Name: Consegna efficace e sicura del gene al rene di topo tramite iniezione lenta retrograda della pelvi renale di vettori virali adeno-associati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Scopri un metodo sicuro per la consegna genica al rene di topo mediante iniezione retrograda lenta della pelvi renale con vettori AAV. Questa tecnica consente una transduzione efficace dei tubuli prossimali senza danni tissutali.

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<table><tbody><tr><td>0,45 μm PVDF syringe filter</td><td>MilliporeSigma</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL microcentrifuge tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>15 mL polypropylene tube</td><td>Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldeide (PFA)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>250 mL centrifuge bottle</td><td>Fisher Scientific</td><td>055641S24</td><td></td></tr><tr><td>2F Silicone tubing</td><td>Sai Infusion Technologies</td><td>SIL-2-50</td><td></td></tr><tr><td>25G butterfly needle</td><td>Medex Supply</td><td>26708</td><td></td></tr><tr><td>2-metilbutane</td><td>MilliporeSigma</td><td>MX0760</td><td></td></tr><tr><td>2x qPCR reaction buffer</td><td>Fisher Scientific</td><td>43-676-59</td><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td></tr><tr><td>30G needle</td><td>Becton-Dickinson & Co</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>50 mL polypropylene tube</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>5-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>Y463G</td><td></td></tr><tr><td>5 M NaCl</td><td>Lonza</td><td>51202</td><td></td></tr><tr><td>6-0 absorbable suture</td><td>Ethicon</td><td>J489G</td><td></td></tr><tr><td>7,5% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels, 10-well, 30 μL</td><td>Bio-Rad</td><td>4561023</td><td></td></tr><tr><td>Amersham ImageQuant 800 Western Blot Imaging System (Cytiva)</td><td>Cytiva</td><td>29459405</td><td></td></tr><tr><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 mL tube</td><td>Millipore Sigma</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab199975</td><td>A marker for collecting duct cells</td></tr><tr><td>Anti-Na-K-2Cl cotransporter 2 (NKCC2) antibody</td><td>StressMarq Biosciences</td><td>SPC-401</td><td>A marker for thick ascending limb cells</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor 647 antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-605-144</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Wilms Tumor 1 (WT1) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab89901</td><td>A marker for podocytes</td></tr><tr><td>Beckman Coulter OptiSeal Tube, Polypropylene, 29,9 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9691210</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter OPTISEAL TUBES</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9611575</td><td></td></tr><tr><td>Benzonase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1016970001</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugal ultrafiltration tube</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 mL</td></tr><tr><td>Ceramic bead tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-154</td><td></td></tr><tr><td>Cesium chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3032-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Clamp applying forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>Closed-loop heat pad</td><td>Stryker Medical</td><td>8002-062-012</td><td></td></tr><tr><td>Cotton-tipped applicator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Cover glass</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541B</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat microtome</td><td>Tanner Scientific</td><td>TN50</td><td></td></tr><tr><td>Curved forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Curved-type micro vessel clip</td><td>Kleinert-Kutz</td><td>65145</td><td>Clamp for the renal artery and renal vein</td></tr><tr><td>Dialysis cassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>PIA52976</td><td></td></tr><tr><td>DNA extraction kit</td><td>Qiagen</td><td>57704</td><td>QIAamp MinElute Virus Spin Kit</td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium- high glucose</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td>DMEM-high glucose (4,5 g/L)</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-575-020</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716GEA</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>VWR</td><td>89510-186</td><td></td></tr><tr><td>Gas-tight glass syringe</td><td>Hamilton</td><td>1710 TLL</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td></td></tr><tr><td>Heat therapy pump</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizer</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-163</td><td></td></tr><tr><td>Human embryonic kidney (HEK) 293 cells</td><td>Agilent</td><td>240073</td><td></td></tr><tr><td>Ice bucket</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-104</td><td></td></tr><tr><td>Infusion syringe pump</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Liquid blocker pen</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>Lotus tetragonolobus lectin (LTL)- Fluorescein</td><td>Vector Laboratories</td><td>FL-1321-2</td><td>A marker for proximal tubules</td></tr><tr><td>Magnesium chloride (MgCl2)</td><td>MilliporeSigma</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>VetOne</td><td>NDC 86136-012-10</td><td>Analgesic</td></tr><tr><td>Microscope glass slide</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Mounting medium</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12501-13</td><td></td></tr><tr><td>OCT compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment</td><td>Bausch & Lomb</td><td>NDC 24208-313-34</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 polyethylene tube</td><td>BD</td><td>427401</td><td>Inner diameter: 0,28 mm</td></tr><tr><td>Penicillin & Streptomycin Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Plastic cryomold</td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Poloxamer 188 Non-ionic Surfactant (10%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>24-040-032</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol 8000</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP233-1</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenimine (PEI)</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td>Povidone iodine</td><td>Ricca

consegna efficace e sicura del gene al rene di topo tramite iniezione lenta retrograda della pelvi renale di vettori virali adeno-associati

Effective and Safe Gene Delivery to the Mouse Kidney via Slow Retrograde Renal Pelvis Injection of Adeno-Associated Virus Vectors

Consegna efficace e sicura del gene al rene di topo tramite iniezione lenta retrograda della pelvi renale di vettori virali adeno-associati

The development of effective in vivo tools and methods for gene delivery to the kidney is crucial for advancing basic kidney research and gene therapy for ...

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In questo video, dimostriamo la consegna genica ricombinante basata su virus adeno associati nel cucciolo di topo. Questo metodo aiuta a studiare l'espressione genica nelle cellule bersaglio.

Consegna genica basata su virus associato ad adeno ricombinante: una tecnica per la consegna di transgeni e l'espressione cardiaca-specifica in un modello di roditore

Fonte:Pourshafie, N., et al. Somministrazione sistemica di microRNA utilizzando il sierotipo 9 del virus adeno-associato ricombinante per il trattamento delle malattie neuromuscolari nei roditori. J. Vis. Exp. (2018).In questo video, un topo affetto da atrofia muscolare spinale e bulbare o affetto da SBMA viene sottoposto a iniezione nella vena caudale di vettori AAV (vettori adeno-associati) ricombinanti che trasportano un microRNA terapeutico codificante un plasmide. Il vettore produce...

Iniezione di vettori adeno-associati ricombinanti in un modello murino di atrofia muscolare spinale e bulbare

Impianto di cellule tumorali nell'organo di origine può servire come un modello preclinico utile per valutare nuove terapie. Cellule di carcinoma della vescica MB49 possono essere coltivate all'interno della vescica seguente instillazione intravescicale. Questo protocollo dimostra cateterizzazione della vescica topo a scopo di impianto tumorale e consegna adenovirale.

Un ortotopico cancro della vescica Modello di Gene Studi di consegna

L'approccio chirurgico post-auricolare descritto consente una somministrazione rapida e diretta nel timpano della scala cocleare del topo, riducendo al minimo la perdita di sangue e la mortalità animale. Questo metodo può essere utilizzato per la terapia cocleare utilizzando la somministrazione molecolare, farmacologica e virale a topi postnatali attraverso la membrana rotonda della finestra.

Metodo chirurgico per Virally Mediated Gene consegna all&#39;orecchio mouse interno attraverso la finestra rotonda a membrana

In questo manoscritto, viene descritto un metodo per preparare vettori ricombinanti del virus adeno-associato 9 (rAAV9) per manipolare l'espressione genica nel cuore del topo.

Preparazione di rAAV9 per iperespressione o Knockdown geni in Cuori mouse

Qui descriviamo la consegna del microRNA usando un virus ricombinante adeno-associato sierotipo 9 in un modello murino di una malattia neuromuscolare. Una singola somministrazione periferica nei topi ha provocato la sovraespressione di miRNA sostenuta nel muscolo e motoneuroni, offrendo l'opportunità di studio miRNA funzione e potenziale terapeutico in vivo.

Consegna sistemica di MicroRNA usando ricombinanti Virus Adeno-associato sierotipo 9 per trattare malattie neuromuscolari in roditori

L'obiettivo del presente studio è stato quello di sviluppare e convalidare la potenza e la sicurezza del recettore genico mediato dal virus 9 associato ad adeno associato a spina (AAV9) utilizzando una nuova tecnica di somministrazione del gene subpiale nei topi adulti.

Subito Adeno associato Virus 9 (AAV9) Consegna vettoriale nei topi adulti

Questo protocollo descrive un metodo per iniettare DNA plasmidico in rene del mouse tramite la pelvi renale per produrre l'espressione del transgene in particolare nel rene.

Iniezione idrodinamica pelvi renale per Non virali espressione delle proteine nel rene

Descriviamo un metodo novello per la consegna del plasmide del DNA nelle cellule uroteliali del mouse della vescica in vivo tramite cateterizzazione dell'uretra e l'elettroporazione. Offre un modo veloce e conveniente per la generazione di modelli murini autoctoni di malattie di vescica.

Nuovo metodo di consegna plasmide DNA Urothelium della vescica del Mouse mediante elettroporazione

Qui descriviamo in dettaglio un protocollo ottimizzato per l'iniezione laterale della vena di coda nel topo per somministrare sistemicamente il virus adeno-associato (AAV) nei topi adulti. Inoltre, descriviamo i protocolli dei saggi comunemente usati per valutare la trasduzione di AAV.

Somministrazione costante di virus adeno-associato tramite iniezione laterale della vena di coda in topi adulti

Questo protocollo descrive come l'iniezione intrasplenica di small hairpin RNA erogato da AAV8 raggiunga la stessa efficienza di knockdown genico nel fegato dell'iniezione della vena porta, rappresentando una procedura più semplice con mortalità e complicanze perioperatorie e postoperatorie molto più basse.

Knockdown genico efficiente nel fegato tramite iniezione intrasplenica di piccolo RNA a forcina veicolato dal virus adeno-associato sierotipo 8 (AAV8)

Scopri un metodo sicuro per la consegna genica al rene di topo mediante iniezione retrograda lenta della pelvi renale con vettori AAV. Questa tecnica consente una transduzione efficace dei tubuli prossimali senza danni tissutali.

Consegna efficace e sicura del gene al rene di topo tramite iniezione lenta retrograda della pelvi renale di vettori virali adeno-associati (Video) | JoVE Journal

Consegna efficace e sicura del gene al rene di topo tramite iniezione lenta retrograda della pelvi renale di vettori virali adeno-associati

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