Name: Criosezione e immunocolorazione del tessuto dellorecchio interno del topo: dagli stadi embrionali a quelli adulti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Impara la criosezione e l'immunocolorazione del tessuto dell'orecchio interno del topo per studiare lo sviluppo cocleare. Questo metodo preserva le strutture cellulari e garantisce risultati affidabili nella ricerca uditiva.

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<li>Shoham, N., Lewis, G., Favarato, G., Cooper, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+anxiety+disorders+and+symptoms+in+people+with+hearing+impairment%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Soc+Psychiatry+Psychiatr+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of anxiety disorders and symptoms in people with hearing impairment: a systematic review.</a> Soc Psychiatry Psychiatr Epidemiol. 54 (6), 649-660 (2019).</li>
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<li>Goodyear, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+age-related+degradation+of+the+tectorial+membrane+in+the+Ceacam16%CE%B2gal%2F%CE%B2gal+null+mutant+mouse%2C+a+model+for+late-onset+human+hereditary+deafness+DFNB113%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Accelerated age-related degradation of the tectorial membrane in the Ceacam16βgal/βgal null mutant mouse, a model for late-onset human hereditary deafness DFNB113.</a> Front Mol Neurosci. 12, 147(2019).</li>
<li>Zupančič, D., Terčelj, M., Štrus, B., Veranič, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+obtain+good+morphology+and+antigen+detection+in+the+same+tissue+section%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">How to obtain good morphology and antigen detection in the same tissue section.</a> Protoplasma. 254 (5), 1931-1939 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><forte>Chimica</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning, Inc.</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich, LLC.</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>VWR International, Inc.</td><td>97061-432</td><td></td></tr><tr><td>Azazuro di sodio&nbsp;</td><td>Amresco, Inc.</td><td>0639-250G</td><td></td></tr><tr><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>della paraformaldeide</td><td>15714</td><td></td></tr><tr><td>Laboratori di decontaminazione dell'etanolo</td><td>, Inc.</td><td>v1001</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilbutano&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>19387-AP</td><td></td></tr><tr><td>Composto per la temperatura di taglio ottimale (OCT)</td><td>VWR International, Inc.</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Attrezzatura specifica</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>14-071-459</td><td></td></tr><tr><td>Pinze di disezione</td><td>Scienze di microscopia elettronica</td><td>72700-DZ</td><td></td></tr><tr><td>Penna per perossidasi-antiperossidasi con barriera idrofobica (PAP)&nbsp;</td><td>Laboratori vettoriali, Inc.</td>Microscopio confocale <td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Microscopia Carl Zeiss, LLC.</td>Micropipetta <td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>P20</td><td>Gilson, Inc.</td><td></td><td></td>F144056M</tr><tr><td>Forbici da dissezione</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>08-951-20</td><td></td></tr><tr><td>Piatto Sylgard</td><td>Microscopia elettronica Scienze</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Materiali di montaggio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>Microscopia elettronica Scienze</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost più vetrini</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>1255015</td><td></td></tr><tr><td>Immunocoloring Reagenti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Siero d'asino</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Frammenti FAB anti-topo&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>BlokHen</td><td>Aves labs, Inc.</td><td>BH-1001</td><td></td></tr><tr><td>Tuj1 (beta-III-tubulina) anticorpo monoclonale di topo</td><td>Biolegend, Inc.</td><td>MMS-435P</td><td></td></tr><tr><td>Sox2 anticorpo policlonale di capra</td><td>R& D Sistemi, Inc.</td><td>AF2018</td><td></td></tr><tr><td>Myo6 anticorpo policlonale di coniglio</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25&ndash; 6791</td><td></td></tr><tr><td>Myo7A anticorpo policlonale di coniglio</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>PA1-936</td><td></td></tr><tr><td>Plexin-B1 anticorpo policlonale di capra</td><td>R& D Sistemi, Inc.</td><td>AF3749</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpi secondari (prodotti nell'asino; Alexa-488, Cy3, Cy5)</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>vedi catalogo</td><td></td></tr></tbody></table>

criosezione e immunocolorazione del tessuto dell'orecchio interno del topo: dagli stadi embrionali a quelli adulti

Cryosectioning and Immunostaining Mouse Inner Ear Tissue: From Embryonic to Adult Stages

Presentiamo esempi dal nostro laboratorio dell'apice e del giro basale di una coclea di topo embrionale del giorno 16,5 (E16,5) e del giro basale dal giorno postnatale 0 (P0) e delle coclee P30. Questi campioni sono stati sezionati e immunocolorati utilizzando marcatori per cellule ciliate (Myo7A e Myo6), neuroni gangliari spirali (SGN; Tuj1), glia e cellule di supporto (Sox2) e Plexin-B1, che etichetta la membrana basale attorno al dotto cocleare e agli SGN. Le sezioni trasversali della coclea a diversi stadi di svilupp...

Criosezione e immunocolorazione del tessuto dell'orecchio interno del topo: dagli stadi embrionali a quelli adulti

This protocol details general histology methods for preparing inner ear samples from embryonic, neonatal, and adult mice. The purpose of this protocol is ...

cryosectioning-immunostaining-mouse-inner-ear-tissue-from-embryonic

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Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Una semplice procedura di vibratome sezionamento dell'organo del Corti, seguito da immunoistochimica e microscopia confocale è descritto. Questa procedura consente una migliore conservazione del bene citoarchitettura dell'organo di Corti dei mammiferi, e permette di conseguenza per la quantificazione precisa dei tipi di cellule.

Vibratome sezionamento per la Conservazione avanzata del citoarchitettura dell&#39;organo di Corti dei mammiferi

Presentiamo un metodo che descrive l'isolamento e la coltura di espianti cocleari dall'orecchio interno di topo embrionale.  Dimostriamo anche un metodo per il trasferimento genico in espianti cocleari tramite elettroporazione a onda quadra. La coltura di espianti in vitro abbinata alla tecnica di trasferimento genico consente ai ricercatori di studiare gli effetti dell'alterazione dell'espressione genica durante lo sviluppo.

Cultura della embrionali di topo cocleari espianti e Gene Transfer con elettroporazione

Vi presentiamo un metodo per isolare l'organo del Corti adulta come tre turni intatte cocleari (apice, il medio e basso). Abbiamo anche dimostrare una procedura per immunocolorazione con anticorpi con tag fluorescenza. Insieme, queste tecniche consentono lo studio di cellule ciliate, cellule di supporto, e altri tipi di cellule trovato nella coclea.

Tutta Monte dissezione e immunofluorescenza del topo adulto Coclea

Presentiamo un protocollo per isolare la bolla uditiva, la capsula e gli ossicini da topi postnatali per l'intera montatura e l'analisi istologica.

La dissezione del Auditory Bulla nei topi postnatale: Isolamento delle ossa dell&#39;orecchio medio e l&#39;analisi istologica

Qui, presentiamo un protocollo dettagliato per rilevare e quantificare i livelli di proteine durante la morfogenesi/patogenesi craniofacciale immunostaining usando come esempi i tessuti craniofacciali dei topi. Inoltre, descriviamo un metodo per la preparazione e la criosezione dei tessuti duri non decalcolati dai giovani topi per l'immunostaining.

Preparazione dei tessuti e immunostaining dei tessuti craniofacciali del topo e dell'osso non decalcolato

Questo manoscritto descrive un protocollo sperimentale per valutare le caratteristiche morfologiche e lo stato funzionale delle sinapsi del nastro nei topi normali. Il modello attuale è adatto anche per modelli con sinaptopatia cocleare indotta dal rumore e legati all'età. Vengono inoltre discussi i risultati correlati dei precedenti studi sul mouse.

Valutazione morfologica e funzionale delle sinapsi del nastro nelle specifiche regioni di frequenza della Coclea del topo

Questo articolo presenta un metodo di preparazione della superficie cocleare modificato che richiede la decalcificazione e l'uso di un adesivo per cellule e tessuti per aderire i pezzi di epitemi cocleari a 10 mm rotondi schede di copertura per l'immunostochimica nelle cocleee di topo adulto.

Preparazione della superficie cocleare nel topo adulto

Questo studio descrive come sezionare il sacco endolinfatico dall'orecchio interno del topo a diverse età. Il risultato di una dissezione simile è mostrato in un modello murino nullo di Slc26a4-null di allargamento del sacco endolinfatico. Un topo transgenico con un reporter fluorescente espresso nel sacco endolinfatico viene presentato come modello per visualizzare prontamente il sacco endolinfatico e strumento educativo.

Dissezione del sacco endolinfatico da topi

Qui, presentiamo un protocollo per un modello murino di perdita dell'udito indotta dal rumore (NIHL). Per indurre NIHL, abbiamo sviluppato un nuovo e semplice dispositivo utilizzando plastica ondulata, una gabbia trappola per topi e un altoparlante. La risposta uditiva del tronco cerebrale e l'imaging immunofluorescenza sono stati impiegati per valutare rispettivamente la funzione uditiva e il danno esterno delle cellule ciliate.

Condizioni sperimentali modificate per la perdita dell'udito indotta dal rumore nei topi e valutazione della funzione uditiva e del danno esterno delle cellule ciliate

La stria vasculare è vitale per la generazione del potenziale endococleare. Qui, presentiamo la dissezione della stria vasculare del topo adulto per il sequenziamento a singolo nucleo o l'immunocolorazione.

Dissezione della stria vascolare del topo adulto per sequenziamento di singoli nuclei o immunocolorazione

Viene descritto un protocollo per la preparazione di criosezioni retiniche di topo e l'esecuzione dell'immunocolorazione sui fotorecettori. Questo articolo consente ai ricercatori di produrre in modo coerente sezioni congelate della retina di topo con morfologia ben conservata e risultati di immunocolorazione di alta qualità.

Criosezione e immunocolorazione della retina del topo

Impara la criosezione e l'immunocolorazione del tessuto dell'orecchio interno del topo per studiare lo sviluppo cocleare. Questo metodo preserva le strutture cellulari e garantisce risultati affidabili nella ricerca uditiva.

Criosezione e immunocolorazione del tessuto dell'orecchio interno del topo: dagli stadi embrionali a quelli adulti

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