Name: Analisi completa della risposta ai farmaci utilizzando il test FLICK (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Scopri il test FLICK per analizzare la risposta ai farmaci antitumorali nelle linee cellulari tumorali. Questo metodo calcola con precisione i tassi di crescita e morte cellulare indotti dai farmaci, superando i limiti delle analisi standard.

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<ol><li>Hafner, M., Niepel, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+drug+sensitivity+metrics+improve+preclinical+cancer+pharmacogenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Alternative drug sensitivity metrics improve preclinical cancer pharmacogenomics.</a> Nat Biotechnol. 35 (6), 500-502 (2017).</li>
<li>Dixon, S. J., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+tips+for+interpreting+cell+death+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Quick tips for interpreting cell death experiments.</a> Nat Cell Biol. 25 (12), 1720-1723 (2023).</li>
<li>Schwartz, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+GRADE%3A+An+Integrated+Analysis+of+Population+Growth+and+Cell+Death+Reveals+Drug-Specific+and+Cancer+Subtype-Specific+Response+Profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Drug GRADE: An Integrated Analysis of Population Growth and Cell Death Reveals Drug-Specific and Cancer Subtype-Specific Response Profiles.</a> Cell Rep. 31 (12), 107800(2020).</li>
<li>Hafner, M., Niepel, M., Chung, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+rate+inhibition+metrics+correct+for+confounders+in+measuring+sensitivity+to+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Growth rate inhibition metrics correct for confounders in measuring sensitivity to cancer drugs.</a> Nat Methods. 13 (6), 1-11 (2016).</li>
<li>Galluzzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cell+death+recommendations+of+the+Nomenclature+Committee+on+Cell+Death+2018%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cell death recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018.</a> Cell Death Differ. 25 (3), 486-541 (2018).</li>
<li>Tsvetkov, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+induces+cell+death+by+targeting+lipoylated+TCA+cycle+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins.</a> Science. 375 (6586), 1254-1261 (2022).</li>
<li>Holze, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxeiptosis%2C+a+ROS-induced+caspase-independent+apoptosis-like+cell-death+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Oxeiptosis, a ROS-induced caspase-independent apoptosis-like cell-death pathway.</a> Nat Immunol. 19 (2), 130-140 (2018).</li>
<li>Maltese, W. A., Overmeyer, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methuosis+Nonapoptotic+Cell+Death+Associated+with+Vacuolization+of+Macropinosome+and+Endosome+Compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methuosis Nonapoptotic Cell Death Associated with Vacuolization of Macropinosome and Endosome Compartments.</a> Am J Pathol. 184 (6), 1630-1642 (2014).</li>
<li>Inde, Z., Forcina, G. C., Denton, K., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+Heterogeneity+of+Cancer+Cell+Fractional+Killing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Kinetic Heterogeneity of Cancer Cell Fractional Killing.</a> Cell Rep. 32 (1), 107845(2020).</li>
<li>Forcina, G. C., Conlon, M., Wells, A., Cao, J. Y., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Quantification+of+Population+Cell+Death+Kinetics+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Systematic Quantification of Population Cell Death Kinetics in Mammalian Cells.</a> Cell Syst. 4 (6), 1-18 (2017).</li>
<li>Gelles, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Population-Level+Analyses+Using+Real-Time+Kinetic+Labeling+Couples+Proliferation+and+Cell+Death+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Population-Level Analyses Using Real-Time Kinetic Labeling Couples Proliferation and Cell Death Mechanisms.</a> Dev Cell. 51 (2), 277-291.e4 (2019).</li>
<li>Richards, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+antagonism+and+single-agent+dominance+result+from+differences+in+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Drug antagonism and single-agent dominance result from differences in death kinetics.</a> Nat Chem Biol. 16 (7), 791-800 (2020).</li>
<li>Richards, R., Honeywell, M. E., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLICK%3A+an+optimized+plate+reader-based+assay+to+infer+cell+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">FLICK: an optimized plate reader-based assay to infer cell death kinetics.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100327(2021).</li>
<li>Honeywell, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+screens+with+death+rate+analyses+reveal+mechanisms+of+drug+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional genomic screens with death rate analyses reveal mechanisms of drug action.</a> Nat Chem Biol. 20 (11), 1443-1452 (2024).</li>
<li>Jannoo, R., Xia, Z., Row, P. E., Kanamarlapudi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+the+Interleukin-13+Receptor+%28IL-13R%29%CE%B12+Expressing+Prostate+Cancer+by+a+Novel+Hybrid+Lytic+Peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Targeting of the Interleukin-13 Receptor (IL-13R)α2 Expressing Prostate Cancer by a Novel Hybrid Lytic Peptide.</a> Biomolecules. 13 (2), 356(2023).</li>
<li>Gelles, J. D., Chipuk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+not+add+some+SPARKL+to+your+life+%28and+death%29%21%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Oncol%22%5BJournal%5D)">Why not add some SPARKL to your life (and death)!</a> Mol Cell Oncol. 7 (1), 1685841(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Belinostat</td><td>ApexBio</td><td>A4612</td><td></td></tr><tr><td>Camptotecina</td><td>ApexBio</td><td>A2877</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga conica, 15mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-269</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10017CV</td><td>Per la semina e la somministrazione di cellule</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT-25950CQC</td><td>Per la semina e la somministrazione di cellule</td></tr><tr><td>Fisherbrand Micropiastra a 96 pozzetti, con fondo a U trattata per colture cellulari</td><td>Fisher Scientific FB012932</td><td></td><td>Per la semina e la somministrazione di farmaci alle cellule (piastra a spillo)</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One&nbsp; CELLSTAR &mu; Greiner per micropiastre a fondo piatto trasparente a 96 pozzetti, trattato con colture cellulari</td><td></td><td>655090</td><td>Per la semina e la somministrazione di cellule</td></tr><tr><td>IncuCyte S3</td><td>Essen Biosciences</td><td></td><td>Qualsiasi microscopio di fase funzionerà</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td><td>MATLAB versione R2023b, è necessaria una licenza</td></tr><tr><td>Lettore di fluorescenza per micropiastre</td><td>Tecan</td><td>Spark</td><td>Per misurare la fluorescenza delle cellule morte</td></tr><tr><td>Palbociclib</td><td>ApexBio</td><td>A8316</td><td></td></tr><tr><td></td><td>PBS Corning</td><td>21-040-CM</td><td>Qualsiasi PBS funziona</td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre multimodale Spark</td><td>Tecan</td><td>https://www.tecan.com/spark-overview</td><td>SparkControl versione software 2.2</td></tr><tr><td>Serbatoio sterile, 25 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-508</td><td>Per la semina e la somministrazione di cellule</td></tr><tr><td>Sytox Colorante verde per acido nucleico</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S7020</td><td>Colorante per DNA per la misurazione della fluorescenza delle cellule morte</td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J66624-AP</td><td>Per la permeabilizzazione delle cellule</td></tr><tr><td>U2OS</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Un esempio di linea cellulare utilizzata in questo protocollo</td></tr><tr><td>Z-VAD-FMK</td><td>ApexBio</td><td>A1902</td><td></td></tr></tbody></table>

analisi completa della risposta ai farmaci utilizzando il test flick

Comprehensive Analysis of Drug Response using the FLICK Assay

Utilizzando questo protocollo, abbiamo esplorato la sensibilità delle cellule U2OS all'inibitore dell'HDAC Belinostat. Questi esperimenti sono stati eseguiti utilizzando 2 μM di SYTOX Green per marcare le cellule morte (Figura 1A). Le letture cinetiche sono state effettuate utilizzando un lettore di piastre fluorescenti con un'impostazione di guadagno di 130 (Figura 1B). Le cellule sono state lisate in soluzione di Triton-X all'1,5% in PBS per 2 ore alla fine de...

Analisi completa della risposta ai farmaci utilizzando il test FLICK

For understanding drug efficacy, a critical need is to characterize the extent of drug-induced cell death. Efforts to quantify the level of drug-induced ...

comprehensive-analysis-of-drug-response-using-the-flick-assay

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Questo video fornisce un protocollo dettagliato per lo studio del profilo farmacologico di umano TRPA1 canali utilizzando FlexStation 3. Il protocollo comprende dettagli di preparazione delle cellule, il caricamento colorante e il funzionamento del lettore per micropiastre, FlexStation 3.

Saggio basato su cellule di calcio per le medie e High Throughput Screening del PRT Funzioni canale utilizzando FlexStation 3

Descriviamo la procedura e analisi dei dati di un sistema di screening chimico per la segnalazione ormone dello stress glucocorticoide con larve di zebrafish: il Responsive dosaggio glucocorticoidi In vivo Zebrafish Luciferase attività (GRIZLY). Il test con sensibilità e in particolare rileva gli effetti sulla segnalazione glucocorticoide da composti che necessitano di metabolizzazione o influenzano la produzione di glucocorticoidi endogeni.

Una procedura di screening chimico per glucocorticoidi segnalazione con un reporter del sistema Zebrafish Larva Luciferase

Descriviamo un test di sensibilità ai farmaci ad alto rendimento per cellule primarie di mieloma multiplo. Consiste in una ricostruzione del microambiente del midollo osseo (compresa la matrice extracellulare e lo stroma) in piastre multipozzetto e in un metodo non invasivo per la quantificazione longitudinale della vitalità cellulare.

Un sistema organotipica High Throughput per la caratterizzazione di droga sensibilità di primaria multicampo cellule del mieloma

Semplici metodi per rilevare l'attivazione selettiva delle proteine G da parte dei recettori accoppiati a proteine G rimangono una sfida eccezionale nella segnalazione cellulare. Qui, i biosensori per il trasferimento di energia di risonanza Förster (FRET) sono stati sviluppati legando a coppie un GPCR a peptidi proteici G per sondare i cambiamenti conformazionali a concentrazioni controllate in cellule vive.

Conformazioni GPCR g di proteine-selettivi misurata utilizzando FRET sensori in un Fluorometer Assay Live Cell Suspension

Vi presentiamo un alto contenuto strumento open source di analisi (HCA) che utilizza l'imaging di fluorescenza vita automatizzato (FLIM) per saggiare le interazioni delle proteine ​​che utilizzano Förster trasferimento di energia di risonanza (FRET) letture basate. L'acquisizione dei dati per questo strumento openFLIM-HCA è controllato da un software scritto in μManager e l'analisi dei dati viene effettuata in FLIMfit.

Open Source alto contenuto di analisi Utilizzando Automated Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Il saggio cellulare descritto è stato progettato per l'identificazione del recettore per chemochine CXC 4 (CXCR4)-agenti interagenti che inibiscono o stimolano, sia competitivo o allosterico, il Ca2 + rilascio intracellulare avviato dall'attivazione di CXCR4.

Un'analisi cinetica basata sulla fluorescenza Ca2 + mobilizzazione per identificare il G proteina-ha accoppiato il ricevitore agonisti, antagonisti e modulatori allosterici

Combinazioni di farmaci sinergici sono difficile e richiede molto tempo per identificare empiricamente. Qui, descriviamo un metodo per identificare e convalidare sinergiche piccole molecole.

Identificazione di High-throughput di combinazioni di farmaci sinergici con il metodo2 di sovrapposizione

Introduciamo un protocollo per misurare la risposta del farmaco in tempo reale nelle fette di tessuto tumorale organotipico. La strategia sperimentale qui descritta fornisce una piattaforma per effettuare schermi di farmaci a medio-alta produzione su fette di tessuto derivate da tumori clinici o murini in condizioni di ex vivo.

Misurazione della risposta dei farmaci in tempo reale nelle fette di tessuto tumorale organotipico

In questo lavoro, viene descritto un saggio di fluorescenza di calcio intracellulare ad alto rendimento per piastre a 384 pozzetti per lo screening di piccole librerie di molecole su recettori accoppiati a proteine G ricombinanti (GPCR). Il bersaglio, il recettore della chinina dalla zecca della febbre bovina, Rhipicephalus microplus, è espresso nelle cellule CHO-K1. Questo test identifica agonisti e antagonisti che utilizzano le stesse cellule in un test di "doppia addizione".

Un saggio di fluorescenza del calcio "a doppia aggiunta" per lo screening ad alta produttività dei recettori accoppiati a proteine G ricombinanti

Gli organoidi tumorali derivati da pazienti sono un sofisticato sistema modello per la ricerca di base e traslazionale. Questo articolo sui metodi descrive in dettaglio l'uso dell'imaging fluorescente multiplexato di cellule vive per la valutazione cinetica simultanea di diversi fenotipi organoidi.

Imaging multiplexato di cellule vive per le risposte ai farmaci in modelli di organoidi derivati da pazienti

Scopri il test FLICK per analizzare la risposta ai farmaci antitumorali nelle linee cellulari tumorali. Questo metodo calcola con precisione i tassi di crescita e morte cellulare indotti dai farmaci, superando i limiti delle analisi standard.

Analisi completa della risposta ai farmaci utilizzando il test FLICK

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