Modello murino di parodontite avanzata indotta da legatura di nylon nel secondo molare superiore

Lo scopo della nostra ricerca è quello di studiare i fattori cellulari e molecolari che favoriscono la parodontite per la quale utilizziamo un modello murino di parodontite indotta da legature.

Recenti ricerche hanno stabilito l'importanza dell'infiammazione. La disbiosi e le malattie sistemiche sono fattori determinanti nello sviluppo della parodontite.

La tecnologia recentemente utilizzata in parodontologia include modelli animali, alcuni cercano diverse molecole, sequenziamento proteomico, citometria a flusso e istologia, tra gli altri.

Le attuali sfide sperimentali sono legate alla comprensione dell'interazione tra malattie sistemiche e parodontite.

Utilizziamo un modello murino di parodontite da legatura per dimostrare che le citochine pro-infiammatorie A e S sono coinvolte nello sviluppo della parodontite durante la gravidanza.

[Narratore] Per iniziare, posizionare un mouse anestetizzato su un tavolo di lavoro rivolto verso l'alto con la testa rivolta verso l'operatore. Tirare delicatamente ogni gamba senza tensione e fissarla con del nastro microporoso per evitare movimenti involontari improvvisi. Copri il topo con una coperta o una garza per mantenere il calore corporeo. Posizionare un'estremità di un elastico ortodontico attorno agli incisivi superiori e fissare l'altra estremità a un supporto superiore senza applicare tensione. Quindi posizionare un secondo elastico ortodontico attorno agli incisivi inferiori e fissarlo a un supporto inferiore utilizzando un elastico. Ora inserisci i separatori delle guance e sposta con cautela la lingua da un lato per migliorare la visibilità. Posizionare il microscopio per visualizzare i molari superiori utilizzando l'obiettivo di ingrandimento più basso. Una volta individuato, aumenta l'ingrandimento per ottimizzare il comfort e la messa a fuoco per l'operatore. Quando l'immagine è chiara, identificare il molare più grande e prossimale M1, il molare successivo M2 e il molare più piccolo e distale M3. Utilizzare una sutura in nylon 6-0 per il posizionamento della legatura in quanto provoca meno danni meccanici rispetto alle suture più larghe. Utilizzando una pinza per tessuti, tenere la punta distale della sutura di nylon 6-0 e posizionarla alla base della papilla dal lato palatino al distale di M2. Applicare una leggera pressione attraverso la base dello spazio palatale interprossimale per farlo avanzare verso la superficie buccale. Quando la sutura si incrocia, tirarla attraverso lo spazio interprossimale verso il lato vestibolare. Ora, posiziona la punta della sutura alla base dell'area interprossimale sulla superficie mesiale di M2 dal lato vestibolare. Spingerlo delicatamente per attraversare lo spazio interprossimale e ripassarlo attraverso lo spazio vestibolare fino al palatino. Tirare delicatamente la sutura in nylon 6-0. Tenere la punta con una pinza per tessuti regolata intorno a M2 e fissare la sutura utilizzando tre semplici nodi. Quindi tagliare la sutura con le forbici sottili. Per rilasciare il topo, rimuovere prima l'elastico attorno agli incisivi inferiori e poi i separatori delle guance. Quindi rimuovere l'elastico intorno agli incisivi superiori e il nastro microporoso dalle gambe. Ora rimuovi il mouse dal tavolo di lavoro e tieni la lingua da un lato per mantenere le vie aeree aperte ed evitare il blocco. Avvolgi il mouse in una garza o in un panno e posizionalo a faccia in su. Tenere l'animale al caldo, coperto con un panno o una garza, e sotto osservazione fino a quando non è completamente sveglio. Applicare una goccia di ipromellosa in ciascun occhio fino a quando il mouse non può sbattere le palpebre normalmente. Quindi, rimettilo nella sua gabbia normale. Per verificare la permanenza della legatura, prendi il mouse. Tenere saldamente la testa e il corpo e usare una pinza per tessuti per aprire la bocca. Sotto la luce della lampada, osservare la sutura di nylon 6-0 attorno a M2. Per la conferma della formazione del biofilm mediante istologia, prelevare i maxilli da animali soppressi dopo 30 giorni. Lavare i fazzoletti in una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% e metterli in provette da microcentrifuga etichettate. Fissare i campioni in una soluzione di paraformaldeide al 4% per due ore sotto agitazione. Quindi, lavare i campioni fissati con acqua di rubinetto per due ore. Successivamente, decalcificare i campioni in 20 volumi di EDTA al 4% a pH 7,3 per 20 giorni, sostituendo l'EDTA ogni quattro giorni. Quindi, incorporare i campioni nella paraffina. Tagliare sezioni di cinque micrometri dall'area M2 e colorarle con ematossilina ed eosina. Osservare le sezioni colorate al microscopio ottico per descrivere i cambiamenti nell'epitelio del solco, nelle fibre gengivali e parodontali, nell'altezza e nell'integrità della cresta alveolare. Misura la perdita di attacco determinando la distanza tra la giunzione dello smalto cemento e il punto più alto della cresta ossea utilizzando un programma di editing digitale. Dopo l'analisi istometrica, analizzare i dati dei gruppi di controllo e di trattamento parodontale utilizzando il test U di Mann-Whitney. La parodontite induce perdita di tessuto nei topi, infiammazione, sanguinamento e formazione di tasche parodontali al margine gengivale entro il giorno 30, a differenza del gruppo di controllo. L'analisi istologica ha confermato un danno strutturale significativo nel gruppo PT, con presenza di tasche parodontali, distacco delle fibre e migrazione apicale dell'epitelio. È stata osservata anche la perdita di nuclei cellulari nella gengiva e nell'osso dei lati buccale e palatale. Al contrario, il gruppo CTL ha mostrato un'istologia sana. L'analisi quantitativa ha rivelato un aumento significativo della perdita di attacco nel gruppo PT con perdita del lato buccale a circa 209 micrometri e del lato palatino a circa 254 micrometri.