Name: Previsione del significato degli anticorpi dei globuli rossi utilizzando il test dei monociti-macrofagi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Scopri il test dei monociti-macrofagi per prevedere la rilevanza clinica degli anticorpi dei globuli rossi in medicina trasfusionale. Questo metodo migliora la sensibilità rispetto al tradizionale saggio MMA.

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<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS, pH 7,4, senza Ca2+/Mg2+</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>311-425-CL</td><td>Conservare a 4 gradi o a temperatura ambiente&nbsp;</td></tr><tr><td>Tecnologie AccutaseTM</td><td>STEMCELL&nbsp;</td><td>7920</td><td>Soluzione di distacco cellulare</td></tr><tr><td>ACK Tampone di lisi&nbsp;</td><td>Tecnologie STEMCELL&nbsp;</td><td>07850, 07800</td><td>Conservare a 4 gradi</td></tr><tr><td>Anti-Globulina Umana</td><td>NOVACLONE, Immunocor.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE Anti-igG per test IAT&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-Rh(D) (WinRho. SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp;</td><td>1003092</td><td>Qualsiasi fonte commerciale di immunoglobina Rh sarà sufficiente.</td></tr><tr><td>Raschietto cellulare</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td><td>distacco di cellule&nbsp;</td></tr><tr><td>Filtro cellulare 70uM nylon</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>filtro di celle&nbsp;</td></tr><tr><td>Vetrino da camera Nunc. Lab-TekTM II con coperchio, vetrino in vetro RS sterile&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Vetrini a</td><td>camera 154534 per MMA&nbsp;</td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti&nbsp;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 mm</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus, densità 1,077 g/L</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>17-1440-03</td><td>separazione di PBMCS da sangue intero; gradiente di densità medio</td></tr><tr><td>Elvanol Mezzo di montaggio</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dulbecco' s PBS (D-PBS) senza Ca2+/Mg2+, 15% (p/v) resina polivinilica e 30% (v/v) glicerina.</td></tr><tr><td>Sangue intero fresco (provetta ACD) o Buffy coat</td><td>Canadian Blood Services</td><td></td><td>Può riposare a temperatura ambiente per un massimo di 36 ore.</td></tr><tr>Tecnologie delle cellule staminali <td>GM-CSF ricombinanti umane</td><td>&nbsp;</td><td>78015.1</td><td>Citochina per la polarizzazione dei macrofagi M1</td></tr><tr><td>IFN-gamma ricombinante umano</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>78020</td><td>Citochina per la polarizzazione dei macrofagi M1</td></tr><tr><td>Tecnologie STEM CELL</td> <td>umane ricombinanti IL-4</td><td>78045.1</td><td>Citochina per la polarizzazione dei macrofagi M2</td></tr><tr>Cellule staminali<td>M-CSF ricombinanti umane</td><td>Tecnologie&nbsp;</td><td>78057.1</td><td>Citochina per la polarizzazione dei macrofagi M2</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740</td><td>Soluzione per la conservazione/stabilizzazione delle cellule RBC&nbsp;</td></tr><tr><td>Mezzo di isolamento&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PBS Ca2+ e Mg2+ libero + FBS 2% + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolisaaracide (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>Citochina per la polarizzazione dei macrofagi M1</td></tr><tr><td>Metanolo (100%)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Fissaggio dei vetrini&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit di isolamento dei monociti Kit di arricchimento dei monociti umani EasySep senza deplezione di CD16</td><td>Tecnologie STEMCELL&nbsp;</td><td>19058</td><td>Isolamento di monociti da PBMC</td></tr><tr><td>Poli-D-isina</td><td>UofT Medstore&nbsp;</td><td>P6407</td><td>Soluzione di attacco cellulare&nbsp;</td></tr><tr><td>Rh(D) positivo R2R2 RBC</td><td>Canadian Blood Services</td><td>N/A</td><td>Anche commercialmente disponibile</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>350-000-CL</td><td>integrato con il 10% di FBS inattivato termicamente, 1 mM di integratore GlutaMAX, 1 mM di HEPES e l'1% di penicillina/streptomicina. Conservare a 4 gradi.</td></tr><tr><td>Soluzione Trypan Blue&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15250061</td><td>Soluzione per il conteggio delle cellule&nbsp;</td></tr></tbody></table>

previsione del significato degli anticorpi dei globuli rossi utilizzando il test dei monociti-macrofagi

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

I risultati della Figura 1 sono coerenti con la letteratura e indicano una polarizzazione riuscita dei macrofagi dal loro stato M0 al loro successivo stato M1/M2. I macrofagi M1 e M2 sono stati coltivati per 8 giorni (6 giorni con fattori di crescita e 2 giorni di polarizzazione) e sono stati testati globuli rossi opsonizzati anti-D o anti-k (Figura 2). I macrofagi M2 dimostrano un alto indice fagocitario rispetto agli M1 con globuli rossi opson...

Previsione del significato degli anticorpi dei globuli rossi utilizzando il test dei monociti-macrofagi

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

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Immunologia e Infezioni

Questo video mostra un test monostrato di monociti che utilizza monociti primari provenienti da sangue periferico per valutare la fagocitosi mediata dal recettore Fcγ con globuli rossi R2R2 opsonizzati con anticorpi poli D.

Un test per lo studio della fagocitosi guidata dal recettore Fcγ nei monostrati di monociti

Derivate da monociti macrofagi sono cellule importanti del sistema immune innato. Qui, descriviamo un facile da...

Un<em&gt; In vitro</em&gt; Modello per studiare eterogeneità di differenziazione dei macrofagi umani e polarizzazione

Questo protocollo descrive l'uso della spettrometria di massa MALDI-TOF a cellula intera su cellule eucariotiche. Qui, illustriamo l'accuratezza di questa tecnica analizzando gli stati di attivazione multipli dei macrofagi in risposta al loro microambiente.

Whole-cell MALDI-TOF spettrometria di massa è un metodo accurato e rapido per analizzare diverse modalità di attivazione dei macrofagi

Qui si descrivono due saggi per misurare l'attivazione del complemento indotta da anticorpi contro le cellule rosse del sangue. Il principale vantaggio rispetto ai test attuali è la loro da interpretare facile natura quantitativa e.

Metodi per quantitativa individuazione di anticorpi indotta da attivazione del complemento sui globuli rossi

Presentiamo un protocollo semplice ed efficiente per la generazione di macrofagi umani. Buffy coats sono trattati con doppia centrifugazione in gradiente di densità e monociti isolati sono poi differenziate a macrofagi in sacchi di coltura cellulare teflonato. Questo massimizza i rendimenti macrofagi e facilita la raccolta di cellule per esperimenti successivi.

Isolamento di monociti umani con un doppio centrifugazione in gradiente e la loro differenziazione a macrofagi in coltura cellulare Borse teflonato

Il test monostrato dei monociti (MMA) è un test in vitro che utilizza monociti primari isolati ottenuti da sangue intero periferico di mammifero per valutare la fagocitosi mediata dal recettore Fcγ (FcγR).

L&#39;uso di un monociti monostrato test per valutare fagocitosi Fcy recettore-mediata

Questo protocollo fornisce un'analisi delle subpopulazioni del macrofage nel sistema nervoso centrale del mouse adulto mediante citometria a flusso ed è utile per lo studio di marcatori multipli espressi da queste cellule.

Analisi dei Macrofagi Microglia e dei Monociti dal Sistema Nervoso Centrale dalla Citometria del Flusso

Qui presentiamo un protocollo per la caratterizzazione di sottoinsiemi del monocito mediante citometria di flusso di sangue intero. Ciò include che delinea come cancello i sottoinsiemi e valutare la loro espressione di marcatori di superficie e dando un esempio della valutazione dell'espressione di M1 (infiammatoria) e marcatori M2 (antinfiammatorio).

Caratterizzazione dei sottoinsiemi di monociti umani da sangue intero flusso Cytometry analisi

Qui presentiamo un protocollo per quantificare l'attività chemiotattica dei monociti del sangue nei modelli murini, per valutare gli effetti degli interventi nutrizionali, farmacologici e genetici sul monocito del sangue e per caratterizzare i monociti del sangue derivati dai macrofagi in modelli murini che utilizzano tappi di gel derivati dalla membrana del basato monocite-chemoattractant-1 (MCP-1).

Quantificazione dell'attività chemiotatica monocite in vivo e caratterizzazione dei macrofagi derivati monociti del sangue

L'uso di reagenti di riferimento per il test di rilascio di citochine consente di ottenere profili di sicurezza in vitro più riproducibili e standardizzati degli anticorpi monoclonali immunoterapeutici. Qui descriviamo come i saggi di rilascio di citochine possono essere utilizzati insieme a un pannello di reagenti di riferimento per prevedere la sicurezza di alcuni anticorpi monoclonali terapeutici.

Utilizzo di reagenti di riferimento per confermare la robustezza dei saggi di rilascio di citochine per la previsione della sicurezza degli anticorpi monoclonali

I monociti e i macrofagi sono cellule immunitarie molto plastiche e riprogrammabili, cruciali per la salute e la malattia. Percepiscono e rispondono a un'ampia gamma di stimoli adottando specifici programmi di differenziazione e fenotipi. Abbiamo standardizzato un modello in vitro per studiare la polarizzazione e la riprogrammazione dei macrofagi, fornendo uno strumento prezioso per la ricerca.

Riprogrammazione del modello di macrofagi derivati da monociti umani per saggi in vitro

Scopri il test dei monociti-macrofagi per prevedere la rilevanza clinica degli anticorpi dei globuli rossi in medicina trasfusionale. Questo metodo migliora la sensibilità rispetto al tradizionale saggio MMA.

Previsione del significato degli anticorpi dei globuli rossi utilizzando il test dei monociti-macrofagi

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