Name: Lisolamento e la caratterizzazione di neutrofili a bassa e normale densità da sangue intero (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: Scopri un protocollo per isolare neutrofili a bassa e normale densità da sangue umano mediante centrifugazione a gradiente di densità e isolamento magnetico negativo. Questo metodo garantisce alta purezza e viabilità cellulare per studi avanzati sull'eterogeneità neutrofilica.

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<ol><li>Tracchi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+neutrophil+lifespan+in+patients+with+congestive+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Increased neutrophil lifespan in patients with congestive heart failure.</a> Eur J Heart Fail. 11 (4), 378-385 (2009).</li>
<li>Ballesteros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+neutrophil+fates+by+tissue+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of neutrophil fates by tissue environments.</a> Cell. 183 (5), 1282-1297.e18 (2020).</li>
<li>Mckenna, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils%3A+Need+for+standardized+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils: Need for standardized nomenclature.</a> Front Immunol. 12, 602963(2021).</li>
<li>Hacbarth, E., Kajdacsy-Balla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+neutrophils+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%2C+rheumatoid+arthritis%2C+and+acute+rheumatic+fever%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low density neutrophils in patients with systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and acute rheumatic fever.</a> Arthritis Rheumatol. 29 (11), 1334-1342 (1986).</li>
<li>Hardisty, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+purity+isolation+of+low+density+neutrophils+casts+doubt+on+their+exceptionality+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">High purity isolation of low density neutrophils casts doubt on their exceptionality in health and disease.</a> Front Immunol. 12, 625922(2021).</li>
<li>Scapini, P., Marini, O., Tecchio, C., Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neutrophils+in+the+saga+of+cellular+heterogeneity%3A+Insights+and+open+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Human neutrophils in the saga of cellular heterogeneity: Insights and open questions.</a> Immunol Rev. 273 (1), 48-60 (2016).</li>
<li>Ssemaganda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neutrophil+subsets+in+healthy+human+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of neutrophil subsets in healthy human pregnancies.</a> PLoS One. 9 (2), e85696(2014).</li>
<li>Tay, S. H., Celhar, T., Fairhurst, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (10), 1587-1595 (2020).</li>
<li>Hassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+low-density+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">On the origin of low-density neutrophils.</a> J Leukoc Biol. 107 (5), 809-818 (2020).</li>
<li>Cowland, J. B., Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+neutrophil+precursors+from+bone+marrow+for+biochemical+and+transcriptional+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation of neutrophil precursors from bone marrow for biochemical and transcriptional analysis.</a> J Immunol Methods. 232 (1-2), 191-200 (1999).</li>
<li>Blanco-Camarillo, C., Aleman, O. R., Rosales, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+healthy+individuals+display+a+mature+primed+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in healthy individuals display a mature primed phenotype.</a> Front Immunol. 12, 672520(2021).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+display+immature+cells+with+enhanced+NET+formation+in+people+living+with+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes display immature cells with enhanced NET formation in people living with HIV.</a> Sci Rep. 13 (1), 13282(2023).</li>
<li>Denny, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+subset+of+proinflammatory+neutrophils+isolated+from+patients+with+systemic+lupus+erythematosus+induces+vascular+damage+and+synthesizes+type+I+IFNs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A distinct subset of proinflammatory neutrophils isolated from patients with systemic lupus erythematosus induces vascular damage and synthesizes type I IFNs.</a> J Immunol. 184 (6), 3284-3297 (2010).</li>
<li>Ui Mhaonaigh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+granulocytes+in+anca+vasculitis+are+heterogenous+and+hypo-responsive+to+anti-myeloperoxidase+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low density granulocytes in anca vasculitis are heterogenous and hypo-responsive to anti-myeloperoxidase antibodies.</a> Front Immunol. 10, 2603(2019).</li>
<li>Mosca, T., Forte, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficiency+and+impact+on+the+activity+of+blood+neutrophils+isolated+by+Percoll%2C+Ficoll+and+spontaneous+sedimentation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Comparative efficiency and impact on the activity of blood neutrophils isolated by Percoll, Ficoll and spontaneous sedimentation methods.</a> Immunol Invest. 45 (1), 29-37 (2016).</li>
<li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+apoptotic+neutrophils+and+macrophages+and+impaired+macrophage+phagocytic+clearance+of+apoptotic+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Increased apoptotic neutrophils and macrophages and impaired macrophage phagocytic clearance of apoptotic neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 48 (10), 2888-2897 (2003).</li>
<li>Connelly, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+the+accurate+characterization+of+whole+blood+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for the accurate characterization of whole blood neutrophils.</a> Sci Rep. 12 (1), 3667(2022).</li>
<li>Carmona-Rivera, C., Kaplan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+in+systemic+autoimmunity+and+autoinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes in systemic autoimmunity and autoinflammation.</a> Immunol Rev. 314 (1), 313-325 (2023).</li>
<li>Yennemadi, A. S., Keane, J., Leisching, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+bioenergetic+changes+in+systemic+lupus+erythematosus+immune+cell+subsets%3A+Contributions+to+pathogenesis+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial bioenergetic changes in systemic lupus erythematosus immune cell subsets: Contributions to pathogenesis and clinical applications.</a> Lupus. 32 (5), 603-611 (2023).</li>
<li>Futoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+low-density+granulocytes+after+colorectal+cancer+surgery+in+predicting+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22BJS+Open%22%5BJournal%5D)">Peripheral low-density granulocytes after colorectal cancer surgery in predicting recurrence.</a> BJS Open. 7 (1), zrac154(2023).</li>
<li>Dwivedi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+dysfunctional+neutrophils+with+a+defect+in+arginase-1+release+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Emergence of dysfunctional neutrophils with a defect in arginase-1 release in severe COVID-19.</a> JCI Insight. 9 (17), e171659(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Provetta a fondo tondo in polipropilene da 14 mL (17 x 100 mm)</td><td>Corning Science</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-umano CD14 (63D3)</td><td>BioLegend</td><td>367118</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-umano CD10 (25 test)</td><td>BioLegend</td><td>312217</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco</td><td>Sigma</td><td>D8537-1L</td><td></td></tr><tr><td>EasyEights EasySep Magnete</td><td>StemCell Technologies</td><td>#18103</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Buffer (tampone per la separazione cellulare)</td><td>StemCell Technologies</td><td>#20144</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Direct Human Neutrophil Isolation Kit</td><td>StemCell Technologies</td><td>#19666</td><td></td></tr><tr><td>FcR Blocking Reagent, umano</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-umano CD16 (3G8)</td><td>BioLegend</td><td>302005</td><td></td></tr><tr><td>Perline di compensazione OneComp eBeads</td><td>eBioscience Inc.</td><td>01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 anti-umano CD86 (BU63)</td><td>BioLegend</td><td>374209</td><td></td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 anti-umano CD15 (SSEA-1)</td><td>BioLegend</td><td>323037</td><td></td></tr><tr><td>compresse saline tamponate con fosfato&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td></td></tr><tr><td>Kit di vitalità fissabile Zombie NIR</td><td>BioLegend</td><td>423105</td><td></td></tr></tbody></table>

l'isolamento e la caratterizzazione di neutrofili a bassa e normale densità da sangue intero

The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood

La stratificazione di successo dei neutrofili totali sul mezzo del gradiente di densità può essere osservata nella Figura 1B. Si dovrebbero ottenere due bande distinte. Se si verifica un mescolamento dei gradienti, o il numero totale di neutrofili stratificati per provetta è elevato (maggiore di circa 5-6 × 106), le bande appariranno diffuse (Figura 1C) e il rischio che i due sottotipi di neutrofili si mescolino aumenti significativamente. Per evitare...

L'isolamento e la caratterizzazione di neutrofili a bassa e normale densità da sangue intero

Emerging research shows that the circulating neutrophil population in humans consists of diverse subtypes and should not be studied as a single ...

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Immunologia e Infezioni

I neutrofili sono tra le prime cellule ad arrivare sul luogo del infiammatoria risposta immunitaria, e le loro funzioni e meccanismi sono stati ampiamente studiata in vitro. Si dimostra uno standard gradiente di densità metodo di separazione per isolare neutrofili umani da sangue intero utilizzando mezzi di separazione disponibili in commercio.

Neutrofili isolamento Protocollo

In questo video, descriviamo la procedura per isolare i neutrofili a bassa densità, o LDN, dal liquido di lavaggio peritoneale di un paziente umano postoperatorio. Le LDN così ottenute possono essere utilizzate in ulteriori esperimenti a valle per comprendere il loro ruolo nella crescita e nella progressione tumorale.

Isolamento peritoneale dei neutrofili a bassa densità: una tecnica per ottenere neutrofili a bassa densità dal liquido di lavaggio peritoneale utilizzando la selezione cellulare attivata magneticamente

In questo video, dimostriamo l'isolamento di neutrofili citotossici ad alta densità e neutrofili a bassa densità dal sangue di un topo portatore di tumore mediante centrifugazione discontinua in gradiente di saccarosio.

Isolamento di neutrofili citotossici dal sangue di topo portatore di tumore

Questo video mostra un test in vitro per studiare l'interazione neutrofilo-biofilm. I batteri patogeni incorporati nel biofilm e i neutrofili isolati sono stati marcati utilizzando etichette fluorescenti e la risposta immunitaria dei neutrofili e l'evasione della risposta immunitaria da parte dei batteri sono state valutate utilizzando un microscopio a fluorescenza.

Un test in vitro per studiare l'interazione tra neutrofili e biofilm

I neutrofili svolgono un ruolo importante non solo nella difesa dell'ospite contro i microrganismi invasori, ma sono anche coinvolti nella sorveglianza immunitaria delle cellule tumorali. Qui, descriviamo le tecniche relative all'isolamento di neutrofili con proprietà antitumorali e i metodi per monitorare la funzione dei neutrofili antitumorali in vitro e in vivo.

Isolamento e caratterizzazione di neutrofili con proprietà antitumorali

I neutrofili sono il tipo più abbondante di globuli bianchi. L'isolamento dei neutrofili dal sangue umano mediante il metodo di separazione del gradiente di densità e la differenziazione delle cellule promielocitiche umane (HL60) lungo la via granulocitaria sono descritti qui; testare il loro ruolo sulla sensibilità delle cellule di linfoma agli agenti anti-linfoma.

Neutrofili Isolamento e analisi per determinare il loro ruolo nel linfoma a cellule sensibilità agli agenti terapeutici

Nuovi protocolli sono descritti qui per isolare e caratterizzare microparticelle derivate dall'essere umano e del mouse neutrofili. Questi protocolli utilizzano ultracentrifugazione, citometria a flusso e tecniche di immunoblotting per analizzare il contenuto di microparticelle, e sono utilizzabili per studiare il ruolo delle microparticelle derivate da vari tipi di cellule nella funzione cellulare.

Isolamento e caratterizzazione delle microparticelle neutrofilo per studi funzionali

Questo protocollo descrive un'analisi di trappola extracellulari del neutrofilo (NET) altamente sensibile e ad alto rendimento per la quantificazione semiautomatizzata di ex vivo NET formazione mediante microscopia confocale tridimensionale di immunofluorescenza. Questo protocollo può essere utilizzato per valutare la formazione netta e degrado dopo stimoli diversi e può essere utilizzato per lo studio di potenziali terapie mirate al NET.

Un'analisi di High-throughput per valutare e quantificare la trappola extracellulari del neutrofilo formazione

Questo protocollo descrive un metodo per l'isolamento dei neutrofili dal sangue intero, dai cappotti buffy o dalle membrane di leucaferesi, ottenendo una buona resa, un'elevata purezza e un'attivazione cellulare minima. Utilizziamo la purificazione a gradiente, la sedimentazione dei globuli rossi (RBC) e la lisi dei globuli rossi per ottenere una preparazione neutrofila di alta qualità / purezza.

Isolamento dei neutrofili umani da Whole Blood e Buffy Coats

Questa ricerca delinea due tecniche per isolare abbondanti trappole extracellulari neutrofile (NET) dal midollo osseo di ratto. Un metodo combina un kit commerciale di isolamento dei neutrofili con la centrifugazione a gradiente di densità, mentre l'altro impiega solo la centrifugazione a gradiente di densità. Entrambi gli approcci producono NET funzionali che superano quelli dei neutrofili del sangue periferico.

Approccio unico per l'isolamento di neutrofili del midollo osseo di ratto con capacità comparabili

I neutrofili a bassa densità (LDN) aumentano significativamente in diverse malattie. Le LDN sono solitamente isolate attraverso la selezione cellulare. Presentiamo un metodo pratico per ottenere LDN puro e vitale. Dopo la centrifugazione in gradiente di densità del sangue periferico, le cellule vengono incubate con microsfere magnetiche e quindi le LDN vengono separate attraverso colonne magnetiche.

Metodo rapido con microsfere magnetiche per la purificazione efficiente dei neutrofili a bassa densità

Scopri un protocollo per isolare neutrofili a bassa e normale densità da sangue umano mediante centrifugazione a gradiente di densità e isolamento magnetico negativo. Questo metodo garantisce alta purezza e viabilità cellulare per studi avanzati sull'eterogeneità neutrofilica.

L'isolamento e la caratterizzazione di neutrofili a bassa e normale densità da sangue intero

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