Contenuto di flavonoidi durante la crescita e lo sviluppo floreale della Calendula officinalis L.

Qui presentiamo il metodo colorimetrico del cloruro di alluminio, una tecnica analitica diretta per determinare quantitativamente i flavonoidi nella calendula. Questo approccio utilizza una semplice reazione chimica che coinvolge il trattamento dell'estratto di calendula con un reagente di cloruro di alluminio, formando un complesso colorato. L'intensità del colore, valutata mediante spettrofotometria, è correlata alla concentrazione di flavonoidi.

Il nostro studio utilizza un metodo colorimetrico accessibile e affidabile per quantificare i flavonoidi totali, facilitando l'analisi dei dati nei laboratori di fitochimica e supportando la ricerca di composti con proprietà terapeutiche.

Il contenuto di flavonoidi nella calendula viene studiato durante lo sviluppo floreale per identificare il momento ottimale di raccolta e massimizzare il suo potenziale medicinale e commerciale.

Il nostro protocollo è una microtecnica sensibile ed efficiente che consente la quantificazione dei flavonoidi utilizzando piccole quantità di campione, ottimizzando l'uso del solvente e limitando l'analisi con materiale vegetale.

[Istruttore] Per iniziare, asciuga il materiale vegetale in un forno ad aria forzata a 40 gradi Celsius per 48 ore. Una volta asciutto, toglietelo dal forno, trasferite il materiale essiccato in buste di carta e conservatele al buio a temperatura ambiente. Congelare il materiale vegetale utilizzando azoto liquido per prepararsi alla macinazione. Quindi, macinare il materiale congelato in un mortaio di porcellana fino a raggiungere una consistenza uniforme. Preparare i campioni pesando 25 milligrammi di materiale polverizzato da ciascun campione. Aggiungere 500 microlitri di metanolo all'80% al materiale pesato. Per estrarre i flavonoidi, incubare la miscela a 70 gradi Celsius per un'ora. Dopo l'incubazione, centrifugare la miscela a 731 g per 13 minuti. Ora, prepara le aliquote prendendo 150 microlitri dell'estratto ottenuto e aggiungendo 37 microlitri di metanolo all'80%. Prendi 50 microlitri di estratto e aggiungi 100 microlitri di acetato di potassio molare e 100 microlitri di cloruro di alluminio al 10%. Completare la soluzione portando il volume totale della miscela fino a cinque millilitri utilizzando acqua distillata. Impostare la lunghezza d'onda dell'assorbanza di uno spettrofotometro a 415 nanometri e misurare l'assorbanza della soluzione. Generare la curva di calibrazione preparando soluzioni di quercetina che vanno da 50, 100, 175 e 350 milligrammi per millilitro. Per preparare i campioni di calibrazione, pipettare 500 microlitri della soluzione di quercetina dall'ultimo punto della curva di calibrazione e aggiungere alla soluzione 100 microlitri di cloruro di alluminio al 10% e 100 microlitri di acetato di potassio molare. Quindi, aggiungere 1,5 millilitri di metanolo all'80% e 2,8 millilitri di acqua distillata. Lasciare riposare le soluzioni di calibrazione per 40 minuti a temperatura ambiente. Impostare la lunghezza d'onda dell'assorbanza dello spettrofotometro a 415 nanometri e misurare l'assorbanza dei campioni di calibrazione per costruire la curva di calibrazione. Infine, calcola la concentrazione di flavonoidi e il contenuto di flavonoidi per grammo di materiale secco. Questa tabella riassume come la concentrazione di flavonoidi e la produzione di flavonoidi per pianta variano dalla formazione iniziale delle gemme alla piena fioritura e allo sviluppo dei frutti nei capolini di calendula. Livelli più elevati di concentrazione totale di flavonoidi sono stati osservati tra gli stadi otto e 11, corrispondenti a gemme con sepali separati a capolini completamente aperti. Nelle fasi iniziali, come le gemme con sepali uniti, e nelle fasi successive come i capolini senescenti, le concentrazioni di flavonoidi erano inferiori del 22-27% rispetto ai capolini completamente aperti. Questa figura mostra la misurazione della concentrazione totale di flavonoidi nella sostanza secca di capolini di calendula, fiori ligulati e fiori tubolari durante le fasi di sviluppo floreale. I risultati suggeriscono che comprendere la variazione della concentrazione di flavonoidi tra le diverse strutture e fasi floreali è utile per determinare il momento di raccolta ottimale per massimizzare il contenuto di flavonoidi nei capolini di calendula.