Name: Separazione e frazionamento delle proteine della parete cellulare e della membrana cellulare da Mycobacterium tuberculosis per lanalisi delle proteine a valle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Scopri un metodo per separare le proteine insolubili della parete cellulare e della membrana di Mycobacterium tuberculosis in frazioni semplici utilizzando l'isoelettrofocalizzazione preparativa.

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<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
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<li>Sinha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+membrane-associated+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+revealed+by+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics.</a> Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7H9 brodo&nbsp;</td><td>Himedia&nbsp;</td><td>Visualizzazione M198</td><td></td></tr><tr><td>40% Bio-Lyte 3/10 Anfolita&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>Saggio delle proteine BCA&nbsp;</td><td>MERCK</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/7 Anfolita&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>concentratori centrifughi 3 kDa</td><td>MERCK</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>Digitonina.</td><td>MERCK</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>MERCK</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>MERCK</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>MERCK</td><td>E 9884</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MERCK</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>MERCK</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>MERCK</td><td>E18</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatina A</td><td>MERCK</td><td>P5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>MERCK</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Rnase</td><td>MERCK</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>Rotofor&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>170-2986</td><td>&nbsp; Apparecchio di focalizzazione isoelettrica (IEF)</td></tr><tr><td>Sonicatore</td><td>Vibra-Cell, Sonici</td><td>VC 750</td><td></td></tr><tr><td>TLCK</td><td>MERCK</td><td>Codice: T7254</td><td></td></tr><tr><td>TPCK</td><td>MERCK</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>urea</td><td>MERCK</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>Intero Gel Eluter apparato&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

separazione e frazionamento delle proteine della parete cellulare e della membrana cellulare da mycobacterium tuberculosis per l'analisi delle proteine a valle

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

Isolamento delle proteine della parete cellulare e della membrana cellulare mediante ultracentrifugazione ad alta velocità Le proteine della parete cellulare e della membrana sono state isolate da lisati cellulari interi mediante ultracentrifugazione, come indicato nel protocollo. L'analisi SDS-PAGE delle frazioni subcellulari separate, della parete cellulare, della membrana cellulare e dei profili proteici del citosol di M. tuberculosis è mostrata nella Figura 1...

Separazione e frazionamento delle proteine della parete cellulare e della membrana cellulare da Mycobacterium tuberculosis per l'analisi delle proteine a valle

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

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Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Fonte: Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. Isolamento e caratterizzazione di vescicole extracellulari prodotte da micobatteri limitati al ferro. J. Vis. Exp. (2019)Questo video mostra l'isolamento graduale di vescicole extracellulari (EV) da Mycobacterium tuberculosis coltivate in condizioni limitanti il ferro che imitano l'ambiente ospite. Descrive l'uso dell'ultrafiltrazione, della centrifugazione differenziale e della separazione in gradiente di densità per arricchire e identificare le frazioni...

Isolamento di vescicole extracellulari contenenti siderofori da Mycobacterium tuberculosis

Questo video dimostra la separazione degli acidi micolici basata sulla cromatografia su strato sottile. Questa tecnica separa i diversi acidi micolici, lipidi a catena lunga presenti nella parete cellulare dei micobatteri, in base alla loro polarità.

Separazione basata sulla cromatografia su strato sottile di varianti di acido micolico: un metodo per separare i lipidi della parete cellulare micobatterica in base alla polarità

Questo video mostra la tecnica di cromatografia ad esclusione dimensionale (SEC) per purificare le vescicole extracellulari batteriche (EV) dal filtrato di coltura di Mycobacterium tuberculosis (Mtb). La tecnica utilizza una colonna porosa impaccata di resina per ottenere frazioni purificate di EV. Le particelle porose consentono selettivamente alle proteine più piccole di entrare nei pori, con conseguente eluizione più lenta. Allo stesso tempo, le vescicole extracellulari sono escluse...

Una tecnica di cromatografia ad esclusione dimensionale per purificare le vescicole extracellulari micobatteriche

La parete cellulare batterica è composta da peptidoglycan, una rete macromolecolare di fili di zucchero reticolati da peptidi. La cromatografia liquida ad alte prestazioni fornisce alta risoluzione e produttività per nuove scoperte della composizione peptidoglycan. Presentiamo una procedura per l'isolamento delle pareti cellulari (sacculi) e la loro successiva preparazione per l'analisi tramite UPLC.

Isolamento e preparazione delle pareti cellulari batteriche per l'analisi compositia mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni

I batteri Gram-negativi producono due membrane selvadenti spazialmente. La membrana esterna è partizionata dalla membrana interna da un periplasma e da uno strato peptidoglycan. La capacità di isolare i doppi bistrati di questi microbi è stata fondamentale per comprendere la loro fisiologia e patogenesi.

Separazione dell'involucro cellulare per i batteri Gram-negativi in frazioni di membrana interne ed esterne con regolazioni tecniche per Acinetobacter baumannii

Viene presentato un protocollo per estrarre il contenuto lipidico totale della parete cellulare di una vasta gamma di micobatteri. Inoltre, vengono mostrati i protocolli di estrazione e analisi dei diversi tipi di acidi micolici. Viene inoltre fornito un protocollo cromatografico a strato sottile per monitorare questi composti micobatterici.

Analisi della composizione lipidica dei micobatteri mediante cromatografia a strato sottile

Le vescicole batteriche svolgono un ruolo importante nella patogenesi e hanno promettenti applicazioni biotecnologiche. L'eterogeneità delle vescicole complica l'analisi e l'uso; pertanto, è necessario un metodo semplice e riproducibile per separare le varie dimensioni delle vescicole. Qui, dimostriamo l'uso della cromatografia di esclusione dimensionale per separare vescicole eterogenee prodotte da Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

Cromatografia di esclusione dimensionale per analizzare l'eterogeneità delle vescicole della membrana esterna batterica

Questo protocollo descrive la cromatografia di esclusione dimensionale, una tecnica facile e riproducibile per arricchire le vescicole extracellulari del Mycobacterium tuberculosis dai supernatanti di coltura.

Mycobacterium tuberculosis Arricchimento delle vescicole extracellulari attraverso la cromatografia di esclusione dimensionale

Questo protocollo descrive in dettaglio l'arricchimento di vescicole extracellulari micobatteriche native (mEV) da colture axeniche di Mycobacterium smegmatis (Msm) e come possono essere progettate e arricchite le MsmEV ricombinanti contenenti mCherry (un reporter fluorescente rosso). Infine, verifica il nuovo approccio con l'arricchimento di MsmEVs contenenti la proteina EsxA di Mycobacterium tuberculosis.

Arricchimento di vescicole extracellulari native e ricombinanti di micobatteri

Sebbene i procarioti manchino di un sistema organellare, ci sono regioni subcellulari con proteine localizzate. L'analisi quantitativa e qualitativa degli enzimi e delle proteine nelle regioni subcellulari è importante per lo sviluppo di bersagli di farmaci e vaccini. Qui, illustriamo il frazionamento subcellulare delle proteine Leptospiral utilizzando Triton X-114 e la sua analisi.

Arricchimento di proteine subcellulari in Leptospira utilizzando un approccio di frazionamento basato su Triton X-114

Questo protocollo descrive la coltura, la raccolta e la concentrazione delle proteine secrete di Mycobacterium tuberculosis. Le proteine filtrate di coltura (CFP) vengono quantificate, separate in 20 frazioni mediante focalizzazione isoelettrica e ulteriormente risolte in 30 frazioni utilizzando un SDS-PAGE preparativo e un sistema di elettroeluizione.

Separazione e frazionamento delle proteine filtrate di coltura (CFP) da Mycobacterium tuberculosis

Scopri un metodo per separare le proteine insolubili della parete cellulare e della membrana di Mycobacterium tuberculosis in frazioni semplici utilizzando l'isoelettrofocalizzazione preparativa.

Separazione e frazionamento delle proteine della parete cellulare e della membrana cellulare da Mycobacterium tuberculosis per lanalisi delle proteine a valle (Video) | JoVE Journal

Separazione e frazionamento delle proteine della parete cellulare e della membrana cellulare da Mycobacterium tuberculosis per l'analisi delle proteine a valle

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