Name: Caratterizzazione dellautoassemblaggio reversibile pH-dipendente di colloidi doro rivestiti di amiloide beta 1-40 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Scopri l'autoassemblaggio reversibile pH-dipendente di colloidi d'oro rivestiti di amiloide beta 1-40. Questo metodo SERS rivela le modalità vibrazionali chiave che influenzano il ripiegamento proteico in neuroscienza.

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1. Preparazione di nanoparticelle d'oro rivestite Aβ 1-40
<ol>
	<li>Aggiungere un volume di 1 mL di acqua distillata deionizzata a 1 mg di Aβ 1-40 liofilizzato (MW: 4,2 kDa, purezza HPLC al 98%) utilizzando un ago per siringa. Miscelare la soluzione con un miscelatore a vortice per circa 30 s e assicurarsi che non si osservino particelle solide nella soluzione a temperatura ambiente (RT; ~20 °C).<ol>
		<li>Preparare tutte le soluzioni madre utilizzando acqua deionizzata e distillata (~18 MΩ·cm).</li>
		<li>Identifica spettroscopicamente la concentrazione utilizzando l'assorbimento della tirosina a 275 nm32, che ha un coefficiente di estinzione molecolare ε275 di 1390 cm-1· M-1.</li>
		<li>Conservare le soluzioni madre di Aβ 1-40 a -80 °C. (Vedi Tabella dei materiali per i prodotti commerciali di Aβ 1-40.)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Scongelare la soluzione madre di peptidi circa 5 minuti prima della raccolta dei dati. Miscelare un volume di 8 μl della soluzione peptidica con 800 μl di particelle colloidali d'oro in una provetta da centrifuga da 15 mL. Aggiungere un volume di 4,2 mL di acqua distillata deionizzata e quindi agitare il campione per 10 s 30,31,33,34.</li>
	<li>Fissare la concentrazione di peptidi Aβ 1-40 a 1,8 nmol e variare il rapporto tra peptidi Aβ 1-40. Il numero di colloidi d'oro variava tra ~500:1 e ~2000:125.</li>
</ol>
2. Variazione iterativa del pH e monitoraggio del corrispondente spostamento della banda SPR
<ol>
	<li>Impostare la temperatura della soluzione a un determinato valore (ad es. 25 °C) utilizzando l'unità di controllo della temperatura dello spettrofotometro ultravioletto-visibile-vicino infrarosso (UV-Vis-NIR).</li>
	<li>Monitorare il pH iniziale della soluzione campione utilizzando un pHmetro e impostarlo leggermente al di sotto di pH 7. Raccogliere lo spettro di assorbimento nell'intervallo compreso tra 400 nm e 1000 nm.</li>
	<li>Modificare il pH del campione a ~pH 4 (cioè pH 4,0 ± 0,3) aggiungendo 10 μL di volumi di 0,1 M HCl e raccogliere lo spettro di assorbimento tra 400 nm e 1000 nm.</li>
	<li>Modificare il pH del campione a ~pH 10 (cioè pH 10 ± 0,3) aggiungendo 10 μL di volumi di 0,1 M NaOH e raccogliere lo spettro di assorbimento tra 400 nm e 1000 nm.</li>
	<li>Modificare il pH tra pH 4 e pH 10 con HCl e NaOH 10 volte e raccogliere lo spettro di assorbimento in modo continuo a 25 ± 0,2 °C29,30. NOTA: Per tutte le soluzioni campione, la densità ottica del picco della banda SPR è stata mantenuta intorno a 0,2. È previsto un effetto tampone dovuto alla soluzione tampone residua in una soluzione. Pertanto, il valore finale del pH è stato determinato dopo la conferma dell'equilibrio. Il valore del pH è stato misurato direttamente in una cella in cuvetta campione utilizzando un micro elettrodo di pH, che ha una precisione di ±0,005 pH.</li>
	<li>Ottenere il set di dati ASCII (American Standard Code for Information Interchange) delle lunghezze d'onda in funzione dell'assorbanza. Estrarre la posizione media dei picchi di banda utilizzando il programma Peak Fit .<ol>
		<li>Traccia il set di dati per visualizzare la densità ottica in funzione della lunghezza d'onda (nm) utilizzando la funzione Traccia .</li>
		<li>Contrassegnare le lunghezze d'onda di picco iniziali λ1, λ2 e λ3 selezionando le loro posizioni approssimative nei dati tracciati e adattare i dati utilizzando la funzione RUN .</li>
		<li>Ottenere il grafico contenente il picco centrale di ciascuno (λi), XCi, con l'area di ogni banda (Ai).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Esporta le posizioni e le aree dei picchi estratti in un foglio di calcolo e calcola la posizione media dei picchi a un dato pH.<ol>
		<li>Determinare il fattore di ponderazione ai di ciascun centro di picco λi confrontando l'area della banda (Ai) con l'area totale delle bande intere come: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq01.jpg" style="margin: auto;">.</li>
		<li>Estrarre la posizione media del picco, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> (pH) utilizzando Eqn. (1). 
		<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq03.jpg" style="margin: auto;">(1)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Generare un grafico di reversibilità utilizzando il seguente processo:<ol>
		<li>Tabella delle posizioni medie dei picchi, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">, in funzione di ciascun numero di "operazione", n come <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> vs. n. Rendere il numero di operazione, n, 1 per il campione prima dell'aggiunta di acido a ~pH 7. Aumentare il numero di operazioni di 1 ogni volta, modificando il pH in ~pH4 con HCl o pH in ~pH 10 con NaOH. Fa n per essere pari a una condizione acida (cioè ~pH 4) e dispari per essere una condizione basica (cioè pH 10).</li>
		<li>Analizza la posizione del picco ad ogni n, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> (n) = λ(n), utilizzando la formula30 
		<img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq04.jpg" style="margin: auto;">(2) NOTA: Rappresentare una posizione di picco media iniziale a n = 1 per A. Esprimere i parametri B e C come spostamento della posizione di picco dipendente da n. Sia il parametro D come ampiezza del fattore di smorzamento, E, di ripetizione. Utilizzare la funzione seno per mostrare l'ondulazione della posizione del picco in funzione di n.</li>
		<li>Trasporta il set di dati di (x, y) al software Origin e traccialo.</li>
		<li>Forma la funzione personalizzata data nell'Eqn. (2) in Funzione di adattamento della curva non lineare dell'analisi. Digitate i valori iniziali di A, B, C, D ed E e fate clic su RUN per completare l'adattamento.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Imaging TEM<ol>
		<li>Realizzare i campioni TEM dei colloidi d'oro da 20 nm rivestiti in Aβ 1-40 con griglie di rame rivestite in Formvar. Esaminare i campioni con un TEM funzionante a 80 kV.</li>
		<li>Raccogli immagini con un ingrandimento nominale di 28.000x o 71.000x su una fotocamera digitale CCD (AMT) XR-40 da 4 megapixel. Raccogli le immagini TEM per l'oro da 20 nm rivestito Aβ 1-40 ad ogni numero di operazione n = 1 (~pH 7), n = 2, 4, 6, 8 e 10 (pH 4) e n = 3, 5, 7 e 9 (pH 10).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Imaging Raman e studio dell'aggregazione reversibile
<ol>
	<li>Porre 100 μl di soluzione su un disco di mica (diametro di 1 cm) per ciascun campione al numero di operazione n. Asciugare i campioni durante la notte prima della misurazione.</li>
	<li>Raccogliere immagini a luce bianca ad ogni operazione numero n. Preparare il campione separato su un disco di mica poiché il pH è stato continuamente alterato tra ~pH 4 e ~pH 10 per ogni numero di operazione n (Figura 3).</li>
	<li>Raccogliere l'immagine Raman ad ogni numero di operazione n con un laser di una lunghezza d'onda di λ = 633 nm a 0,5 ± 0,05 mW di potenza con una risoluzione spaziale di ~0,43 μm in una griglia composta da 100 × 100 pixel con un tempo di integrazione di 500 ms/spettro per la regione compresa tra ~200 cm-1 e ~2.800 cm-1 (Figura 4).</li>
	<li>Tracciare lo spettro rappresentativo per ogni n allineato in funzione di n e costruire lo spettro SERS tridimensionale in funzione di n per Aβ1-40 rivestito in oro da 20 nm (Figura 5A). Utilizzare la vista dall'alto dello spettro SERS tridimensionale come mappa di contorno (Figura 5B) per estrarre le modalità specifiche associate a una particolare condizione di pH (ad esempio, ~pH 4 e ~pH 10). Estrae tutte le caratteristiche spettrali migliorate per solo npari o solo ndispari.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Il peptide beta amiloide 1-40 (A&beta; 1&ndash; 40 peptide)</td><td>r-Peptide (Bogart, GA, USA)</td><td>A-1156-2</td><td></td></tr><tr><td>CCD</td><td>fotocamera digitale AMT</td><td>XR-40 CCD da 4 megapixel</td><td></td></tr><tr><td>Acqua distillata deionizzata dal sistema idrico Milli-Q</td><td>Millipore Sigma (Burlington, MA, USA)</td><td>Milli-Q IQ 7000</td><td></td></tr><tr><td>Freezer -86 oC</td><td>Thermo Scientific</td><td>Revco Chilly Willy&nbsp; Numero 187004 di build 40.04</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (10 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15703-20</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (100 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15711-22</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (15 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15704-20</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (20 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15705-20</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (30 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15706-21</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (40 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15707-21</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (50 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15708-21</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (60 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15709-22</td><td></td></tr><tr><td>Colloide d'oro (80 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15710-22</td><td></td></tr><tr><td>Dischi di mica V1AFM di grado più elevato 10 mm</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>#50</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione standard di acido cloridrico, 1.0 N</td><td>Fluka</td><td>Lot# SHBB4705V&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 318949-2L</td><td></td></tr><tr><td>Macro quarzo quvette Light Path 10 mm</td><td>Fire Fly Science&nbsp;</td><td>Tipo1-MC-PathElettrodo micro pH da 10 mm</td><td></td></tr><tr><td></td><td>HORIBA</td><td>Modello 9618S (MFG n. 9Y8E0050)</td><td></td></tr><tr><td>Peak Fit Program</td><td>Origin (Northampton, MA, USA)</td><td>OriginPro2018b (64 bit) b9.5.5.409 (accademico)</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione tampone pH 4.00&nbsp;</td><td>VWR</td><td>Cat No. 34170-127</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione tampone pH 7.00&nbsp;</td><td>Fisher Chemical</td><td>SB107-4 Lotto 191041</td><td></td></tr><tr><td>pHmetro</td><td>HORIBA</td><td>Modello F-72G (MFG n. B27M0017)</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette &nbsp; Maxi Tips 1&ndash; 5 ml di</td><td>Fisher &nbsp;</td><td>02-707-467</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette 10 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-135</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette 1000 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-156</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette 1&ndash; 200 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-143</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta Fisher Brand Elite 0,5 ml; Pipetta</td><td>Fisher</td><td>QU05317</td><td></td>da 5 ml</tr> Fisher <tr><td>Brand Elite 100&ndash; Pipetta</td><td>Fisher</td><td>QU01672</td><td></td>1000 ml</tr><tr><td>Fisher Brand Elite 10&ndash; 100 ml Fisher</td><td></td><td>MU10985</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Fisher Brand Elite 1&ndash; 10 mL</td> di <td>soluzione di</td><td></td> idrossido di sodio Fisher MU08178 <td></td></tr><tr><td>1,0 M</td><td>Lotto Fluka</td><td>#05096BPV&nbsp; &nbsp; 319511-2L</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>FEI Co</td><td>Morgagni modello 268&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Provette per PCR TempAssure, tappi piatti, naturali&nbsp;</td><td>Polipropilene USA Scientific</td><td></td><td>. Provette singole a parete sottile da 0,2 mL con tappi piatti smerigliati attaccati</td></tr><tr><td>Spettrofotometro UV-Vis-NIR</td><td>Varian</td><td>CARY 5000 UV1106M074</td><td></td></tr><tr><td>WI Tec alpha300R Microscopio Raman confocale</td><td>WITec-Oxford Strumento</td><td>XMB3000-3001</td><td></td></tr></tbody></table>

caratterizzazione dell'autoassemblaggio reversibile ph-dipendente di colloidi d'oro rivestiti di amiloide beta 1-40

Characterization of pH-Dependent Reversible Self-Assembly of Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids

Con l'attacco di Aβ 1-40 sulla superficie delle particelle nano-colloidali d'oro, la banda SPR intorno al massimo di assorbimento di 530 nm si è spostata significativamente verso il rosso fino alla posizione di picco di ~650 nm quando la soluzione è stata resa più acida (pH 4)35. Insieme alle immagini TEM, abbiamo identificato che le caratteristiche spettroscopiche osservate a pH 4 corrispondono alla formazione degli aggregati colloidali d'oro con conformazione plausibilmente dispiegata e rete con i monomeri Aβ 1-40 circostanti adsorbiti sulla superficie d'oro30. Abbiamo osservato che i monomeri Aβ 1-40 tornano alla conformazione ripiegata in condizioni basiche (pH 10), determinando una deformazione degli aggregati in modo quasi reversibile. Questo processo quasi reversibile era evidente dall'alternanza del picco medio di banda (<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">(n)), che si spostava tra una lunghezza d'onda più corta e una più lunga, e dalla morfologia dispersa rispetto all'aggregato nelle immagini TEM tra condizioni basiche (pH = 10) e acide (pH = 4). È stato precedentemente osservato che una porzione del monomero Aβ 1-40 rimane dispiegata anche dopo che la soluzione è stata riportata alle condizioni basiche36. Il video 1 mostra il cambiamento di colore dipendente dal pH di Aβ 1-40 e del colloide d'oro nudo da 20 nm.
A titolo di confronto, è stata condotta l'indagine sul pH del luppolo di un colloide d'oro nudo a 20 nm (Figura 5C e D). Man mano che l'operazione di modifica del pH procedeva, ha mostrato la crescita della clusterizzazione dei colloidi d'oro in banda SPR, immagini TEM e immagini a luce bianca. Abbastanza interessante, c'erano diverse linee spettrali SERS che dipendevano da npari e ndispari. Ad esempio, a npari (pH ~4), la linea a 275 cm-1, che è stata assegnata come la modalità associata a Aun (n = 5, 6, 12, 16, 20, 58)37 o la modalità del ligando Au-Cl- 38 è stata osservata intensamente. D'altra parte, per npari, a 1008 cm-1 C-N str è stato osservato39 e CH2 wag39, CH2 la deformazione40 sono stati ampiamente osservati a 1291 cm-1.
In contrasto con la chiara morfologia di aggregazione reversibile e dipendente dal pH osservata dall'imaging a luce bianca, c'erano differenze relativamente sottili nelle caratteristiche spettrali nello spettro SERS tra npari e npari. In prima approssimazione, la densità della linea spettrale nella regione compresa tra 250 cm-1 e 1750 cm-1 era più alta per ndispari che per npari. Le linee spettrali nella regione dell'impronta digitale, 1250 cm-1 e 1750 cm-1 (bande Ammide I, II e III) per nodd hanno mostrato caratteristiche spettrali meno risolte, implicando un ampliamento o un aumento delle densità spettrali. Nella Figura 6, una mappa di contorno data nella Figura 5B (Figura 6B) è stata organizzata con i segnali SERS a 761 cm-1 (rosso) e 1395 cm-1 (blu), che rappresentano le enfasi rispettivamente a ndispari e npari (Figura 6C). Come spettro SERS rappresentativo per npari e dispari, lo spettro SERS a n = 7 (rosso) e n = 4 (blu) è mostrato in alto (Figura 6A). Al fine di mostrare la corrispondenza con lo spostamento di banda SPR per l'oro da 20 nm rivestito con Aβ1-40, il grafico dello spostamento di banda nella Figura 3 è mostrato a lato (Figura 6D).
Mentre abbiamo dati preliminari sull'assegnazione completa dello spettro SERS osservato, notiamo qui diverse caratteristiche notevoli dello spostamento Raman. Le linee spettrali e (assegnazioni plausibili) aumentate in nodd sono principalmente nella regione inferiore a 1000 cm-1: 394 cm-1 (Trp)41,42,43, 761 cm-1 (His, Ala)39,44,45,46,47, 875 cm-1 (spostamento dell'indolo NH, allungamento C-C di Met)39, 974 cm-1 (Glu, C-COO- stretching di Asp, modalità associata al citrato)39,48,49. Lo spostamento Raman potenziato a nha anche mostrato caratteristiche spettroscopiche significative nella regione dell'impronta digitale (Ammide I, II e III): 1166 cm-1 (deformazione N-H+ di Tyr)39,41, 1227 cm-1 (Ala-Pro-Gly, Ammide III)39,50,51, 1395 cm-1 (COO- allungamento simmetrico o CH2- CH3- forbice di Glu)39,48, 1585 cm-1 (allungamento CC dell'anello di Phe, allungamento asimmetrico del carbossilato -Au, COO- stiramento del citrato, deformazione dell'anello benzenico)39,41,45,46,47,49,52, 1592 cm-1 (Phe, Tyr, C=C allungamento di Tyr, CC stiramento dell'anello in Phe, allungamento dell'anello benzenico e COO- stretching in Phe e Tyr, e stretching asimmetrico di OH)39,41,48,50,51 e 1628 cm-1 (Amide I sub peak distintivo per strutture intermolecolari a foglioβ 53, C=O e i modi vibrazionali accoppiati CN/NH della spina dorsale proteica originata da strutture parallele di tipo β-sheet, accumulo di Aβ54 aggregato, bobine casuali, β-giri, β-forcine48. Le sequenze che appaiono per npari o dispari sono mostrate nella Figura 7. Nel complesso, per nanche corrispondente all'aggregazione reversibile o alla conformazione dispiegata di Aβ 1-40, Phe/Tyr contenente anello benzenico, lo stiramento simmetrico di COO-, la modalità di forbice CH 2- CH 3- di Glu e la deformazione -NH+ di Tyr sono stati significativamente coinvolti nel cambiamento conformazionale del peptide. Durante il disassemblaggio dell'aggregazione che è stato osservato quando i peptidi hanno adottato la conformazione ripiegata corrispondente ai modi prominenti a ndispari, Glu, Asp, Met, His e Ala sembravano essere coinvolti.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig01.jpg"> 
Figura 1: L'assorbanza e la morfologia dipendenti dal pH. Vengono mostrati lo spettro di assorbimento a pH 4 (A) e pH 10 (B) per nanoparticelle d'oro rivestite di Aβ 1-40 (20 nm) e le corrispondenti immagini TEM, schizzi di particelle di aggregazione/disperse e immagini di soluzioni in fiale. A è la conformazione dispiegata dei monomeri Aβ 1-40 in condizioni acide e B è la conformazione ripiegata in condizioni basiche. I diagrammi dei monomeri Aβ 1-40 in ciascuna conformazione e morfologia di aggregazione/dispersione sono mostrati accanto alle immagini TEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig02.jpg"> 
Figura 2: Reversibilità dell'autoassemblaggio dipendente dalle dimensioni nanometriche. Lo spostamento della posizione media del picco della banda SPR, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">, in funzione del numero di operazione, n, per tutte le dimensioni testate delle particelle colloidali d'oro. Vengono forniti anche i valori approssimativi di pH e lo stadio corrispondente degli aggregati mostrati nella Figura 1 . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig03v2.jpg"> 
Figura 3: <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq05.jpg" style="margin: auto;"> e immagini TEM/luce bianca ad ogni numero di operazione. In <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> funzione del numero di operazione, n, è stato tracciato insieme per Aβ 1-40 rivestito in oro da 20 nm (cerchi chiusi) e in oro da 20 nm colloidale (cerchi aperti) ed è mostrato con immagini rappresentative TEM (A e C)/a luce bianca (B e D) ai numeri di operazione selezionati (n = 1, 2, 3, 7 e 8 contrassegnati da frecce decodificate) per Aβ 1-40 rivestito in oro da 20 nm (A e B) e 20 nm in oro colloidale (C e D). Il carattere nero indica pH 7, il carattere blu indica pH 4 e il carattere rosso indica pH 10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig04.jpg"> 
Figura 4: Luce bianca rappresentativa e immagine Raman. L'immagine a luce bianca, l'immagine Raman e lo spettro SERS per (A) n = 2 e (B) n = 3; i) immagine a luce bianca in un ampio campo visivo, ii) immagine a luce bianca nell'area in cui è stata raccolta l'immagine Raman (etichettata da un quadrato rosso in i)), iii) l'immagine Raman di due componenti combinati, iv) immagine Raman della componente 1 e il suo spettro v) SERS di iv), vi) immagine Raman della componente 2, e vii) spettro SERS di vi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig05.jpg"> 
Figura 5: Mappa di contorno dello spettro SERS per ndispari, npari e ntutti. (A) La mappa tridimensionale dello spettro SERS nella regione di 250 cm-1 e 1750 cm-1 in funzione di n per Aβ1-40 rivestito di oro da 20 nm con una mappa di contorno mostrata in (B) in alto. (C) La mappa tridimensionale dello spettro SERS nella regione di 250 cm-1 e 1750 cm-1 in funzione di n per l'oro a 20 nm con una mappa di contorno mostrata in (D) in alto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig06v2.jpg"> 
Figura 6: Mappa di contorno dello spettro SERS. La mappa di contorno dello spettro SERS in funzione di n (1-10). (A) Assorbanza a 1395 cm-1 (blu) e 761 cm-1 (rosso). (B-D) Il pannello inferiore mostra lo spettro SERS e il pannello destro mostra l'ampiezza della variazione di intensità del segnale dei segnali SERS ad ogni n. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig06largev2.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig07v3.jpg"> 
Figura 7: Sequenze notevoli di Aβ1-40. Le sequenze assegnate ad avere un coinvolgimento significativo a ndispari (corrispondente alla formazione di conformazione ripiegata) sono indicate da frecce rosse verso il basso, e quelle assegnate ad avere un coinvolgimento significativo a npari (corrispondente alla formazione di conformazione dispiegata) sono indicate da frecce blu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig07largev3.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Video 1: Variazione di colore dipendente dal pH di Aβ1-40 e colloide d'oro nudo da 20 nm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/Movie%20Abeta-Gold%20Color%20Change.wmv" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>

Caratterizzazione dell'autoassemblaggio reversibile pH-dipendente di colloidi d'oro rivestiti di amiloide beta 1-40

The characterization of A&#946;1-40 coated over the nano-gold colloidal particle surfaces was conducted using surface plasmon resonance (SPR) spectroscopy ...

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Selezione di Aptamers per β-amiloide proteina, l&#39;agente eziologico della malattia di Alzheimer

Un metodo per la grande purificazione del dominio intracellulare APP (AICD) è descritto. Abbiamo anche descrivere la metodologia di...

Purificazione e aggregazione della proteina precursore dell&#39;amiloide dominio intracellulare

Le proteine possono adottare una struttura nativa o ripiegarsi erroneamente in amiloide insolubile. Le condizioni che favoriscono la via del ripiegamento errato portano alla formazione di diversi tipi di fibrille amiloidi. I metodi qui descritti consentono una rapida conversione di proteine native in amiloide in vitro.

Generazione rapida di amiloide da proteine native in vitro

Qui riportiamo un protocollo di purificazione HPLC su misura che produce peptidi di amiloide-beta 42 (Aβ42) e amiloide-beta 40 (Aβ40) ad alta purezza, in grado di formare oligomeri. L'amiloide-beta è un peptide idrofobico altamente incline all'aggregazione implicato nella malattia di Alzheimer. La natura amiloidogenica del peptide rende la sua purificazione una sfida.

Un Tailored HPLC purificazione protocollo che i rendimenti di elevata purezza beta-amiloide 42 e beta amiloide 40 peptidi, in grado di Oligomer Formazione

Questo protocollo descrive come preparare oligomeri Aβ da un peptide sintetico in vitro e per valutare la quantità relativa di oligomero Aβ da un punto di analisi macchiante.

Oligomero di β-amiloide a11-positiva preparazione e valutazione utilizzando Dot Blotting analisi

Un protocollo per la sintesi di un 1,2-dithiolane modificato peptide e la caratterizzazione delle strutture supramolecolari derivanti dal peptide self-assembly.

Sintesi e caratterizzazione di 1,2-Dithiolane per volta peptidi autoassemblanti

Presentato qui sono due metodi che possono essere utilizzati singolarmente o in combinazione per analizzare l'effetto di beta-amiloide sulla struttura del coagulo di fibrina. È incluso un protocollo per creazione di coagulo di fibrina in vitro , seguita da coagulo torbidità e microscopia elettronica di esame metodi.

Analisi delle anomalie indotta da β-amiloide sulla struttura di coagulo di fibrina di spettroscopia e microscopia elettronica a scansione

Questo metodo di purificazione biochimica con analisi proteomica basata sulla spettrometria di massa facilita la robusta caratterizzazione dei nuclei di fibrille amiloidi, che possono accelerare l'identificazione di bersagli per la prevenzione della malattia di Alzheimer.

Purificazione biochimica e caratterizzazione proteomica dei nuclei di fibrille amiloidi dal cervello

Le fibrille amiloidi sono formate da numerose proteine, e le fibrille risultanti condividono una struttura a "foglio β incrociato". Qui descriviamo come i campioni di fibrilla amiloide possono essere preparati per la diffrazione delle fibre a raggi X e come i pattern possono essere analizzati.

Amiloid e l'architettura Cross-Beta

Scopri l'autoassemblaggio reversibile pH-dipendente di colloidi d'oro rivestiti di amiloide beta 1-40. Questo metodo SERS rivela le modalità vibrazionali chiave che influenzano il ripiegamento proteico in neuroscienza.

Caratterizzazione dell'autoassemblaggio reversibile pH-dipendente di colloidi d'oro rivestiti di amiloide beta 1-40

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