Name: Imaging al microscopio a epifluorescenza time-lapse di fenotipi eterogenei di Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Scopri come visualizzare i fenotipi eterogenei di Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus tramite microscopia a epifluorescenza time-lapse. Questo protocollo permette di studiare le strategie di sopravvivenza delle cellule persister durante i trattamenti antibiotici.

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<meta charset="utf8"></head><body>Visualizzazione della persistenza degli antibiotici nei patogeni batterici

<ol><li>Brauner, A., Fridman, O., Gefen, O., Balaban, N. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+resistance%2C+tolerance+and+persistence+to+antibiotic+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between resistance, tolerance and persistence to antibiotic treatment.</a> Nat Rev Microbiol. 14, 320-330 (2016).</li>
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<li>Verstraete, L., Van den Bergh, B., Verstraeten, N., Michiels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecology+and+evolution+of+antibiotic+persistence%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Ecology and evolution of antibiotic persistence.</a> Trends Microbiol. 30 (5), 466-479 (2021).</li>
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<li>Mempin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Release+of+extracellular+ATP+by+bacteria+during+growth%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Release of extracellular ATP by bacteria during growth.</a> BMC Microbiol. 13, 301(2013).</li>
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<li>Hare, P. J., Gonzalez, J. R., Quelle, R. M., Wu, Y. I., Mok, W. W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+and+transcriptional+activities+underlie+stationary-phase+Pseudomonas+aeruginosa+sensitivity+to+levofloxacin%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Metabolic and transcriptional activities underlie stationary-phase Pseudomonas aeruginosa sensitivity to levofloxacin.</a> Microbiol Spectr. 12 (1), e0356723(2024).</li>
<li>Young, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+single-cell+gene+expression+dynamics+in+bacteria+using+fluorescence+time-lapse+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measuring single-cell gene expression dynamics in bacteria using fluorescence time-lapse microscopy.</a> Nat Protoc. 7 (1), 80-88 (2011).</li>
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<li>Power, A. D., Mok, W. W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agar+and+agarose+used+for+Staphylococcus+aureus+biofilm+cultivation+impact+fluoroquinolone+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Agar and agarose used for Staphylococcus aureus biofilm cultivation impact fluoroquinolone tolerance.</a> J Appl Microbiol. 135 (8), lxae191(2024).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Peng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+BaSiC+tool+for+background+and+shading+correction+of+optical+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A BaSiC tool for background and shading correction of optical microscopy images.</a> Nat Commun. 8, 14836(2017).</li>
<li>Ducret, A., Quardokus, E., Brun, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicrobeJ%2C+a+tool+for+high+throughput+bacterial+cell+detection+and+quantitative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">MicrobeJ, a tool for high throughput bacterial cell detection and quantitative analysis.</a> Nat Microbiol. 1 (7), 16077(2016).</li>
<li>Paintdakhi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oufti%3A+an+integrated+software+package+for+high-accuracy%2C+high-throughput+quantitative+microscopy+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Oufti: an integrated software package for high-accuracy, high-throughput quantitative microscopy analysis.</a> Mol Microbiol. 99 (4), 767-777 (2016).</li>
<li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+growth+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Robust growth of Escherichia coli.</a> Curr Biol. 20 (12), 1099-1103 (2010).</li>
<li>Moffitt, J. R., Lee, J. B., Cluzel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+single-cell+chemostat%3A+an+agarose-based%2C+microfluidic+device+for+high-throughput%2C+single-cell+studies+of+bacteria+and+bacterial+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">The single-cell chemostat: an agarose-based, microfluidic device for high-throughput, single-cell studies of bacteria and bacterial communities.</a> Lab Chip. 12 (8), 1487-1494 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>BaSiC</td><td>GitHub</td><td>https://github.com/marrlab/BaSiC</td><td></td></tr><tr><td>Biologia molecolare certificata Agarosio</td><td>Biorad</td><td>1613101</td><td></td></tr><tr><td>Fiji-ImageJ</td><td>NIH</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di copertura intercambiabile</td><td>Bioptechs</td><td>190310-35</td><td>ICD da 35 mm per la preparazione di tamponi di agarosio; viene fornito con vetrini coprioggetti da</td></tr> <tr><td>30 mm (#1,5)Lumencor Spectra 7 Motore di illuminazione a LED</td><td>Lumencor</td><td>https://lumencor.com/products/spectra-light-engine</td><td>Spectra 7 Motore di illuminazione a LED</td></tr><tr><td>MetaMorph</td><td>Molecular Devices</td><td>Versione Premier 7.10.5</td> pco.edge <td></td></tr><tr><td>4.2 bi sCMOS camera</td><td>Excelitas</td><td>https://www.excelitas.com/product/pcoedge-42-bi-usb-scmos-camera</td><td>fotocamera sCMOS</td></tr><tr><td>PeCon camera di incubazione per cellule vive</td><td>peCon</td><td>https://www.pecon.biz/</td><td></td></tr> <tr><td>Thomas Scientific Vetro di copertura rotondo, spessore #1,5, 25 mm, confezione da 100</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1272770</td><td>vetrini coprioggetti da 25 mm (#1,5)</td></tr><tr><td>Microscopio Zeiss Axiovert 200M</td><td>Zeiss</td><td>https://www.zeiss.com/microscopy/en/products/light-microscopes/widefield-microscopes/axiovert-for-materials.html</td><td>Microscopio invertito con obiettivo Plan-Apochromat 63x/1.40 Oil Ph3 M27, motore di luce LED Lumencor Spectra 7 e fotocamera pco.edge 4.2 bi sCMOS (dimensione pixel 6,5 mm)</td></tr></tbody></table>

imaging al microscopio a epifluorescenza time-lapse di fenotipi eterogenei di pseudomonas aeruginosa e staphylococcus aureus

Time-Lapse Epifluorescence Microscopy Imaging of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Heterogeneous Phenotypes

Il successo dell'introduzione di plasmidi reporter in P. aeruginosa e S. aureus è indicato dalla crescita con gli antibiotici selettivi corretti e può essere confermato dalla PCR delle colonie e/o dal sequenziamento. I ceppi modificati devono essere verificati come reporter fenotipici sottoponendoli a condizioni in cui è noto che il gene di interesse è indotto e la fluorescenza risultante può essere misurata mediante citometria a flusso, spettrofotometria o microscopia a epifluorescenza (Figura 1).
Per facilitare la selezione di una o più dosi di antibiotico che verranno utilizzate per esperimenti successivi, eseguire saggi di persistenza antibiotica concentrazione-dipendenti per i ceppi di P. aeruginosa o S. aureus di interesse. I saggi concentrazione-dipendenti in genere determinano una curva bifasica con una pendenza iniziale ripida a concentrazioni di antibiotici più basse e una pendenza plateau o meno ripida a concentrazioni più elevate. Tuttavia, per alcune coppie antibiotico-specie, potrebbe non risultare una curva bifasica distinta. Ad esempio, la curva per S. aureus delafloxacina è chiaramente bifasica (Figura 3A), ma la curva della levofloxacina di P. aeruginosa non lo è (Figura 3B)15. In questo scenario, sceglieremmo una concentrazione che sia almeno 10 volte la MIC (ad esempio, 5 μg/mL, che è circa 15 volte la MIC per P. aeruginosa)15. Tuttavia, poiché la MIC 15x levofloxacina produce solo ~0,001% di sopravvissuti a P. aeruginosa , utilizziamo il trattamento con levofloxacina da 1 μg/mL se vogliamo vedere i persistenti durante l'imaging delle cellule mentre si riprendono su cuscinetti di agarosio privi di antibiotici (Video supplementare 6); In caso contrario, il numero di campi visivi necessari per visualizzare più persister diventa proibitivo.
All'inizio dell'imaging, il campione ideale e la preparazione del tampone di agarosio devono apparire planari in tutto il campo visivo, privi di detriti di grandi dimensioni, rughe o bolle d'aria e con singole cellule distribuite uniformemente. L'ottenimento di singole cellule ben distribuite può richiedere l'ottimizzazione della diluizione o della risospensione del campione. Per S. aureus, le cellule tendono a formare piccoli grappoli e devono essere vorticate accuratamente prima di essere seminate nel cuscinetto di agarosio (Figura 4 e Figura 5). Per P. aeruginosa, le cellule possono formare aggregati racchiusi in una matrice extracellulare appiccicosa in sospensione; È necessario pipettare accuratamente questi campioni e interrompere gli aggregati per l'imaging di singole cellule. 
Dopo la conclusione di un esperimento di imaging, un time-lapse di successo delle immagini apparirà a fuoco, illuminato in modo stabile e con una deriva minima nel piano x-y durante l'esperimento. Il Video supplementare 7 rappresenta un'acquisizione ottimale dell'immagine: t è il canale di fase del Video supplementare 4 prima della correzione dell'ombra o della deriva. La perdita di messa a fuoco può verificarsi se la condensa (dovuta a un'eccessiva umidificazione o a un riscaldamento insufficiente del campione) provoca la formazione di goccioline d'acqua sul vetrino coprioggetto superiore da 25 mm, distorcendo la luce e spingendo il piano focale al di fuori del campo di ricerca massimo dell'algoritmo di messa a fuoco automatica (Video supplementare 8). La variazione dell'illuminazione di solito indica una quantità insufficiente di olio da immersione al momento dell'imaging. Se il tavolino si muove troppo velocemente, l'olio sull'obiettivo potrebbe trascinarsi dietro e continuare a recuperare terreno quando le immagini vengono acquisite. Questo può essere mitigato regolando i controlli di acquisizione per rallentare la velocità di movimento o aggiungendo una pausa tra il movimento alla posizione successiva e l'acquisizione dell'immagine. La deriva del campione principale sarà simile a molte cellule che attraversano il campo visivo, mentre alcune rimangono al loro posto (Video supplementare 9). Questo si verifica in genere più tardi negli esperimenti perché il tampone di agarosio si è disidratato a causa di un controllo dell'umidità insufficiente. La preparazione del tampone di agarosio presentata in questo articolo è stata progettata per facilitare la stabilità del campione, ma per un'acquisizione ottimale dell'immagine è necessario riscaldare/umidificare adeguatamente il campione e l'ambiente circostante.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67617/67617fig1.jpg"> 
Figura 1: I ceppi reporter fluorescenti illuminano l'espressione di un gene di interesse. (A) S. aureus è stato trasdotto con un reporter trascrizionale GFP per un gene di interesse per il Protocollo 1. Il ceppo reporter è stato trattato per 24 ore con antibiotico, lavato con PBS e quindi seminato su un tampone di agarosio a base di CA-MHB più ioduro di propidio (1,6 μM) e cloramfenicolo (10 μg/mL per il mantenimento del plasmide reporter) per l'imaging durante il recupero (Video supplementare 1). (B) P. aeruginosa è stato trasformato con un plasmide contenente un reporter traslazionale legato a mScarlet per una proteina di interesse26. Il ceppo reporter è stato trattato per 5 ore con antibiotico, lavato con PBS e quindi seminato su un tampone di agarosio a base di BSM più Tet (75 μg/mL; per il mantenimento del plasmide reporter) per l'imaging durante il recupero (Video supplementare 2). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/67617fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67617/67617fig2.jpg"> 
Figura 2: Propagazione e raccolta dei batteriofagi. (A) Le sei tavole mostrano sei diverse quantità di stock di fagi diluiti sui prati di S. aureus RN4220. I contorni rossi indicano le tre piastre che verrebbero prelevate, dalla piastra con la maggiore chiarifica (contorno rosso in grassetto; 1 x109 PFU/mL) alle due diluizioni successive (1 x108 e 1 x 107 PFU/mL). Le frecce nere indicano le singole placche. (B) Per raccogliere il fago dalle piastre, raschiare lo strato di agar morbido (a sinistra), trasferire l'impasto alla successiva piastra di diluizione (al centro) e, dopo aver raccolto l'agar morbido da tutte e tre le piastre, unire in una provetta conica per la centrifugazione (a destra). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/67617fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67617/67617fig3.jpg"> 
Figura 3: Saggi rappresentativi di persistenza concentrazione-dipendente. La persistenza dei fluorochinoloni concentrazione-dipendente è stata valutata in fase stazionaria (A) S. aureus (contro delafloxacina) e (B) P. aeruginosa (contro levofloxacina). Gli esperimenti successivi utilizzano 5 μg/mL di delafloxacina (cerchio rosso) perché l'uccisione di S. aureus si era stabilizzata a questa concentrazione. Un dosaggio di almeno 1 μg/mL di levofloxacina (cerchio rosso) sarebbe stato utilizzato per i successivi esperimenti con P. aeruginosa. Si noti che l'abbattimento batterico non si stabilizza per P. aeruginosa, ma c'è ancora una "seconda fase" meno ripida della curva bifasica che indica una sottopopolazione persistente. Il pannello 3B è stato adattato con il permesso di Hare et al.15. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/67617fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67617/67617fig4.jpg"> 
Figura 4: Imaging dei fenotipi batterici durante il trattamento antibiotico. Le cellule in fase stazionaria (A) di S. aureus e (B) di P. aeruginosa sono state seminate su tamponi di agarosio contenenti antibiotici fluorochinolonici e monitorate durante il trattamento: 5 μg/mL di delafloxacina per S. aureus (Video supplementare 3) e 5 μg/mL di levofloxacina per P. aeruginosa (Video supplementare 4)15. Lo ioduro di propidio (PI; 16 μM per P. aeruginosa, 1,6 μM per S. aureus) è stato aggiunto ai cuscinetti per contrassegnare le cellule morte o morenti. Le cellule di S. aureus rimangono in gran parte intatte e vive in presenza di FQ, mentre la maggior parte delle cellule di P. aeruginosa subisce drastici cambiamenti morfologici, inclusa la formazione di sferoplasti rotondi, prima di lisi e morire. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/67617fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67617/67617fig5.jpg"> 
Figura 5: Monitoraggio dei persistenti durante il recupero. (A) Le popolazioni di S. aureus e (B) P. aeruginosa sono state seminate su tamponi di agarosio contenenti terreni freschi dopo essere state trattate con fluorochinoloni (5 μg/mL di delafloxacina per S. aureus e 1 μg/mL di levofloxacina per P. aeruginosa) e monitorate durante il loro recupero post-trattamento (Video supplementare 5 e Video supplementare 6). I perisori osservati sono indicati con frecce verdi nei primi due fotogrammi di ciascun pannello e sono rimasti intatti e vitali durante il trattamento antibiotico. Dopo un iniziale periodo di ritardo, i persister hanno iniziato a dividersi e hanno dato origine a una nuova progenie (indicata con cerchi verdi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/67617fig5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67617/67617fig6.jpg"> 
Figura 6: Preparazione del campione al microscopio. (A) Schema del flusso di lavoro di preparazione del campione utilizzando un coprioggetto intercambiabile ("camera"). (B) Immagine della camera smontata e dei suoi singoli componenti. (C) Immagine della camera completamente assemblata. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/67617fig6large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Video supplementare 1: S. aureus persister. File video contenente le immagini nella Figura 1A. In breve, S. aureus che portava un reporter trascrizionale GFP per un gene di interesse è stato trattato per 24 ore con antibiotico, lavato con PBS, quindi seminato su un tampone di agarosio a base di CA-MHB più ioduro di propidio (1,6 μM) e cloramfenicolo (10 μg/mL) per l'imaging durante il recupero. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS1_S-aureus_persister_video.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 2: P. aeruginosa persister. File video contenente immagini nella Figura 1B. In breve, P. aeruginosa contenente un reporter traslazionale legato a mScarlet per una proteina di interesse è stato trattato per 5 ore con antibiotico, lavato con PBS, quindi seminato su un tampone di agarosio realizzato con BSM più Tet (75 μg/mL) per l'imaging durante il recupero26. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS2_Paeru-fluorescent-persister.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 3: S. aureus durante il trattamento antibiotico. Una coltura in fase stazionaria di S. aureus coltivata in terreni ricchi chimicamente definiti è stata seminata in tamponi di agarosio realizzati con terreni condizionati privi di cellule della coltura con ioduro di propidio (1,6 μM) e delafloxacina (5 μg/mL). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS3_S-aureus_treatment.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 4: P. aeruginosa durante il trattamento antibiotico. Una coltura in fase stazionaria di P. aeruginosa coltivata in BSM è stata seminata in cuscinetti di agarosio realizzati con terreni condizionati privi di cellule da una coltura di P. aeruginosa coltivata in BSM in parallelo; il tampone di agarosio conteneva anche ioduro di propidio (16 μM) e levofloxacina (5 μg/mL). Questo video è stato adattato con il permesso di Hare et al.15. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS4_P-aeruginosa_treatment.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 5: S. aureus durante il recupero post-antibiotico. S. aureus è stato coltivato fino alla fase stazionaria in terreni ricchi chimicamente definiti. Le colture in fase stazionaria sono state trattate con 5 μg/mL di delafloxacina in provette per 24 ore, lavate con PBS e quindi seminate in tamponi di agarosio CA-MHB privi di antibiotici contenenti ioduro di propidio (1,6 μM) per l'imaging. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS5_S-aureus_recovery.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 6: P. aeruginosa durante il recupero post-antibiotico. Una coltura in fase stazionaria di P. aeruginosa coltivata in BSM è stata trattata con 1 μg/mL di levofloxacina in provetta per 7 ore, lavata con PBS, quindi seminata in tamponi di agarosio BSM privi di antibiotici contenenti ioduro di propidio (16 μM) per l'imaging. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS6_P-aeruginosa_recovery.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 7: Esempio di acquisizione ottimale delle immagini. Questo video è il canale di fase del Video supplementare 4 prima dell'elaborazione delle immagini come esempio di un'acquisizione time-lapse ottimale. Si noti la deriva minima, l'illuminazione stabile e il mantenimento della messa a fuoco durante l'esperimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS7_uncorrected-Paeru.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 8: Esempio di acquisizione di immagini non ottimale a causa della condensa. Questo video mostra parte di un esperimento in cui l'acquisizione dell'immagine è stata influenzata da una scarsa messa a fuoco, probabilmente a causa della condensa sulla camera dovuta a un riscaldamento improprio del campione e/o all'eccessiva umidificazione dell'ambiente di imaging. Il campione oggetto di imaging era P. aeruginosa trattato con levofloxacina durante il recupero post-antibiotico su un tampone di agarosio BSM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS8_Suboptimal_Imaging_Condensation.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video supplementare 9: Esempio di acquisizione di immagini non ottimale a causa di una deriva. Questo video mostra parte di un esperimento in cui l'acquisizione dell'immagine è stata influenzata dalla deriva del campione, probabilmente a causa della disidratazione e del restringimento/sollevamento del tampone di agarosio dal vetrino coprioggetti. Il campione oggetto dell'imaging era P. aeruginosa su un tampone di agarosio contenente levofloxacina e ioduro di propidio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/VideoS9_Suboptimal_Drift.avi" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
File supplementare 1: 25mm-3D-divider-for-35mmBioptechs.stl <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67617/25mm-3D-divider-for-35mmBioptechs.stl" target="_blank">Fare clic qui per scaricare questo file.</a>

Imaging al microscopio a epifluorescenza time-lapse di fenotipi eterogenei di Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus

Antibiotic persistence is a phenomenon in which a small number of bacterial cells in a genetically susceptible population survive antibiotic treatment ...

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