Name: Valutazione della fagocitosi microgliale dei detriti mielinici in vitro sotto stimolazione magnetica ripetuta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Scopri come la stimolazione magnetica ripetuta modula la fagocitosi dei detriti mielinici da parte delle microglia in un modello in vitro con cellule BV-2. Questo metodo offre nuove prospettive per la neuro-riabilitazione.

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<ol><li>Osso, L. A., Hughes, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+mature+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dynamics of mature myelin.</a> Nat Neurosci. 27 (8), 1449-1461 (2024).</li>
<li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+debris+phagocytosis+in+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Myelin debris phagocytosis in demyelinating disease.</a> Glia. 72 (11), 1934-1954 (2024).</li>
<li>Kopper, T. J., Gensel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+as+an+inflammatory+mediator%3A+Myelin+interactions+with+complement%2C+macrophages%2C+and+microglia+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Myelin as an inflammatory mediator: Myelin interactions with complement, macrophages, and microglia in spinal cord injury.</a> J Neurosci Res. 96 (6), 969-977 (2018).</li>
<li>Yu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+microglia+and+macrophages+in+brain+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Phagocytic microglia and macrophages in brain injury and repair.</a> CNS Neurosci Ther. 28 (9), 1279-1293 (2022).</li>
<li>Filbin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin-associated+inhibitors+of+axonal+regeneration+in+the+adult+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Myelin-associated inhibitors of axonal regeneration in the adult mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (9), 703-713 (2003).</li>
<li>Sen, M. K., Mahns, D. A., Coorssen, J. R., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+microglia+and+astrocytes+in+phagocytosis+and+myelination%3A+Insights+from+the+cuprizone+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The roles of microglia and astrocytes in phagocytosis and myelination: Insights from the cuprizone model of multiple sclerosis.</a> Glia. 70 (7), 1215-1250 (2022).</li>
<li>Jia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microglial+phagocytosis+in+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of microglial phagocytosis in ischemic stroke.</a> Front Immunol. 12, 790201(2021).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+nanovesicle+protects+against+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+through+enhancing+myelin+clearance+by+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Neutrophil nanovesicle protects against experimental autoimmune encephalomyelitis through enhancing myelin clearance by microglia.</a> ACS. 16 (11), 18886-18897 (2022).</li>
<li>Cignarella, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM2+activation+on+microglia+promotes+myelin+debris+clearance+and+remyelination+in+a+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">TREM2 activation on microglia promotes myelin debris clearance and remyelination in a model of multiple sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 140 (4), 513-534 (2020).</li>
<li>Dufor, T., Lohof, A. M., Sherrard, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+stimulation+as+a+therapeutic+approach+for+brain+modulation+and+repair%3A+Underlying+molecular+and+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Magnetic stimulation as a therapeutic approach for brain modulation and repair: Underlying molecular and cellular mechanisms.</a> Int J Mol Sci. 24 (22), 16456(2023).</li>
<li>Martin, D. M., McClintock, S. M., Forster, J. J., Lo, T. Y., Loo, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+enhancing+effects+of+rTMS+administered+to+the+prefrontal+cortex+in+patients+with+depression%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+individual+task+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Depress+Anxiety%22%5BJournal%5D)">Cognitive enhancing effects of rTMS administered to the prefrontal cortex in patients with depression: A systematic review and meta-analysis of individual task effects.</a> Depress Anxiety. 34 (11), 1029-1039 (2017).</li>
<li>Kamo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+peripheral+magnetic+stimulation+for+impairment+and+disability+in+people+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Repetitive peripheral magnetic stimulation for impairment and disability in people after stroke.</a> Cochrane Database Syst Rev. 9 (9), CD011968(2022).</li>
<li>Wang, Y., Wang, L., Ni, X., Jiang, M., Zhao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+with+different+application+parameters+for+post-stroke+cognitive+impairment%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Fron+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Efficacy of repetitive transcranial magnetic stimulation with different application parameters for post-stroke cognitive impairment: A systematic review.</a> Fron Neurosci. 18, 1309736(2024).</li>
<li>Chu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+magneto-acoustic+stimulation+attenuates+synaptic+plasticity+impairment+through+the+activation+of+Piezo1+in+alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Research%22%5BJournal%5D)">Transcranial magneto-acoustic stimulation attenuates synaptic plasticity impairment through the activation of Piezo1 in alzheimer's disease mouse model.</a> Research. 6, 0130(2023).</li>
<li>Zhai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+trans-spinal+magnetic+stimulation+promotes+microglial+phagocytosis+of+myelin+debris+after+spinal+cord+injury+through+LRP-1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Repeated trans-spinal magnetic stimulation promotes microglial phagocytosis of myelin debris after spinal cord injury through LRP-1.</a> Exp Neurol. 379, 114844(2024).</li>
<li>Qin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+ameliorates+cognitive+deficits+in+mice+with+radiation-induced+brain+injury+by+attenuating+microglial+pyroptosis+and+promoting+neurogenesis+via+BDNF+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Comm+Signal%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation ameliorates cognitive deficits in mice with radiation-induced brain injury by attenuating microglial pyroptosis and promoting neurogenesis via BDNF pathway.</a> Cell Comm Signal. 22 (1), 216(2024).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+astrocytes+responses+contribute+to+alleviating+inflammatory+damage+by+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+in+rats+with+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia and astrocytes responses contribute to alleviating inflammatory damage by repetitive transcranial magnetic stimulation in rats with traumatic brain injury.</a> Neurochem Res. 49 (9), 2636-2651 (2024).</li>
<li>Luo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+improves+neurological+function+and+promotes+the+anti-inflammatory+polarization+of+microglia+in+ischemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation improves neurological function and promotes the anti-inflammatory polarization of microglia in ischemic rats.</a> Front Cell Neurosci. 16, 878345(2022).</li>
<li>Jannati, A., Oberman, L. M., Rotenberg, A., Pascual-Leone, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+mechanisms+of+brain+plasticity+by+transcranial+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Assessing the mechanisms of brain plasticity by transcranial magnetic stimulation.</a> Neuropsychopharmacol. 48 (1), 191-208 (2023).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+theta-burst+stimulation+improves+motor+function+by+inhibiting+neuronal+pyroptosis+and+regulating+microglial+polarization+via+TLR4%2FNF%CE%BAB%2FNLRP3+signaling+pathway+in+cerebral+ischemic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammat%22%5BJournal%5D)">Intermittent theta-burst stimulation improves motor function by inhibiting neuronal pyroptosis and regulating microglial polarization via TLR4/NFκB/NLRP3 signaling pathway in cerebral ischemic mice.</a> J Neuroinflammat. 19 (1), 141(2022).</li>
<li>Eichler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cytokines+mediate+plasticity+induced+by+10+Hz+repetitive+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cytokines mediate plasticity induced by 10 Hz repetitive magnetic stimulation.</a> J Neurosci. 43 (17), 3042-3060 (2023).</li>
<li>Kent, S. A., Miron, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+regulation+of+central+nervous+system+myelin+health+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia regulation of central nervous system myelin health and regeneration.</a> Nat Rev Immunol. 24 (1), 49-63 (2024).</li>
<li>Yong, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+multiple+sclerosis%3A+Protectors+turn+destroyers%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia in multiple sclerosis: Protectors turn destroyers.</a> Neuron. 110 (21), 3534-3548 (2022).</li>
<li>Sarlus, H., Heneka, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Microglia in Alzheimer's disease.</a> J Clin Invest. 127 (9), 3240-3249 (2017).</li>
<li>Cantuti-Castelvetri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+cholesterol+clearance+limits+remyelination+in+the+aged+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defective cholesterol clearance limits remyelination in the aged central nervous system.</a> Science. 359 (6376), 684-688 (2018).</li>
<li>Norton, W. T., Poduslo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+in+rat+brain%3A+Method+of+myelin+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Myelination in rat brain: Method of myelin isolation.</a> J Neurochem. 21 (4), 749-757 (1973).</li>
<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+An+immunobiologic+process%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: An immunobiologic process.</a> Immunity. 44 (3), 463-475 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Terreno di montaggio antisbiadimento con DAPI</td><td>Beyotime, Cina</td><td>Kit BCA P0131</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher Scientific, America</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Celle Bv-2 ATCC</td><td></td><td>CBP60922</td><td></td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari a 12 pozzetti</td><td>Biofil, Cina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari a 24 pozzetti</td><td>Biofil, Cina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scansione laser confocale Microscopio</td><td>Zeiss, Germania</td><td>800</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore a temperatura costante</td><td>ThermoFisher Scientific, America</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CFSE</td><td>MedChemExpress, America</td><td>HY-158820</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-Terreno di coltura</td><td>KeyGen, Cina</td><td>KGL1202-500</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco, America</td><td>16250078</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Abcam, America</td><td>ab48004</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchio di stimolazione magnetica</td><td>Yiruide, Cina</td><td>CCY-IA</td><td></td></tr><tr><td>Bobina di stimolazione magnetica</td><td>Yiruide, Cina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>BioSharp, Cina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>KeyGen, Cina</td><td>KGL2210-500</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Gibco, America</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>MedChemExpress, America</td><td>HY-B1779</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>KeyGen, Cina</td><td>KGL2107-100</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuga</td><td>Beckman, America</td><td>L-100XP</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione della fagocitosi microgliale dei detriti mielinici in vitro sotto stimolazione magnetica ripetuta

Assessing Microglial Phagocytosis of Myelin Debris in vitro Under Repeated Magnetic Stimulation

In questo studio, abbiamo inizialmente alimentato cellule microgliali BV-2 in vitro estraendo detriti di mielina derivati dal cervello e utilizzando la stimolazione magnetica ripetitiva per migliorare la loro capacità fagocitica. Successivamente, le cellule della microglia BV-2 sono state coltivate e sottoposte all'intervento di LPS prima della stimolazione magnetica, emulando così lo stato in vivo della microglia sotto rigorosa convalida neurologica. Successivamente, l'intervento rMS è stato applicato ...

Valutazione della fagocitosi microgliale dei detriti mielinici in vitro sotto stimolazione magnetica ripetuta

Microglia, the resident phagocytes of the central nervous system (CNS), play a pivotal role in maintaining CNS integrity and homeostasis by removing ...

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Microglia risiedono macrofagi che forniscono la prima linea di difesa e sorveglianza immunitaria del sistema nervoso centrale. I microRNA sono molecole regolatrici che svolgono un ruolo importante in molti processi fisiologici tra cui l'attivazione e la differenziazione dei macrofagi. In questo articolo, si descrive il metodo per la misurazione dei microRNA in cellule microgliali.

Rilevamento dei microRNA nella microglia da Real-time PCR in CNS normale e durante neuroinfiammazione

Questo video mostra un protocollo per estrarre cellule microgliali da lesioni demielinizzanti nel cervello di topo utilizzando la selezione magnetica delle cellule. Il protocollo prevede la sezionazione del tessuto cerebrale lesionato contenente cellule microgliali, il trattamento del tessuto con enzimi specifici per ottenere una sospensione di una singola cellula e l'utilizzo di microsfere magnetiche specifiche del recettore microgliale per isolare le cellule microgliali.

Isolamento della microglia da lesioni demielinizzanti del cervello di topo mediante smistamento cellulare attivato magneticamente

Microglia sono le cellule immunitarie residenti del sistema nervoso centrale (CNS) con una elevata capacità di fagocitare o fagocitare materiale nel loro ambiente extracellulare. Qui, un saggio largamente applicabile, affidabile e altamente quantitativa per la visualizzazione e la misurazione microglia-mediata fagocitazione dei componenti sinaptiche è descritto.

Un test Engulfment: un protocollo per valutare le interazioni tra sistema nervoso centrale fagociti e neuroni

fagocitosi microglia è fondamentale per il mantenimento della omeostasi tissutale e fagocitaria inadeguata è stato implicato nella patologia. Tuttavia, valutare la funzione microglia in vivo è tecnicamente impegnativo. Abbiamo sviluppato una tecnica semplice ma robusto per monitorare e quantificare il potenziale di fagocitosi microglia in un ambiente fisiologico preciso.

La valutazione della retina microglia fagocitaria Funzione<em&gt; In Vivo</em&gt; Usando un test citometria a flusso basato su

Qui, vi presentiamo un protocollo per isolare microglia da cuccioli di topo postnatale (giorno 1) per la sperimentazione in vitro. Questo metodo improvvisato di isolamento genera sia elevata resa e purezza, un vantaggio significativo rispetto ai metodi alternativi che consente un'ampia gamma sperimentazione ai fini di chiarire biologia microglia.

Rapid e raffinato CD11b isolamento magnetico di primaria microglia con purezza migliorata e versatilità

Vi presentiamo metodi per valutare la capacità fagocitica di primari macrofagi murini derivate da midollo osseo, utilizzando residui del myelin fluorescente contrassegnati e lipido intracellulare gocciolina macchiatura.

In Vitro Fagocitosi di residui del Myelin dai macrofagi derivate da midollo osseo

Le malattie neurodegenerative sono associate a funzioni microglia disregolate. Questo articolo delinea un test in vitro della fagocitosi delle cellule di neuroblastoma da parte dei macrofagi iPSC. Le lettura quantitative al microscopio sono descritte sia per l'imaging time-lapse a cellule vive che per l'imaging ad alto contenuto a cellule fisse.

Test di imaging quantitativo in vitro per la fagocitosi delle cellule morte del neuroblastoma da parte di iPSC-Macrophages

Le colture primarie di microglia sono comunemente utilizzate per valutare nuove molecole anti-infiammatorie. Il presente protocollo descrive un metodo riproducibile e rilevante per isolare magneticamente la microglia dai cuccioli neonati.

Isolamento magnetico di cellule microgliali da topo neonato per colture cellulari primarie

Qui, presentiamo un protocollo per isolare e purificare la microglia primaria in modelli animali di malattie demielinizzanti, utilizzando lo smistamento cellulare magnetico-attivato colonnare.

Isolamento di microglia primarie di topo mediante smistamento cellulare ad attivazione magnetica in modelli animali di demielinizzazione

Qui presentiamo due protocolli per quantificare l'inghiottimento microgliale delle sinapsi vGLUT1-positive e dei sinaptosomi grezzi marcati con pHRodo Red utilizzando la citometria a flusso.

Quantificazione dell'inghiottimento microgliale di materiale sinaptico mediante citometria a flusso

Descriviamo un protocollo per isolare le cellule microgliali dall'ipotalamo del topo (o piccole strutture cerebrali equivalenti) utilizzando il cell sorting attivato magneticamente (MACS), in un tempo relativamente breve. La microglia ipotalamica selezionata con MACS può essere utilizzata per analisi ex vivo e può essere piastrata per eseguire saggi in vitro .

Isolamento della microglia ipotalamica dal cervello di topo adulto appena perfuso mediante smistamento cellulare attivato magneticamente  

Scopri come la stimolazione magnetica ripetuta modula la fagocitosi dei detriti mielinici da parte delle microglia in un modello in vitro con cellule BV-2. Questo metodo offre nuove prospettive per la neuro-riabilitazione.

Valutazione della fagocitosi microgliale dei detriti mielinici in vitro sotto stimolazione magnetica ripetuta

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