Name: Analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Scopri l'analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore. Questo metodo consente di caratterizzare pattern di attivazione distinti indotti da diversi agonisti, avanzando la comprensione delle funzioni piastriniche in contesti patologici come trombosi e infiammazione.

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<ol><li>Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+platelet-dependent+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of platelet-dependent thrombosis.</a> Circulation. 112 (17), 2725-2734 (2005).</li>
<li>Koupenova, M., Kehrel, B. E., Corkrey, H. A., Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis+and+platelets%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Thrombosis and platelets: an update.</a> Eur Heart J. 38 (11), 785-791 (2016).</li>
<li>van der Meijden, P. E. J., Heemskerk, J. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+biology+and+functions%3A+new+concepts+and+clinical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Platelet biology and functions: new concepts and clinical perspectives.</a> Nat Rev Cardiol. 16 (3), 166-179 (2019).</li>
<li>Li, Z., Delaney, M. K., O'Brien, K. A., Du, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+During+Platelet+Adhesion+and+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscl+Thrombosis+Vas+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling During Platelet Adhesion and Activation.</a> Arterioscl Thrombosis Vas Biol. 30 (12), 2341-2349 (2010).</li>
<li>Oishi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+activates+platelets+and+exacerbates+rhabdomyolysis-induced+acute+kidney+injury+via+CLEC-2+and+GPVI%2FFcRgamma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Heme activates platelets and exacerbates rhabdomyolysis-induced acute kidney injury via CLEC-2 and GPVI/FcRgamma.</a> Blood Adv. 5 (7), 2017-2026 (2021).</li>
<li>Bourne, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+induces+human+and+mouse+platelet+activation+through+C-type-lectin-like+receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Heme induces human and mouse platelet activation through C-type-lectin-like receptor-2.</a> Haematologica. 106 (2), 626-629 (2021).</li>
<li>Rohlfing, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP+modulates+hemin-mediated+platelet+death%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">cGMP modulates hemin-mediated platelet death.</a> Thromb Res. 234, 63-74 (2024).</li>
<li>Chu, Y., Guo, H., Zhang, Y., Qiao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+Generation%2C+characteristics%2C+and+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Lab+Anal%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: Generation, characteristics, and therapeutic target.</a> J Clin Lab Anal. 35 (5), e23750(2021).</li>
<li>Sodergren, A. L., Ramstrom, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+subpopulations+remain+despite+strong+dual+agonist+stimulation+and+can+be+characterised+using+a+novel+six-colour+flow+cytometry+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Platelet subpopulations remain despite strong dual agonist stimulation and can be characterised using a novel six-colour flow cytometry protocol.</a> Sci Rep. 8 (1), 1441(2018).</li>
<li>Agbani, E. O., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+generation%2C+function%2C+and+therapeutic+targeting+in+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: generation, function, and therapeutic targeting in thrombosis.</a> Blood. 130 (20), 2171-2179 (2017).</li>
<li>Agbani, E. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+Membrane+Ballooning+and+Procoagulant+Spreading+in+Human+Platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Coordinated Membrane Ballooning and Procoagulant Spreading in Human Platelets.</a> Circulation. 132 (15), 1414-1424 (2015).</li>
<li>Heemskerk, J. W., Mattheij, N. J., Cosemans, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-based+coagulation%3A+different+populations%2C+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet-based coagulation: different populations, different functions.</a> J Thromb Haemost. 11 (1), 2-16 (2013).</li>
<li>Rukoyatkina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+effects+of+arachidonic+acid+and+interaction+with+cyclic+nucleotides+in+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Multifaceted effects of arachidonic acid and interaction with cyclic nucleotides in human platelets.</a> Thromb Res. 171, 22-30 (2018).</li>
<li>Taylor, M. L., Misso, N. L. A., Stewart, G. A., Thompson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Expression+of+Platelet+Activation+Markers+CD62P+and+CD63+Following+Stimulation+with+PAF%2C+Arachidonic+Acid+and+Collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Differential Expression of Platelet Activation Markers CD62P and CD63 Following Stimulation with PAF, Arachidonic Acid and Collagen.</a> Platelets. 6 (6), 394-401 (1995).</li>
<li>van Velzen, J. F., Laros-van Gorkom, B. A., Pop, G. A., van Heerde, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicolor+flow+cytometry+for+evaluation+of+platelet+surface+antigens+and+activation+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Multicolor flow cytometry for evaluation of platelet surface antigens and activation markers.</a> Thromb Res. 130 (1), 92-98 (2012).</li>
<li>Hindle, M. S., Spurgeon, B. E. J., Cheah, L. T., Webb, B. A., Naseem, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multidimensional+flow+cytometry+reveals+novel+platelet+subpopulations+in+response+to+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Multidimensional flow cytometry reveals novel platelet subpopulations in response to prostacyclin.</a> J Thromb Haemost. 19 (7), 1800-1812 (2021).</li>
<li>Johnson, L., Lei, P., Waters, L., Padula, M. P., Marks, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+platelet+subpopulations+in+cryopreserved+platelet+components+using+multi-colour+imaging+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Identification of platelet subpopulations in cryopreserved platelet components using multi-colour imaging flow cytometry.</a> Sci Rep. 13 (1), 1221(2023).</li>
<li>Laspa, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemin-induced+platelet+activation+is+regulated+by+the+ACKR3+chemokine+surface+receptor+and+has+implications+for+passivation+of+vulnerable+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Hemin-induced platelet activation is regulated by the ACKR3 chemokine surface receptor and has implications for passivation of vulnerable atherosclerotic plaques.</a> FEBS J. 291 (24), 5420-5434 (2024).</li>
<li>Mueller, K. A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+Migration+Inhibitory+Factor+Promotes+Thromboinflammation+and+Predicts+Fast+Progression+of+Aortic+Stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophage Migration Inhibitory Factor Promotes Thromboinflammation and Predicts Fast Progression of Aortic Stenosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 44 (9), 2118-2135 (2024).</li>
<li>Jourdi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+report+on+flow+cytometry+for+platelet+function+testing+in+thrombocytopenic+patients%3A+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Consensus report on flow cytometry for platelet function testing in thrombocytopenic patients: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 21 (10), 2941-2952 (2023).</li>
<li>Flores-Montero, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorochrome+choices+for+multi-color+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Meth%22%5BJournal%5D)">Fluorochrome choices for multi-color flow cytometry.</a> J Immunol Meth. 475, 112618(2019).</li>
<li>Clemetson, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+CCR1%2C+CCR3%2C+CCR4%2C+and+CXCR4+chemokine+receptors+on+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional expression of CCR1, CCR3, CCR4, and CXCR4 chemokine receptors on human platelets.</a> Blood. 96 (13), 4046-4054 (2000).</li>
<li>Rohlfing, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACKR3+regulates+platelet+activation+and+ischemia-reperfusion+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">ACKR3 regulates platelet activation and ischemia-reperfusion tissue injury.</a> Nat Commun. 13 (1), 1823(2022).</li>
<li>Rath, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+stromal+cell-derived+factor-1+receptors+CXCR4+and+CXCR7+on+circulating+platelets+of+patients+with+acute+coronary+syndrome+and+association+with+left+ventricular+functional+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Expression of stromal cell-derived factor-1 receptors CXCR4 and CXCR7 on circulating platelets of patients with acute coronary syndrome and association with left ventricular functional recovery.</a> Eur Heart J. 35 (6), 386-394 (2014).</li>
<li>Hashemzadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+review+of+the+ten+main+platelet+receptors+involved+in+platelet+activity+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Blood+Res%22%5BJournal%5D)">A comprehensive review of the ten main platelet receptors involved in platelet activity and cardiovascular disease.</a> Am J Blood Res. 13 (6), 168-188 (2023).</li>
<li>Moroi, M., Farndale, R. W., Jung, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation-induced+changes+in+platelet+surface+receptor+expression+and+the+contribution+of+the+large-platelet+subpopulation+to+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Activation-induced changes in platelet surface receptor expression and the contribution of the large-platelet subpopulation to activation.</a> Res Pract Thromb Haemost. 4 (2), 285-297 (2020).</li>
<li>Busuttil-Crellin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+panel+design%2C+optimization%2C+and+performance+of+whole+blood+multi-color+flow+cytometry+of+platelet+surface+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Guidelines for panel design, optimization, and performance of whole blood multi-color flow cytometry of platelet surface markers.</a> Platelets. 31 (7), 845-852 (2020).</li>
<li>Fink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Subtilisin-Like+Protease+Furin+Regulates+Hemin-Dependent+Ectodomain+Shedding+of+Glycoprotein+VI%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The Subtilisin-Like Protease Furin Regulates Hemin-Dependent Ectodomain Shedding of Glycoprotein VI.</a> Thromb Haemost. 123 (7), 679-691 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x buffer di rilegatura&nbsp; &nbsp;</td><td>Invitrogen, Carlsbad, California, USA</td><td>88-8103-74</td><td>Tampone&nbsp;</td></tr><tr><td>Adenosina difosfato (ADP)</td><td>Probe & go Labordiagnostica GmbH Lemgo, Germania&nbsp; &nbsp;</td><td>70212</td><td>agonista piastrinico&nbsp;</td></tr><tr><td>Annessina V PE-Cianina7</td><td>Invitrogen, Carlsbad, California, USA</td><td>88-8103-74</td><td>colorante&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD41 AF 700</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>303728</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD41 Alexa Fluor 700</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>303727</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD42b PerCP/Cyanine5.5&nbsp;</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>303918</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD61 BV605</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, USA&nbsp;</td><td>744382</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD62P PE</td><td>Beckman Coulter, Brea, California, USA</td><td>IM1759U</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD63 PE/Cy5&nbsp;</td><td>Abcam, Cambrigde, Regno Unito</td><td>ab 234251</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CXCR4 BV650</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>740599</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CXCR7 BV421&nbsp;</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, Stati Uniti&nbsp;</td><td>566234</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-PAC-1 FITC</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>340507</td><td>anticorpo&nbsp;</td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Applichem, Darmstadt, Germania</td><td>A1391-Acido</td><td></td></tr> <tr><td>citrito&nbsp;</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Germania</td><td>6490.1-CRP-XL</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CambCol Laboratories, Ely, Regno Unito</td><td>Agonista piastrinico</td> <td>CRP-XL</td>&nbsp;</tr><tr><td>D-(+)-glucosio</td><td>Sigma Aldrich Co., St. Louis, Missouri, USA</td><td>G7528-Dubecco</td><td></td></tr><tr><td>' s Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td> <td>Sigma Aldrich Co, St. Louis, Missouri, USA</td><td>D8537-Hemin</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich Co., St. Louis, Missouri, USA</td><td>H9039-10G</td><td>agonista piastrinico.</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Germania</td><td>9105.3-Cloruro</td><td></td></tr> di <tr><td>potassio&nbsp;</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Germania</td><td>6781.3-Cloruro</td><td></td></tr> <tr><td>di sodio&nbsp;</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Germania</td><td>3957.1-Idrogenocarbonato</td><td></td></tr> di <tr><td>sodio&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma Aldrich Co, St. Louis, Missouri, USA</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>401676-Trombina&nbsp;</td><td>Roche&nbsp;</td><td>10602400001</td><td>agonista piastrinico&nbsp;</td></tr><tr><td>tri-sodio citrato-diidrat&nbsp;</td><td>Applichem, Darmstadt, Germania</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>1416551211-Zombie NIR</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>423105</td><td>colorante reattivo all'ammina&nbsp;</td></tr></tbody></table>

analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore

Analyzing Platelet Subpopulations by Multi-color Flow Cytometry

Sono disponibili due opzioni per l'analisi dei dati grezzi raccolti da un pannello di citometria a flusso multicolore. Un'opzione è quella di analizzarlo manualmente con il software di analisi (Figura 3 e Figura 4). Pertanto, i dati grezzi devono essere trascinati e rilasciati nella finestra del software. Innanzitutto, le celle devono essere trovate regolando la scala SSC/FSC nella modalità di visualizzazione del grafico a dispersione per mostrare la popolazione...

Analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore

Platelets, or thrombocytes, are small anucleated blood cells that play a crucial role in hemostasis and thrombosis. Defects in platelet functions can ...

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In questo rapporto, dimostriamo la procedura di colorazione e l'analisi di un test di fenotipizzazione effettuato su sangue intero fresco per enumerare le principali popolazioni innata e adattiva dei leucociti. Sottolineiamo considerazioni per l'esecuzione di queste procedure nel contesto di uno studio clinico multicentrico.

Enumerazione delle popolazioni dei leucociti del sangue periferico per le principali studi clinici multicentrici utilizzando un intero saggio Fenotipizzazione Sangue

Questo lavoro descrive un metodo basato sulla microscopia a fluorescenza per lo studio dell'adesione piastrinica, della diffusione e della secrezione sotto flusso. Questa piattaforma versatile permette di studiare la funzione piastrinica per la ricerca meccanicistica sulla trombosi e sull'emostasi.

Imaging di cellule vive di degranulazione piastrinica e secrezione sotto flusso

Qui, presentiamo un protocollo di cytometric di flusso per identificare CD4+ e CD8+ T cellule, γδ T, cellule B, cellule NK e monociti nel sangue periferico umano utilizzando solo due fluorocromi anziché sette. Con questo approccio, cinque ulteriori marcatori possono essere registrati sulla maggior parte dei citometri a flusso.

Discriminazione dei sette sottoinsiemi delle cellule immuni di due-fluorocromo flusso Cytometry

Qui, il sangue del topo è stato raccolto in presenza di un anti-coagulante. Le piastrine sono state purificate dal mezzo gradiente di Ioexolo usando la centrifugazione a bassa velocità. Le piastrine sono state attivate con trombina per indagare se fossero vitali. La qualità delle piastrine purificate è stata analizzata mediante citometria a flusso e microscopia.

Purificazione delle piastrine dal sangue del topo

Questo protocollo descrive in dettaglio tutte le fasi necessarie per ottenere i progenitori ematopoietici CD34+ derivati dal leucofiltro e la loro differenziazione e maturazione in vitro in megacariociti portatori di proplatelet che sono in grado di rilasciare piastrine nel terreno di coltura. Questa procedura è utile per l'analisi approfondita dei meccanismi cellulari e molecolari che controllano la megacariopoiesi.

Filtri leucodeplezione-Cellule CD34+ derivate come fonte cellulare per studiare la differenziazione dei megacariociti e la formazione piastrinica

Qui viene presentata una tecnica basata sulla citometria a flusso che consente di misurare simultaneamente il numero di divisioni cellulari, il fenotipo cellulare di superficie e la parentela cellulare. Queste proprietà possono essere testate statisticamente utilizzando un framework basato sulla permutazione.

Valutazione simultanea di parentela, numero di divisione e fenotipo tramite citometria a flusso per cellule staminali e progenitrici ematopoietiche

La formazione di piastrine procoagulanti è stata correlata con un aumentato rischio di trombosi. Di seguito viene presentato un preciso protocollo per l'isolamento delle piastrine lavate dal sangue umano, volto a quantificare l'esposizione alla fosfatidilserina e al rilascio di microvescicole, caratteristiche distintive delle piastrine procoagulanti.

Caratterizzazione piastrinica procoagulante mediante misurazione dell'esposizione alla fosfatidilserina e del rilascio di microvescicole da piastrine purificate umane

Questo articolo illustra il protocollo per quantificare la percentuale di piastrine positive al fattore tissutale (TF) utilizzando la citometria del flusso sanguigno totale, valutando la proteina: (1) intracellulare in condizioni di riposo e (2) sulla superficie cellulare, sia in condizioni di riposo che attivate. Sono inoltre fornite indicazioni per valutare le piastrine TF-positive nel plasma ricco di piastrine.

Analisi della citometria a flusso dell'espressione dei fattori tissutali nelle piastrine umane

Il presente protocollo fornisce una serie completa di procedure necessarie per analizzare le piastrine procoagulanti, che presentano caratteristiche sovrapponibili di necrosi, apoptosi e attivazione piastrinica.

Analisi completa delle piastrine procoagulanti che presentano caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione piastrinica

Questo articolo descrive un metodo per studiare il metabolismo cellulare in comunità complesse di più tipi di cellule, utilizzando una combinazione di tracciamento di isotopi stabili, smistamento cellulare per isolare specifici tipi di cellule e spettrometria di massa.

Un metodo per misurare il metabolismo in Ordinati sottopopolazioni di cellule Comunità complessi utilizzando Stable Isotope Tracing

Scopri l'analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore. Questo metodo consente di caratterizzare pattern di attivazione distinti indotti da diversi agonisti, avanzando la comprensione delle funzioni piastriniche in contesti patologici come trombosi e infiammazione.

Analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore

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