Name: Inoculazione intradermica di Mycobacterium avium nellorecchio del topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Scopri l'inoculazione intradermica di Mycobacterium avium nell'orecchio del topo per studiare le risposte immunitarie ai micobatteri non tubercolari. Questo modello in vivo consente di analizzare l'infezione contenuta e la persistenza batterica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
<li>Baldwin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complexities+and+challenges+of+preventing+and+treating+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">The complexities and challenges of preventing and treating nontuberculous mycobacterial diseases.</a> PLoS Negl Trop Dis. 13 (2), p. e0007083(2019).</li>
<li>Falkinham, J. O. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+nontuberculous+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of nontuberculous mycobacteria.</a> Clin Chest Med. 36 (1), 35-41 (2015).</li>
<li>Honda, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+and+transmission+of+nontuberculous+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental sources and transmission of nontuberculous mycobacteria.</a> Clin Chest Med. 44 (4), 661-674 (2023).</li>
<li>Pfaller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+revisited%3A+Mycobacterium+avium+and+Mycobacterium+intracellulare+in+potable+water+in+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Occurrence revisited: Mycobacterium avium and Mycobacterium intracellulare in potable water in the USA.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 106 (7), 2715-2727 (2022).</li>
<li>Mercaldo, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+risk+of+nontuberculous+mycobacterial+infection%3A+Strategies+for+advancing+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Environmental risk of nontuberculous mycobacterial infection: Strategies for advancing methodology.</a> Tuberculosis (Edinb). 139, 102305(2023).</li>
<li>Marshall, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nontuberculous+mycobacteria+testing+and+culture+positivity+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Nontuberculous mycobacteria testing and culture positivity in the United States.</a> BMC Infect Dis. 24 (1), 288(2024).</li>
<li>Ghasemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+non-tuberculous+mycobacteria+on+BCG+vaccine+efficacy%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Tuberc+Other+Mycobact+Dis%22%5BJournal%5D)">Effects of non-tuberculous mycobacteria on BCG vaccine efficacy: A narrative review.</a> J Clin Tuberc Other Mycobact Dis. 36, 00451(2024).</li>
<li>Njagi, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+tuberculin+skin+test+responses+associated+with+Mycobacterium+intracellulare+sputum+colonization+in+an+adolescent+TB+prevalence+survey+in+Western+Kenya%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Attenuated tuberculin skin test responses associated with Mycobacterium intracellulare sputum colonization in an adolescent TB prevalence survey in Western Kenya.</a> Tuberculosis (Edinb). 147, 102514(2024).</li>
<li>Larsen, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+vaccine+protects+against+a+clinical+isolate+of+Mycobacterium+avium+in+wild+type+and+immunocompromised+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Subunit vaccine protects against a clinical isolate of Mycobacterium avium in wild type and immunocompromised mouse models.</a> Scientific Reports. 11 (1), 9040-9040 (2021).</li>
<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
<li>Thomson, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+climate+variables+on+the+rising+incidence+of+nontuberculous+mycobacterial+%28NTM%29+infections+in+Queensland%2C+Australia+2001-2016%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Influence of climate variables on the rising incidence of nontuberculous mycobacterial (NTM) infections in Queensland, Australia 2001-2016.</a> Sci Total Environ. 740, 139796(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05% Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 1 ml</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 agar triplates</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G ago smussato</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>Armadio di biosicurezza</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubatore</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>Nastro biadesivo</td><td>Scotch</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton 701N siringa da microlitro</td><td>Fisher</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>Punte omni per tessuti duri</td><td>Fisher</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>Cuscinetto riscaldante</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>Ago per insulina</td><td>Fisher</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>Lente d'ingrandimento illuminata</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS ThermoFisher</td><td></td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Omogeneizzatore di tessuti</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per omogeneizzatore di tessuti</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

inoculazione intradermica di mycobacterium avium nell'orecchio del topo

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

Abbiamo utilizzato il protocollo descritto sopra per determinare se fosse possibile stabilire un modello di provocazione NTM riproducibile utilizzando il derma dell'orecchio come via di infezione o esposizione. Le orecchie sono state raccolte da due animali a 28 giorni dopo la sfida, omogeneizzate e piastrate come descritto sul terreno 7H10 selettivo per i micobatteri. Abbiamo osservato che M. avium persisteva fino a 28 giorni nelle orecchie che erano state sfidate per via intradermica e un'assenza di M. avium nell'orecchio non contestato (Figura 2).
Sebbene non sia stata osservata la disseminazione nell'orecchio non contestato entro 28 giorni dall'infezione, altri che utilizzano questo modello di derma dell'orecchio per la modellazione della TB latente hanno osservato la disseminazione in altri siti di organi distali14. Abbiamo ipotizzato che una dose più bassa di provocazione e l'uso dell'isolato di M. avium possano ridurre la diffusione a punti temporali successivi che potrebbero riflettere meglio l'esposizione rispetto all'infezione cronica. Pertanto, l'eutanasia è stata eseguita su coorti di topi n=5 M . avium challenged a 28, 56, 90 e 132 giorni dopo l'infezione. I seguenti organi sono stati omogeneizzati con lo stesso protocollo descritto per i tessuti dell'orecchio: polmone, milza, linfonodo drenante (DLN) e cervello. Questa via di provocazione ha portato a una disseminazione sporadica nel tempo, in cui meno della metà degli animali ha dimostrato CFU contabili negli organi testati entro 56 o 90 giorni dopo l'infezione (Tabella 1). Entro 132 giorni dalla sfida, tutti i topi avevano M. avium rilevabile nella milza (n = 5/5 animali valutati) ma sembravano ospitare batteri minimi (n = 1/5 in DLN) o assenti (n = 0/5 nei polmoni o nel cervello) in altri organi entro questo punto temporale (Tabella 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
Figura 1: Orientamento di un ago con il lato smussato rivolto verso l'alto. Prima dell'inserimento dell'ago, il lato smussato deve essere rivolto verso l'alto per somministrare correttamente l'inoculo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
Figura 2: Colonizzazione del tessuto dell'orecchio da parte di M. avium 28 giorni dopo la provocazione. I topi femmina C57BL/6 sono stati sfidati nell'orecchio con 102 CFU di Mycobacterium avium. L'orecchio sfidato (+) è stato confrontato con l'orecchio non sfidato (-) a 28 giorni, n = 2 singoli animali da un singolo esperimento mostrato, con ogni animale in un colore e simbolo diverso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Tempo (giorno)</td>
			<td colspan="4">Log Organo10 CFU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polmone</td>
			<td>Milza</td>
			<td>DLN</td>
			<td>Cervello</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2.81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,78, 0,90, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1,53, 3,43, ND, ND, ND</td>
			<td>2.78, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1,20, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, 3,35, 3,26, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = linfonodo drenante, ND = non rilevato</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1: Disseminazione di M. avium dall'orecchio nel tempo dopo la provocazione. I polmoni, la milza, il linfonodo drenante (DLN) e il cervello sono stati prelevati da n=5 topi per punto temporale dopo la provocazione. I tessuti omogeneizzati sono stati piastrati e valutati per la crescita batterica. Le CFU degli organi si presentavano come valori trasformati log10 in cui i batteri sono stati contati e non rilevati (ND) dove non sono state osservate CFU a nessuna concentrazione placcata. Dati sull'andamento temporale rappresentativi di un esperimento.

Inoculazione intradermica di Mycobacterium avium nell'orecchio del topo

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Questo video dimostra l'induzione di un'infiammazione sistemica in un topo anestetizzato. L'iniezione di depositi adiuvanti di antigene micobatterico innesca il rilascio di citochine e l'infiammazione localizzata. I vasi linfatici si aprono, consentendo l'ingresso delle cellule immunitarie nei linfonodi e l'attivazione delle cellule T, che rilasciano citochine pro-infiammatorie, portando a un'infiammazione diffusa.

Iniezione sottocutanea di antigene batterico per indurre infiammazione sistemica in un modello murino

Questo video dimostra un metodo per generare un modello murino di uveite micobatterica innescata (PMU) per lo studio dell'uveite post-infettiva. Dopo l'induzione della PMU mediante iniezione intravitreale di Mycobacterium tuberculosis ucciso con il calore in un topo precedentemente immunizzato con lo stesso immunogeno, la progressione dell'infiammazione cronica nell'occhio viene analizzata mediante imaging ed esame...

Un modello murino di uveite micobatterica innescata per studiare l'uveite post-infettiva

Il video dimostra l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino iniettando una combinazione di glicoproteine oligodendrocitarie mieliniche e Mycobacterium tuberculosis inattivato. Il modello consente ai ricercatori di studiare i meccanismi della malattia e testare gli interventi terapeutici.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

Questo video mostra un test per l'immunizzazione di un modello murino con sporozoiti vivi attenuati. Gli sporozoiti di Plasmodium attenuati dalle radiazioni vengono iniettati nel lato dorsale dell'orecchio del topo. Dopo le iniezioni in più punti su entrambe le orecchie, il topo può riprendersi.

Immunizzazione intradermica con sporozoiti vivi attenuati in un modello murino

In questo video, un modello murino di sclerosi multipla viene stabilito utilizzando l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE). Al topo viene iniettata un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante, innescando una risposta immunitaria che attiva le cellule T autoreattive. Questo è seguito da un'iniezione di tossina della pertosse (PTX) per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo alle cellule T autoreattive di infiltrarsi nel cervello. Questa...

La matrice extracellulare subisce sostanziale rimodellamento durante la guarigione delle ferite, l'infiammazione e tumorigenesi. Vi presentiamo un approccio immunofluorescenza intravitale romanzo per visualizzare le dinamiche di fibrillare come pure componenti della matrice maglia-come con alta risoluzione spaziale e temporale con epifluorescenza o microscopia a due fotoni.

A lungo termine intravitale immunofluorescenza Imaging di tessuto componenti della matrice con Epifluorescenza e due fotoni Microscopia

I meccanismi che regolano la motilità interstiziale di cellule CD4 T effettrici in siti di infiammazione sono relativamente sconosciuti. Presentiamo un approccio non invasivo per visualizzare e manipolare cellule CD4 T vitro -primed nel derma dell'orecchio infiammate, permettendo studio del comportamento dinamico di queste cellule in situ.

Imaging CD4 T cellule interstiziali migrazione nel derma infiammate

Viene descritto un test nei topi per tracciare la migrazione cellulare dalla pelle al linfonodo drenante che consente la caratterizzazione delle cellule dendritiche cutanee mobilizzate al linfonodo dopo l'infezione del cuscinetto del piede con Bacille Calmette-Guérin.

Un test CFSE-based per studiare la migrazione delle cellule dendritiche murini della pelle in drenanti linfonodi durante l&#39;infezione con<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

In questo rapporto presentiamo un protocollo che consente allo sperimentatore di generare un modello murino di uveite intraoculare. Più comunemente indicato come uveite autoimmune sperimentale (EAU), questo modello consolidato cattura molti aspetti della malattia umana. Qui, descriveremo come indurre e monitorare la progressione della malattia utilizzando diverse letture.

Uveite autoimmune sperimentale: un modello murino infiammatorio intraoculare

Questo protocollo delinea i passaggi per indurre l'uveite micobatterica innescata (PMU) nei topi. Questo metodo delinea i passaggi per aiutare a produrre un'infiammazione oculare affidabile e robusta nel sistema modello murino. Utilizzando questo protocollo, abbiamo generato occhi uveitici e occhi non infiammati da singoli animali per ulteriori valutazioni con saggi immunologici, trascrittomici e proteomici.

Uveite micobatterica innescata (PMU) come modello per l'uveite post-infettiva

I topi sono generalmente resistenti alle infezioni da Mycobacterium abscessus, il che complica la scoperta e lo sviluppo di antibiotici tanto necessari contro le infezioni polmonari. Qui, descriviamo un metodo di preparazione dell'inoculo e dell'infezione intratracheale che ha dimostrato di fornire un'infezione prolungata nei topi immunocompetenti.

Preparazione di Mycobacterium abscessus incluso nella perla di agar per inoculare topi immunocompetenti per via intratracheale

Scopri l'inoculazione intradermica di Mycobacterium avium nell'orecchio del topo per studiare le risposte immunitarie ai micobatteri non tubercolari. Questo modello in vivo consente di analizzare l'infezione contenuta e la persistenza batterica.

Inoculazione intradermica di Mycobacterium avium nell'orecchio del topo

Esplora altri video