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stretching+device+for+high-resolution+live-cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">A stretching device for high-resolution live-cell imaging.</a> Ann Biomed Eng. 38 (5), 1728-1740 (2010).</li>
<li>Meza, D., Abejar, L., Rubenstein, D. A., Yin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+shearing-stretching+device+that+can+apply+physiological+fluid+shear+stress+and+cyclic+stretch+concurrently+to+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech.+Eng%22%5BJournal%5D)">A shearing-stretching device that can apply physiological fluid shear stress and cyclic stretch concurrently to endothelial cells.</a> J Biomech. Eng. 138 (3), 4032550(2016).</li>
<li>Constantinou, I., Bastounis, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-stretching+devices%3A+advances+and+challenges+in+biomedical+research+and+live-cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cell-stretching devices: advances and challenges in biomedical research and live-cell imaging.</a> Trends Biotechnol. 41 (7), 939-950 (2023).</li>
<li>Trepat, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelasticity+of+human+alveolar+epithelial+cells+subjected+to+stretch%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Viscoelasticity of human alveolar epithelial cells subjected to stretch.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 287 (5), L1025-L1034 (2004).</li>
<li>Kaunas, R., Nguyen, P., Usami, S., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+effects+of+Rho+and+mechanical+stretch+on+stress+fiber+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cooperative effects of Rho and mechanical stretch on stress fiber organization.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (44), 15895-15900 (2005).</li>
<li>Barbee, K. A., Macarak, E. J., Thibault, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+measurements+in+cultured+vascular+smooth+muscle+cells+subjected+to+mechanical+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Strain measurements in cultured vascular smooth muscle cells subjected to mechanical deformation.</a> Ann Biomed Eng. 22 (1), 14-22 (1994).</li>
<li>Wipff, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+covalent+attachment+of+adhesion+molecules+to+silicone+membranes+for+cell+stretching+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The covalent attachment of adhesion molecules to silicone membranes for cell stretching applications.</a> Biomaterials. 30 (9), 1781-1789 (2009).</li>
<li>Wen, H., Blume, P. A., Sumpio, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+integrins+and+focal+adhesion+kinase+in+the+orientation+of+dermal+fibroblasts+exposed+to+cyclic+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Wound+J%22%5BJournal%5D)">Role of integrins and focal adhesion kinase in the orientation of dermal fibroblasts exposed to cyclic strain.</a> Int Wound J. 6 (2), 149-158 (2009).</li>
<li>Chu, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+stretch+induces+hair+regeneration+through+the+alternative+activation+of+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Mechanical stretch induces hair regeneration through the alternative activation of macrophages.</a> Nat. Commun. 10 (1), 1524(2019).</li>
<li>Le Roux, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+mechanochemical+feedback+between+curved+membranes+and+BAR+protein+self-organization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Dynamic mechanochemical feedback between curved membranes and BAR protein self-organization.</a> Nat. Commun. 12 (1), 6550(2021).</li>
<li>Kosmalska, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+principles+of+membrane+remodelling+during+cell+mechanoadaptation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Physical principles of membrane remodelling during cell mechanoadaptation.</a> Nat. Commun. 6 (1), 7292(2015).</li>
<li>Quiroga, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mechanosensing+mechanism+controls+plasma+membrane+shape+homeostasis+at+the+nanoscale%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A mechanosensing mechanism controls plasma membrane shape homeostasis at the nanoscale.</a> Elife. 12, e72316(2023).</li>
<li>Casares, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydraulic+fracture+during+epithelial+stretching%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Hydraulic fracture during epithelial stretching.</a> Nat Mater. 14 (3), 343-351 (2015).</li>
<li>Beedle, A. E. M., et al. Fibrillar adhesion dynamics govern the timescales of nuclear mechano-response via the vimentin cytoskeleton. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBeedle%2C+AEM+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2023).</li>
<li>Kechagia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+laminin-keratin+link+shields+the+nucleus+from+mechanical+deformation+and+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">The laminin-keratin link shields the nucleus from mechanical deformation and signalling.</a> Nat Mater. 22 (11), 1409-1420 (2023).</li>
<li>Andreu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+force+loading+rate+drives+cell+mechanosensing+through+both+reinforcement+and+cytoskeletal+softening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">The force loading rate drives cell mechanosensing through both reinforcement and cytoskeletal softening.</a> Nat. Commun. 12 (1), 4229(2021).</li>
<li>Phuyal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+strain+stimulates+COPII+-dependent+secretory+trafficking+via+Rac1%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Mechanical strain stimulates COPII -dependent secretory trafficking via Rac1.</a> EMBO J. 41 (18), e110596(2022).</li>
<li>Oria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+loading+explains+spatial+sensing+of+ligands+by+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Force loading explains spatial sensing of ligands by cells.</a> Nature. 552 (7684), 219-224 (2017).</li>
<li>Cole, R. W., Jinadasa, T., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+and+interpreting+point+spread+functions+to+determine+confocal+microscope+resolution+and+ensure+quality+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measuring and interpreting point spread functions to determine confocal microscope resolution and ensure quality control.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1929-1941 (2011).</li>
<li>Faure, M. L., Gómez-González, M., Baguer, O., Comelles, J., Martínez, E., Arroyo, M., Trepat, X., Roca-Cusachs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+Micropatterned+Traction+Force+Microscopy%3A+A+Technique+to+Control+3D+Cell+Shape+While+Measuring+Cell-Substrate+Force+Transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Science%22%5BJournal%5D)">3D Micropatterned Traction Force Microscopy: A Technique to Control 3D Cell Shape While Measuring Cell-Substrate Force Transmission.</a> Advanced Science. 46, 2406932(2024).</li>
<li>Bogdanov, A. M., Kudryavtseva, E. I., Lukyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-fading+media+for+live+cell+GFP+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Anti-fading media for live cell GFP imaging.</a> PLoS One. 7 (12), 53004(2012).</li>
<li>Richter, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glyoxal+as+an+alternative+fixative+to+formaldehyde+in+immunostaining+and+super-resolution+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Glyoxal as an alternative fixative to formaldehyde in immunostaining and super-resolution microscopy.</a> EMBO J. 37 (1), 139-159 (2018).</li>
<li>Kopek, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+protocols+for+correlative+super-resolution+fluorescence+imaging+and+electron+microscopy+of+chemically+fixed+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Diverse protocols for correlative super-resolution fluorescence imaging and electron microscopy of chemically fixed samples.</a> Nat Protoc. 12 (5), 916-946 (2017).</li>
<li>Balachandran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+strain+induces+dual-mode+endothelial+to+mesenchymal+transformation+of+the+cardiac+valve%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cyclic strain induces dual-mode endothelial to mesenchymal transformation of the cardiac valve.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (50), 19943-19948 (2011).</li>
<li>Kamble, H., Barton, M. J., Jun, M., Park, S., Nguyen, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+stretching+devices+as+research+tools%3A+Engineering+and+biological+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Cell stretching devices as research tools: Engineering and biological considerations.</a> Lab Chip. 16 (17), 3193-3203 (2016).</li>
<li>Jorba, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+elasticity+of+the+lung+extracellular+microenvironment+is+regulated+by+macroscale+tissue+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Nonlinear elasticity of the lung extracellular microenvironment is regulated by macroscale tissue strain.</a> Acta Biomater. 92, 265-276 (2019).</li>
<li>Mayer, C. R., Arsenovic, P. T., Bathula, K., Denis, K. B., Conway, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+3D+printed+stretching+devices+for+imaging+force+transmission+in+live-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Characterization of 3D printed stretching devices for imaging force transmission in live-cells.</a> Cell Mol Bioeng. 12 (4), 289-300 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Maschera in acetato</td><td>JD Fotodati</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acrilamide</td><td>Biorad</td><td>161-0140</td><td>Soluzione di acrilammide al 40%</td></tr><tr><td>APS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Trasmissione A3678</td><td>Persolfato di ammonio per elettroforesi, &ge; 98%</td></tr><tr><td>Aptes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>281778</td><td>(3-amminopropil)trietossisilano</td></tr><tr><td>Pompa microfluidica autonoma</td><td>Elveflow Cobalto</td><td>Doppio cobalto</td><td>Doppio cobalto</td></tr><tr><td>Bisacrilammide</td><td>Biorad</td><td>161-0142</td><td>Soluzione 2% bis</td></tr><tr><td>Lama</td><td>Fisher Scientifico</td><td>11733919</td><td>Gruppo Didattico Hoja ha fatto ctica X100 LAME BISTOURI STERILI N&deg; 23&nbsp; LAMD23&nbsp;</td></tr><tr><td>Clip</td><td>Sprintis</td><td>AKXX000001</td><td>Clip Bull Dog, 32 mm, in metallo, capacità 10 mm, nichelato</td></tr><tr><td>Trattamento corona</td><td>Prodotti elettrotecnici</td><td>BD-20AC, codice:12051A</td><td>BD-20AC TRATTAMENTO CORONA DA LABORATORIO</td></tr><tr><td>Tazze</td><td>VWR</td><td>611-1368</td><td>VWR, Coppe in becher, monouso, 250 mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche</td><td>10236276001</td><td>Colorazione DAPI</td></tr><tr><td>Etanolo 96%</td><td>Panreac Qu&iacute; mica, SLU</td><td>131085-1212</td><td>Etanol 96% v/v para an&aacute; lisis, ACS- 2,5 L</td></tr><tr><td>Fibronectina</td><td>Sigma</td><td>F0895</td><td>Fibronectina, da plasma umano, liquido&nbsp; 0.1%</td></tr><tr><td>FluoSpheres Microsfere modificate con carbossilato, 0,1 &micro; m</td><td>Tecnologia di vita</td><td>F8801, F8803</td><td>Perline fluorescenti gialle, verdi e rosse per la valutazione della risoluzione</td></tr><tr><td>FluoSpheres Microsfere modificate con carbossilato, 0,2 &micro; m</td><td>Fisher Scientifico</td><td>F8809, F8810</td><td>Perle fluorescenti gialle, verdi e rosse per la calibrazione della deformazione</td></tr><tr><td>Glutaraldeide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G6403</td><td>Soluzione di glutaraldeide 50% in H2O</td></tr><tr><td>Interferometro</td><td>Veeco&nbsp;</td><td>Wyko NT1100</td><td>Interferometro per misurare gli spessori delle membrane PDMS</td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Panreac Qu&iacute; mica, SLU</td><td>Codice 131090-1212&nbsp;</td><td>2-propanolo (Reag. Ph. Eur.) para an&aacute; lisis, ACS, ISO</td></tr><tr><td>Laiton pesa</td><td></td><td></td><td>Su misura</td></tr><tr><td>Fazzoletti privi di lanugine</td><td>Berkshire</td><td>DURX670, DR670090920</td><td>Salviette in tessuto non tessuto</td></tr><tr><td>Lubrificante (vaselina)</td><td>Sigma</td><td>16415</td><td>Vaselina</td></tr><tr><td>Allineatore maschera</td><td>S&uuml; ss MicroTec&nbsp;</td><td>MJB4&nbsp;</td><td>Allineatore a maschera per fotolitografia su lastre in PMMA</td></tr><tr><td>Mowiol</td><td>Calbiochem - Merck</td><td>475904</td><td>Reagente MOWIOL 4-88</td></tr><tr><td>Microscopio NIKON a disco rotante confocale</td><td>Nikon</td><td>Eclissi Ti-E/B</td><td>dotato di Nikon Ti-S-ER&nbsp; Palco</td></tr><tr><td>Microscopio verticale NIKON</td><td>Nikon</td><td>Eclissi Ni-E</td><td>dotato di tavolino Nikon NI-SH-E</td></tr><tr><td>Obiettivo 60x</td><td>Nikon</td><td>CFI Apo NIR 60X W</td><td>NIR Apo 60X/1.0w DIC N2 WD 2.8</td></tr><tr><td>Soluzione PBS</td><td>Gibco</td><td>14200067</td><td>DPBS, 10x</td></tr><tr><td>Sensori di sicurezza</td><td>Dow Corning</td><td>2401673921</td><td>Sylgard - 184 Elastomero Siliconico KIT DN 109</td></tr><tr><td>Coperchio dell'anello della piastra di Petri (grande)</td><td>Proquinorte</td><td>93060</td><td>Plato de cultivo celular TPP SKU: 07177925 diametro 100</td></tr><tr><td>Coperchio dell'anello della piastra di Petri (piccolo)</td><td>Proquinorte</td><td>93060</td><td>Plato de cultivo celular TPP SKU: 07177924</td></tr><tr><td>Pulitore al plasma</td><td>Harrick</td><td>PDC-002</td><td>Generatore di plasma di ossigeno</td></tr><tr><td>Piastre e anelli in PMMA</td><td></td><td></td><td>Vedere la tabella delle specifiche di Excel nei documenti supplementari</td></tr><tr><td>Prolungare</td><td>Invitrogen</td><td>P36930 /P36934</td><td>Reagente antisbiadimento ProLong Gold</td></tr><tr><td>Repelle-Silano</td><td>GE Sanità</td><td>17-1332-01</td><td>PlusOne Repel-Silane ES</td></tr><tr><td>Anelli/anello di gomma</td><td>Tecnifil</td><td></td><td>Su misura</td></tr><tr><td>Spin coater</td><td>Alloro</td><td>WS-650Sz</td><td>Spin coater</td></tr><tr><td>SPY650-DNA</td><td>Spirocromo</td><td>SC 501</td><td>SPY650-DNA</td></tr><tr><td>Cucchiaio da sterzo</td><td>VWR</td><td>231-0416</td><td>Spatola monouso corta Eco, cucchiaio e misurino a doppia estremità, additivo in PP ed EcoPure</td></tr><tr><td>Resina SU8 2100</td><td>Microchimica</td><td>Y111075</td><td>SU8-2100</td></tr><tr><td>Sviluppatore SU8</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>484431</td><td>Acetato di etere monometilico di glicole propilenico</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9281-50ML</td><td>N,N,N',N'-Tetrametiletilendiammina, Bioreagente suitab. Reagente per elettroforesi</td></tr><tr><td>Tricloro(1H,1H,2H,2H-perfluoroottil)silano&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>448931</td><td>&nbsp; Tricloro(1H,1H,2H,2H-perfluoroottil)silano</td></tr><tr><td>Pinzetta</td><td>IESMAT</td><td>T5039&nbsp;</td><td>Dumont HP Pinzetta 7 in acciaio inossidabile. Punta da 0,17 x 0,10 mm. (Agar Scientific Ltd)</td></tr><tr><td>Controllore del vuoto</td><td>GARCAP/Parker</td><td>&nbsp; 990-005203-005&nbsp;</td><td>Controlador de vacio&nbsp;</td></tr><tr><td>Regolatore di vuoto fluigent</td><td>Fluigente</td><td>LU-FEZ-N800</td><td>LineUp Flow EZ (n800mbar)</td></tr><tr><td>Carta da banco bianca</td><td>Raima</td><td>931.1001</td><td>&nbsp; Carta Raima 42 x 52</td></tr></tbody></table>

dispositivo di stretching equibiassiale per microscopia a fluorescenza confocale a cellule vive ad alto ingrandimento

Equibiaxial Stretching Device for High Magnification Live-Cell Confocal Fluorescence Microscopy

Taratura e radialità La corretta caratterizzazione del ceppo ottenuto è una garanzia per la riproducibilità e il controllo degli esperimenti. Mentre le perle fluorescenti possono essere aggiunte a ciascun campione per registrare con precisione la deformazione, una fase di calibrazione precedente garantisce una corretta pianificazione dell'esperimento, conoscendo l'entità della deformazione che lo sperimentatore desidera applicare al campione prima dell'effettivo allungamento. La deformazione non dipen...

Dispositivo di stretching equibiassiale per microscopia a fluorescenza confocale a cellule vive ad alto ingrandimento

Cells are continuously exposed to mechanical forces in physiological and pathological situations, including a variety of tensile and compressive stresses. ...

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Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.

Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis</em

Illustriamo l'uso di una forza costante pinzette ottiche assiali per esplorare le proprietà meccaniche delle molecole di DNA brevi. Con stiramento DNA assialmente, riduciamo al minimo gli ostacoli sterici e manufatti derivanti convenzionale manipolazione laterale, che ci permette di studiare molecole di DNA più corto ~ 100 nm.

Stretching brevi sequenze di DNA con pinzette costante forza assiale ottici

Presentiamo in questo articolo un romanzo stiramento piattaforma che può essere usato per studiare le risposte delle cellule singole a complessi anisotropo deformazione meccanica biassiale e quantificare le proprietà meccaniche dei tessuti biologici.

Una piattaforma Novel Stretching per applicazioni in cellule e tessuti mechanobiology

Un nuovo protocollo di imaging è stato sviluppato utilizzando un attuatore meccanico motorizzato personalizzato per consentire la misurazione delle risposte in tempo reale alla deformazione meccanica nelle cellule vive. Rilevante per la meccanobiologia, il sistema può applicare deformazioni fino al 20% consentendo l'imaging quasi in tempo reale con microscopia confocale o a forza atomica.

Imaging Live Cell durante meccanica Stretch

Nuovi strumenti per la ricerca di mechanobiology sono necessari per capire lo stress come meccanico attiva vie biochimiche e suscita risposte biologiche. Qui, presenteremo un nuovo metodo per stimolazione meccanica selettiva degli animali immobilizzati con una trappola di microfluidica permettendo di imaging ad alta risoluzione delle risposte cellulari.

Utilizzando un dispositivo di microfluidica per stimolazione meccanica e alta risoluzione Imaging di c. elegans

Utilizzando un dispositivo progettato in precedenza per applicare la deformazione meccanica alle celle aderenti, questo documento descrive una geometria del substrato ridisegnata e un apparato personalizzato per l'imaging a cella singola ad alta risoluzione delle cellule tese con un obiettivo di immersione in olio 100x.

Imaging ad alta risoluzione di dinamiche nucleari in cellule vive sotto tensione uniassiale

Qui è presentato il protocollo della tecnica Conpokal, che combina microscopia a forza confocale e atomica in un'unica piattaforma di strumenti. Conpokal fornisce la stessa cellula, la stessa regione, vicino all'imaging confocale simultaneo e alla caratterizzazione meccanica di campioni biologici vivi.

Microscopia confocale e a forza atomica (Conpokal) quasi simultanea su cellule vive

Presentato qui è un protocollo per l'imaging a cellule vive a super-risoluzione nel tessuto intatto. Abbiamo standardizzato le condizioni per l'imaging di una popolazione di cellule staminali adulte altamente sensibile nel suo ambiente di tessuti nativi. Questa tecnica prevede il bilanciamento della risoluzione temporale e spaziale per consentire l'osservazione diretta dei fenomeni biologici nei tessuti vivi.

Imaging di cellule vive super-risoluzione di strutture subcellulari

Qui descriviamo strumenti e metodi computazionali che consentono la visualizzazione e l'analisi di dati di immagini tridimensionali e quadridimensionali di embrioni di topo nel contesto dell'allungamento e della segmentazione assiale, ottenuti mediante tomografia a proiezione ottica in toto e mediante imaging dal vivo e colorazione a immunofluorescenza a montaggio intero utilizzando la microscopia multifotonica.

Approcci di visualizzazione e analisi tridimensionali e quadridimensionali per studiare l'allungamento e la segmentazione assiale dei vertebrati

La microscopia a super-risoluzione può fornire una visione dettagliata dell'organizzazione dei componenti all'interno del complesso sinaptonemale nella meiosi. Qui, dimostriamo un protocollo per risolvere le singole proteine del complesso sinaptonemale Caenorhabditis elegans .

Microscopia a super-risoluzione del complesso sinaptonemale all'interno della linea germinale di Caenorhabditis elegans

Qui presentiamo un dispositivo innovativo che applica forme d'onda di deformazione isotrope e uniassiali alle cellule, supportando al contempo la coltura su substrati con rigidità sintonizzabile e matrici proteiche personalizzabili. Questa piattaforma semplice ed economica consente ai ricercatori di indagare come i segnali meccanici regoli la funzione cellulare sia in studi fondamentali che in contesti rilevanti per la malattia.

Una piattaforma innovativa per lo stretching e l'imaging cellulare in vitro

Scopri come studiare le risposte cellulari agli stimoli meccanici con un dispositivo di stretching equibiassiale pneumatico. Questo metodo consente l'osservazione in microscopia a fluorescenza confocale ad alto ingrandimento su cellule vive.

Dispositivo di stretching equibiassiale per microscopia a fluorescenza confocale a cellule vive ad alto ingrandimento

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