Lavaggio salino per il campionamento del microambiente immunitario nasale canino

Studiamo le risposte immunitarie associate alla radioterapia e ai cani con tumori nasali. Stiamo cercando di capire come possiamo migliorare gli esiti dei pazienti oncologici alla radioterapia modulando il sistema immunitario. I cambiamenti nel microambiente immunitario possono essere importanti nello studio degli effetti del trattamento. Pertanto, è auspicabile l'analisi seriale delle cellule del microambiente. Tuttavia, può essere difficile campionare i tessuti della cavità nasale con biopsie ripetute a causa dell'anatomia complessa e della propensione della mucosa a sanguinare.

La tecnica di lavaggio nasale salino consente il campionamento seriale del microambiente immunitario della cavità nasale con una minima interruzione dei tessuti. Le cellule e le proteine raccolte con la tecnica del lavaggio nasale possono essere analizzate con vari saggi per indagare lo stato del microambiente immunitario nasale nel tempo.

Un giorno prima della procedura, riempire siringhe da 520 millilitri con soluzione fisiologica sterile. Tappare bene le siringhe e metterle in un'incubatrice a 37 gradi Celsius per riscaldarle durante la notte. Quindi posizionare il cane anestetizzato sdraiato esterno sul lettino per trattamenti. Regolare la testa del cane in modo che sia inclinata verso il basso, in modo naturale e confortevole rispetto al bordo del tavolo per facilitare la raccolta ottimale del campione di lavaggio nasale. Gonfiare la cuffia del tubo endotracheale per garantire una tenuta ermetica delle vie aeree. Per il lavaggio nasale, tagliare un catetere sterile di gomma rossa alla base in modo che si adatti perfettamente a una delle siringhe preriempite da 20 millilitri contenenti soluzione salina calda. Utilizzando un pennarello indelebile, segnare l'estremità della base del catetere per indicare il punto di partenza all'ingresso della narice. Verificare che la lunghezza predeterminata si estenda per via intranasale con la punta posizionata nella posizione desiderata. Quindi, tagliare la punta del catetere in modo che corrisponda alla lunghezza definita del catetere intranasale, assicurandosi che atterri nella posizione appropriata all'interno della cavità nasale. Per eseguire la procedura di lavaggio nasale, designare una persona per inserire il catetere nella cavità nasale e somministrarlo, e l'altra persona per raccogliere il campione quando esce dal naso. Posiziona una persona davanti e sotto la testa del cane, indossando i guanti. Guidare delicatamente il catetere di gomma rossa nella parte mediale della cavità nasale fino a quando il segno sul catetere non si allinea con l'ingresso della narice. Contemporaneamente, l'altra persona tiene un tubo conico da 50 millilitri sotto la narice con il catetere in posizione. Usando una mano, occludi delicatamente la narice controlaterale. Inizia a infondere la soluzione salina nella cavità nasale con una pressione lenta e costante o con un'infusione di impulsi mantenendo la testa del cane inclinata verso il basso. Raccogliere il liquido drenante in un tubo conico da 50 millilitri posizionato sotto la narice. Dopo la procedura, consentire al cane di riprendersi dall'anestesia mantenendolo sdraiato all'esterno con la testa rivolta verso il basso. Ora registra il volume totale di liquido di lavaggio nasale raccolto rispetto alla quantità totale di soluzione salina infusa. Per elaborare il campione, agitare delicatamente o pipettare i campioni di lavaggio nasale all'interno dei tubi conici per rompere i grumi di detriti e cellule. Passare i campioni raccolti attraverso un filtro cellulare da 70 micrometri per rimuovere i detriti di grandi dimensioni nel muco. Centrifugare i campioni filtrati a 300 G per cinque-10 minuti per formare un pellet cellulare. Utilizzando una pipetta, aspirare con cura il surnatante dai campioni della centrifuga. Depositare il surnatante in una provetta pulita per la successiva analisi delle proteine. Infine, risospendere i pellet cellulari in PBS o nella soluzione preferita per i saggi cellulari di interesse.