Name: Un approccio non virale per generare cellule T transitorie del recettore dellantigene chimerico utilizzando lmRNA per limmunoterapia del cancro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Scopri come generare cellule T CAR transitorie mediante mRNA non integrante per l'immunoterapia del cancro. Questo metodo non virale offre una soluzione sicura ed economica rispetto alle terapie tradizionali.

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<table><tbody><tr><td>Colorante vitale 7-AAD&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Citometro a flusso per novociti</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V medium</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC capra anticorpo IgG F(ab')2 umano</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>Enzima di restrizione BglII</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3&acuto;-O-Me-m7G(5')ppp(5')G RNA Cap Struttura Analogico</td><td>NEB</td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, alto glucosio</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28 perline</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>Kit di sintesi dell'RNA HiScribe SP6 New</td><td>England BioLabs (NEB)</td><td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>Proteina ricombinante umana IL-2</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Millennium RNA Markers</td> Kit di pulizia dell'RNA <td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Monarch (500 &mu; g)</td><td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methylpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>Strumento di trasfezione al neon</td><td>Invitrogen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di trasfezione al neon 100-&mu; L Kit</td><td>Invitrogen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,05%), rosso fenolo</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>Fenolo ultrapuro:Cloroformio:Alcool isoamilico (25:24:1, v/v)</td><td>Invitrogen</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence Strumento per l'analisi cellulare in tempo reale (RTCA)</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

un approccio non virale per generare cellule t transitorie del recettore dell'antigene chimerico utilizzando l'mrna per l'immunoterapia del cancro

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

Abbiamo costruito un CAR mirato a HER2 di seconda generazione contenente un scFv derivato dall'anticorpo monoclonale di topo (mAb) umanizzato anti-HER2 4D547, una regione transmembrana e un dominio costimolatorio intracellulare 4-1BB seguito dal dominio di attivazione CD3ζ (Figura 1A). La sequenza di DNA che codifica per il CAR conteneva un promotore 5' SP6 per guidare la trascrizione dell'mRNA del CAR in vitro (Figura 1B). L'mRN...

Un approccio non virale per generare cellule T transitorie del recettore dell'antigene chimerico utilizzando l'mRNA per l'immunoterapia del cancro

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

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Questo video mostra una tecnica per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) ex vivo. Le cellule T umane sono incubate con biglie magnetiche rivestite con anticorpi anti-CD3 e anti-CD28, insieme a un terreno integrato con interleuchina-2 (IL-2), che porta all'attivazione e alla proliferazione delle cellule T. Vengono introdotti vettori lentivirali transgenici, che consentono all'RNA transgenico di integrarsi nel genoma ospite ed esprimere il transgene. Ciò si traduce in...

Una tecnica ex vivo per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico

Questo video dimostra una tecnica per la generazione ex vivo di cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) antigene specifico del tumore. I vettori retrovirali che trasportano RNA transgenico vengono mescolati con le cellule della milza in un terreno integrato con interleuchina-2 per promuovere la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule T. La miscela viene quindi trasferita su una piastra rivestita con frammenti di fibronectina umana ricombinante e centrifugata per facilitare...

Una tecnica ex vivo per generare cellule T del recettore dell'antigene chimerico tumore-specifico

Questo video dimostra una tecnica per generare cellule T del recettore chimerico dell'antigene (CAR) antigene-specifico attraverso la trasduzione retrovirale. Le cellule T CD8+ murine attivate vengono aggiunte a una piastra a micropozzetti rivestita con frammenti di fibronectina ricombinante. Vengono quindi introdotti vettori retrovirali contenenti RNA transgenico che codifica per un recettore chimerico dell'antigene (CAR) antigene-specifico e la piastra viene centrifugata per facilitare la...

Una tecnica per la generazione di cellule T CAR antigene-specifiche

I combines di protocollo corrente singola cella coppia umana TCR alfa e beta catena sequenziamento con snella generazione di vettori retrovirali compatibile con espressione TCR in vitro e in vivo .

Razionalizzato isolamento di singole cellule TCR e generazione di vettori retrovirali per In Vitro e In Vivo l'espressione del TCR umano

Descriviamo un approccio per generare in modo affidabile le cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) e testare la loro differenziazione e funzione in vitro e in vivo.

Produzione Chimeric Antigen Receptor (CAR) Cellule T per l'immunoterapia adottiva

Questo protocollo descrive la metodologia per il tracciamento non invasivo delle cellule T geneticamente modificate per esprimere i recettori dell'antigene chimerico in vivo con una piattaforma clinicamente disponibile.

Imaging dinamico di cellule T del recettore dell'antigene chimerico con [18F] tomografia ad emissione di positroni tetrafluoroborato/tomografia computerizzata

Questo articolo descrive in dettaglio il processo di produzione delle cellule T del recettore dell'antigene chimerico per uso clinico, in particolare utilizzando un processore cellulare automatizzato in grado di eseguire la trasduzione virale e la coltivazione delle cellule T. Forniamo raccomandazioni e descriviamo le insidie che dovrebbero essere considerate durante lo sviluppo del processo e l'implementazione di uno studio clinico in fase iniziale.

Produzione di cellule T del recettore dell'antigene chimerico su un processore cellulare automatizzato

Questo protocollo semplifica la produzione di vettori retrovirali e la trasduzione delle cellule T murine, facilitando la generazione efficiente di cellule CAR-T di topo.

Generazione efficiente di cellule T del recettore chimerico murino dell'antigene (CAR)-T

Questo protocollo fornisce un flusso di lavoro semplificato per generare e testare cellule T regolatorie del recettore dell'antigene chimerico umano (CAR Tregs).

Generazione di cellule T regolatorie del recettore dell'antigene chimerico umano

Viene fornito un protocollo dettagliato per l'utilizzo della tecnologia CRISPR/Cas9 per ottenere un knock-in mirato altamente efficiente di grandi costrutti multicistronici in cellule T umane primarie attraverso la via di riparazione del DNA HMEJ (omologia-mediata da end joining). Le cellule T ingegnerizzate con questo protocollo adattabile alle cGMP mantengono un'eccellente espansione cellulare, citotossicità e produzione di citochine.

Ingegnerizzazione non virale di cellule T umane primarie tramite integrazione mirata di giunzione terminale mediata da omologia di grandi modelli di DNA

Questo protocollo descrive i passaggi essenziali per la coltivazione delle cellule T primarie, inclusi il loro isolamento, attivazione, espansione e trasfezione transitoria tramite elettroporazione dell'mRNA. Inoltre, viene proposto un flusso di lavoro e un pannello di anticorpi per l'analisi citometrica a flusso del fenotipo, dei marcatori di attivazione, della vitalità e dell'espressione del recettore antigenico chimerico (CAR).

Isolamento, coltivazione e trasfezione transitoria delle cellule T primarie umane per generare cellule T del recettore antigenico chimerico (CAR)

Scopri come generare cellule T CAR transitorie mediante mRNA non integrante per l'immunoterapia del cancro. Questo metodo non virale offre una soluzione sicura ed economica rispetto alle terapie tradizionali.

Un approccio non virale per generare cellule T transitorie del recettore dellantigene chimerico utilizzando lmRNA per limmunoterapia del cancro (Video) | JoVE Journal

Un approccio non virale per generare cellule T transitorie del recettore dell'antigene chimerico utilizzando l'mRNA per l'immunoterapia del cancro

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