Name: Test di strisciamento del laboratorio di sicurezza dei prioni (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Impara il metodo di tamponamento con RT-QuIC per rilevare la contaminazione da prioni nelle superfici di laboratorio. Questo protocollo migliora la sicurezza biologica e valuta l'efficacia della disinfezione.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Bolton, D. C., McKinley, M. P., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+purifies+with+the+scrapie+prion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that purifies with the scrapie prion.</a> Science. 218 (4579), 1309-1311 (1982).</li>
<li>Oesch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+gene+encodes+scrapie+PrP+27-30+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.</a> Cell. 40 (4), 735-746 (1985).</li>
<li>Caughey, B., Raymond, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie-associated+form+of+PrP+is+made+from+a+cell+surface+precursor+that+is+both+protease-+and+phospholipase-sensitive%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The scrapie-associated form of PrP is made from a cell surface precursor that is both protease- and phospholipase-sensitive.</a> J Biol Chem. 266 (27), 18217-18223 (1991).</li>
<li>Deleault, N. R., Harris, B. T., Rees, J. R., Supattapone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+native+prions+from+minimal+components+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Formation of native prions from minimal components in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (23), 9741-9746 (2007).</li>
<li>Gajdusek, D. C., Zigas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degenerative+disease+of+the+central+nervous+system+in+New+Guinea%3A+the+endemic+occurrence+of+%26%2334%3Bkuru%26%2334%3B+in+the+native+population%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Degenerative disease of the central nervous system in New Guinea: the endemic occurrence of &#34;kuru&#34; in the native population.</a> N Engl J Med. 257, 974-978 (1957).</li>
<li>Centers for Disease Control. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+degenerative+neurologic+disease+in+patients+who+received+pituitary-derived+human+growth+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Fatal degenerative neurologic disease in patients who received pituitary-derived human growth hormone.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 34, 359-361 (1985).</li>
<li>Duffy, P., Wolf, J., Collins, G., DeVoe, A. G., Streeten, B., Cowen, D. Letter: possible person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+P+%22N+Engl+J+Med%22">N Engl J Med</a>. 290 (12), 692-693 (1974).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iatrogenic+Creutzfeldt-Jakob+disease+at+the+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Iatrogenic Creutzfeldt-Jakob disease at the millennium.</a> Neurology. 55 (8), 1075-1081 (2000).</li>
<li>Huillard d'Aignaux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+period+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+in+human+growth+hormone+recipients+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Incubation period of Creutzfeldt-Jakob disease in human growth hormone recipients in France.</a> Neurology. 53 (6), 1197-1201 (1999).</li>
<li>Marzewski, D. J., Towfighi, J., Harrington, M. G., Merril, C. R., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+pituitary-derived+human+growth+hormone+therapy%3A+a+new+American+case%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following pituitary-derived human growth hormone therapy: a new American case.</a> Neurology. 38, 1131-1133 (1988).</li>
<li>Hannah, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+receipt+of+a+previously+unimplicated+brand+of+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after receipt of a previously unimplicated brand of dura mater graft.</a> Neurology. 56 (8), 1080-1083 (2001).</li>
<li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+with+florid-type+plaques+after+cadaveric+dura+mater+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease with florid-type plaques after cadaveric dura mater grafting.</a> Arch Neurol. 56 (3), 357-362 (1999).</li>
<li>Antoine, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+extracranial+dura+mater+embolization+for+a+nasopharyngeal+angiofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after extracranial dura mater embolization for a nasopharyngeal angiofibroma.</a> Neurology. 48 (5), 1451-1453 (1997).</li>
<li>Esmonde, T., Lueck, C. J., Symon, L., Duchen, L. W., Will, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+and+lyophilised+dura+mater+grafts%3A+report+of+two+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease and lyophilised dura mater grafts: report of two cases.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 56, 999-1000 (1993).</li>
<li>Willison, H. J., Gale, A. N., McLaughlin, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+cadaveric+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following cadaveric dura mater graft.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 54, 940(1991).</li>
<li>Diringer, H., Braig, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+unconventional+viruses+in+dura+mater%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Infectivity of unconventional viruses in dura mater.</a> Lancet. 334, 439-440 (1989).</li>
<li>Peden, A. H., Head, M. W., Ritchie, D. L., Bell, J. E., Ironside, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+vCJD+after+blood+transfusion+in+a+PRNP+codon+129+heterozygous+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Preclinical vCJD after blood transfusion in a PRNP codon 129 heterozygous patient.</a> Lancet. 364 (9433), 527-529 (2004).</li>
<li>Will, R. G., Matthews, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+case-to-case+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Evidence for case-to-case transmission of Creutzfeldt-Jakob disease.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 45, 235-238 (1982).</li>
<li>el Hachimi, K. H., Chaunu, M. P., Cervenakova, L., Brown, P., Foncin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neurosurgical+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+with+analysis+of+donor+and+recipient%3A+agent+strains%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+III%22%5BJournal%5D)">Putative neurosurgical transmission of Creutzfeldt-Jakob disease with analysis of donor and recipient: agent strains.</a> C R Acad Sci III. 320 (4), 319-328 (1997).</li>
<li>Alper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214, 764-766 (1967).</li>
<li>Casassus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((France+halts+prion+research+amid+safety+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">France halts prion research amid safety concerns.</a> Science. 373 (6554), 475-476 (2021).</li>
<li>Brandel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+Creutzfeldt-Jakob+disease+diagnosed+7.5+years+after+occupational+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Variant Creutzfeldt-Jakob disease diagnosed 7.5 years after occupational exposure.</a> N Engl J Med. 383 (1), 83-85 (2020).</li>
<li>Flechsig, E., Hegyi, I., Enari, M., Schwarz, P., Collinge, J., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+scrapie+by+steel-surface-bound+prions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Transmission of scrapie by steel-surface-bound prions.</a> Mol Med. 7 (10), 679-684 (2001).</li>
<li>Zobeley, E., Flechsig, E., Cozzio, A., Enari, M., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+scrapie+prions+bound+to+a+stainless+steel+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Infectivity of scrapie prions bound to a stainless steel surface.</a> Mol Med. 5 (4), 240-243 (1999).</li>
<li>Brown, P., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+scrapie+virus+after+3+years%27+interment%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Survival of scrapie virus after 3 years' interment.</a> Lancet. 337 (8736), 269-270 (1991).</li>
<li>Seidel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrapie+agent+%28strain+263K%29+can+transmit+disease+via+the+oral+route+after+persistence+in+soil+over+years%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Scrapie agent (strain 263K) can transmit disease via the oral route after persistence in soil over years.</a> PLoS One. 2 (5), e435(2007).</li>
<li>Maddison, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+scrapie+prions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of scrapie prions.</a> J Virol. 84 (21), 11560-11562 (2010).</li>
<li>Pritzkow, S., Morales, R., Lyon, A., Concha-Marambio, L., Urayama, A., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+prion+disease+transmission+through+common+environmental+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient prion disease transmission through common environmental materials.</a> J Biol Chem. 293 (9), 3363-3373 (2018).</li>
<li>Alper, T., Cramp, W., Haig, D., Clarke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214 (90), 764-766 (1967).</li>
<li>Bernoulli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger+of+accidental+person-to-person+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+by+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Danger of accidental person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease by surgery.</a> Lancet. 309 (8009), 478-479 (1977).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Green, E. M., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chemicals%2C+heat%2C+and+histopathologic+processing+on+high-+infectivity+hamster-adapted+scrapie+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Effect of chemicals, heat, and histopathologic processing on high- infectivity hamster-adapted scrapie virus.</a> J Infect Dis. 145 (5), 683-687 (1982).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+disinfection+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Chemical disinfection of Creutzfeldt-Jakob disease virus.</a> N Engl J Med. 306, 1279-1282 (1982).</li>
<li>Dickinson, A. G., Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+scrapie+agent+to+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Resistance of scrapie agent to decontamination.</a> N Engl J Med. 299, 1413-1414 (1978).</li>
<li>Hunter, G. D., Millson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+heat+stability+and+chromatographic+behavior+of+the+scrapie+agent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Studies on the heat stability and chromatographic behavior of the scrapie agent.</a> J Gen Microbiol. 37, 251-258 (1964).</li>
<li>Pattison, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+the+scrapie+agent+to+formalin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Resistance of the scrapie agent to formalin.</a> J Comp Pathol. 75, 159-164 (1965).</li>
<li>Fraser, H., Farquhar, C., McConnell, I., Davies, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie+disease+process+is+unaffected+by+ionising+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Clin+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">The scrapie disease process is unaffected by ionising radiation.</a> Prog Clin Biol Res. 317, 653-658 (1989).</li>
<li>Yuan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+chronic+wasting+disease+prions+recovered+from+environmentally+relevant+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of chronic wasting disease prions recovered from environmentally relevant surfaces.</a> Environ Int. 166, 107347(2022).</li>
<li>Simmons, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+determination+of+residual+prion+infectivity+from+prion-decontaminated+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive determination of residual prion infectivity from prion-decontaminated surfaces.</a> mSphere. 9, e00504-e00524 (2024).</li>
<li>Orru, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+pathological+seeds+of+alpha-synuclein%2C+tau+and+prion+protein+on+solid+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of pathological seeds of alpha-synuclein, tau and prion protein on solid surfaces.</a> PLoS Pathog. 20 (4), e1012175(2024).</li>
<li>Wilham, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+end-point+quantitation+of+prion+seeding+activity+with+sensitivity+comparable+to+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Rapid end-point quantitation of prion seeding activity with sensitivity comparable to bioassays.</a> PLoS Pathog. 6 (12), e1001217(2010).</li>
<li>Srivastava, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+quantitation+of+pathological+alpha-synuclein+in+patient+biospecimens+by+RT-QuIC+seed+amplification+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Enhanced quantitation of pathological alpha-synuclein in patient biospecimens by RT-QuIC seed amplification assays.</a> PLoS Pathog. 20 (9), e1012554(2024).</li>
<li>Hughson, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+prions+and+amyloid+seeds+with+hypochlorous+acid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Inactivation of prions and amyloid seeds with hypochlorous acid.</a> PLoS Pathog. 12 (9), e1005914(2016).</li>
<li>Williams, K., Hughson, A. G., Chesebro, B., Race, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+chronic+wasting+disease+prions+using+sodium+hypochlorite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inactivation of chronic wasting disease prions using sodium hypochlorite.</a> PLoS One. 14 (10), e0223659(2019).</li>
<li>Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoclaving+standards+for+Creutzfeldt-Jakob+disease+agent+%5Bletter%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Autoclaving standards for Creutzfeldt-Jakob disease agent [letter].</a> Ann Neurol. 22 (4), 557-558 (1987).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newer+data+on+the+inactivation+of+scrapie+virus+or+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Newer data on the inactivation of scrapie virus or Creutzfeldt-Jakob disease virus in brain tissue.</a> J Infect Dis. 153 (6), 1145-1148 (1986).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Tamponi in schiuma PurSwab Catalogo</td> del <td>marchio Fisher</td><td>#14-960-3E</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di acqua ultrapura Milli-Q IQ 7005</td><td>MilliporeMinicentrifuga</td><td>Sigma Q7005T0C</td><td></td></tr>, <tr><td>6000 giri/min</td><td>Southern Labware</td><td>MLX-306</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di piastre Omega</td><td>BMG Labtech</td><td>FLUOstar Lettore</td><td></td>di piastre Omega</tr><tr><td>Q700 Sonicatore</td><td>QSonica</td><td>Q700-110</td><td></td></tr><tr><td>Proteina prionica di criceto ricombinante</td><td></td><td>MNPRO MNPROteina-Criceto criceto</td><td>siriano, aminoacidi 90-231</td></tr><tr><td>Savant speedvac&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SPD1030-230</td><td></td></tr><tr><td>Nanosfere di silice (50 nm)</td><td>nano Composix&nbsp;</td><td>SISN50-25M</td><td></td></tr></tbody></table>

test di strisciamento del laboratorio di sicurezza dei prioni

Prion Safety Laboratory Swipe Test

Descrizione scritta dei risultati positivi e negativi (compresi i controlli positivi/negativi su piastra e tampone)
I tamponi di controllo negativi sono inclusi nel tampone di sorveglianza per monitorare la potenziale contaminazione da prioni che potrebbe essere introdotta durante il processo di tamponamento, estrazione e concentrazione. La prima piastra RT-QuIC eseguita per una determinata sorveglianza mensile dovrebbe includere i controlli positivi e negativi del tampone. I controlli negativi riusciti non superano la soglia di fluorescenza positiva (Figura 6A). Questo risultato indicherebbe che la contaminazione non è stata introdotta durante le procedure sperimentali. Gli estratti di tampone di controllo positivo riusciti mostrerebbero una semina positiva in tutti i pozzetti replicati per un dato campione (i tamponi di controllo positivi sono stati contaminati con l'omogenato cerebrale di encefalopatia di visone trasmissibile adattato al criceto criceto ceppo Hyper (HY TME). L'inclusione di una serie di diluizioni a controllo positivo consente di determinare la sensibilità della rivelazione dei prioni per un dato esperimento (Figura 6A).
Quando si esaminano campioni di estratti di tamponi superficiali, le superfici che non mostrano una semina al di sopra della soglia di fluorescenza positiva predeterminata possono essere considerate negative ai prioni (Figura 6B). Al contrario, gli estratti di tamponi superficiali contaminati da prioni mostreranno capacità di semina superiori alla soglia di fluorescenza positiva, sebbene il rapporto di punti massimi (MPR) e il tempo alla fluorescenza possano variare rispetto al controllo positivo su piastra incluso (Figura 6B). La capacità del metodo di valutare un'adeguata disinfezione è evidenziata dalle superfici contaminate da prioni trattate con candeggina, che ora non riescono a seminare RT-QuIC (Figura 6B).
È importante sottolineare che, mentre il nostro laboratorio definisce un campione positivo come un campione che supera la soglia di fluorescenza positiva impostata in almeno la metà dei pozzetti replicati, è necessario che ogni laboratorio stabilisca i propri standard. Il tasso di formazione dell'amiloide (RAF) e il tempo alla fluorescenza possono anche essere utilizzati per aiutare a stabilire soglie specifiche di laboratorio per la positività.
Abbiamo osservato risultati di artefatti superficiali che superano la soglia di fluorescenza positiva ma con curve cinetiche alterate e dopo un tempo anormalmente lungo alla fluorescenza rispetto ai campioni di controllo positivi (Figura 6C). Questi risultati devono essere interpretati con cautela in quanto possono essere causati dalla presenza di polvere o sostanze chimiche residue presenti su una superficie. Questi risultati evidenziano la necessità di una pulizia generale del laboratorio, nonché i criteri per distinguere tra seeding vero positivo e falso positivo.
Lo smaltimento dei rifiuti solidi e liquidi a rischio biologico deve essere effettuato seguendo le attuali linee guida per lo smaltimento dei rischi biologici di una determinata istituzione. Le tecniche comuni di disinfezione con prioni includono il trattamento con idrossido di sodio, ipoclorito di sodio (candeggina) o sterilizzazione in autoclave a 134 °C per 18 minuti 43,44,45,46.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig01.jpg"> 
Figura 1: Panoramica schematica del test di strisciamento in laboratorio per la sicurezza dei prioni. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig02.jpg"> 
Figura 2: Esempio di layout del sito di tamponamento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig02large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig03.jpg"> 
Figura 3: Disegno dell'esperimento di esempio per i controlli con tampone incluso il test di strisciamento in laboratorio per la sicurezza dei prioni. (A) Layout del campione per i controlli negativi e positivi dell'estratto del tampone. (B) I controlli negativi e positivi dell'estratto del tampone devono essere risospesi con 50 μl di H2O. Una diluizione di 10 volte dell'estratto del tampone risospeso deve essere generata diluindolo in una soluzione di diluizione tissutale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig04.jpg"> 
Figura 4: Esempio di disegno dell'esperimento per estratti di tampone di superficie dal test di scansione del laboratorio di sicurezza dei prioni. (A) Schema di esempio per estratti di tampone di superficie. (B) I campioni di estratto del tampone superficiale devono essere risospesi con 20 μl di soluzione di diluizione tissutale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig05.jpg"> 
Figura 5: Test mensile di strisciamento del laboratorio per la sicurezza dei prioni. Diagramma di flusso utilizzato per interpretare i risultati e determinare la risposta appropriata. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig06.jpg"> 
Figura 6: Esperimento rappresentativo di tampone di superficie. (A) Piastra di controllo del tampone di superficie contenente controlli negativi dell'estratto del tampone in triplicato (DPBS, omogeneizzato di cervello di criceto non infetto 10-4 e 10-10) e controlli positivi dell'estratto del tampone in triplicato (HY omogeneizzato cerebrale 10-3). (B) Estratti rappresentativi di tamponi per superfici da banco, vetro e acciaio inossidabile (SS) che sono stati tamponati prima della contaminazione, a seguito di contaminazione con HY 10-3 e dopo il trattamento con candeggina di superfici contaminate. (C) Confronto del tracciato di fluorescenza dell'omogenato cerebrale 10-4 non infetto, dell'omogenato cerebrale HY 10-3 e dell'estratto del tampone dal banco di lavoro rivestito con un sottile film di polvere. I controlli negativi su piastra per i pannelli A e B includono un bianco (soluzione di diluizione tissutale) e un omogeneizzato di cervello di criceto non infetto 10-4. Il pannello B include l'aggiunta dell'omogenato cerebrale 10-4 non infetto e il controllo positivo su piastra dell'omogenato cerebrale HY 10-3. Una soglia di fluorescenza positiva (illustrata da una linea tratteggiata rossa) è stata determinata a 2. Il rapporto di punti massimi (MPR) riportato è la fluorescenza massima divisa per la lettura iniziale della fluorescenza ottenuta dal lettore di piastre. Ogni punto rappresenta una replica tecnica del pozzo per un dato tipo di campione. Vengono presentate la media e la deviazione standard. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig06large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Tabella 1: Esempio di modulo di documentazione mensile del sito di tampone. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Table%201.xlsx" target="_blank">Clicca qui per scaricare questa tabella.</a>
Figura supplementare 1: Modello di layout del sito di tampone. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura supplementare 2: Modulo di documentazione mensile del sito di tampone. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%202.pdf" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

Test di strisciamento del laboratorio di sicurezza dei prioni

Transmission of iatrogenic prion disease has occurred from contaminated neurosurgical tools, transplant materials, and occupational exposure to ...

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Qui si descrive un nuovo metodo di analisi per monitorare l'assorbimento del prione e del traffico da parte delle cellule immunitarie subito dopo l'inoculazione intraperitoneale purificando e fluorescente etichettatura aste prioni aggregati da materiale cerebrale infetto allora monitoraggio loro adozione, e il movimento dal sito di iniezione e caratterizzare le cellule che mediano questi eventi.

Monitoraggio Traffico di cellule immunitarie fluorescente Rods prioni ore dopo l&#39;infezione intraperitoneale

Misfolding amplificazione proteina ciclica (PMCA) è un test in vitro per lo studio della conversione prionica e barriere deformazione e specie. Può anche essere usato come un test di rilevazione prione.

Proteine ​​ciclica Amplificazione misfolding di prioni

Spazzini hanno un potenziale di traslocare infettive trasmissibili prioni dell'encefalopatia spongiforme nelle loro feci in aree indenni. Abbiamo metodi di dettaglio utilizzati per determinare se i prioni scrapie mouse adattati rimangono contagiosi dopo il passaggio se il tratto digestivo di corvi americani (Corvus brachyrhynchos), un consumatore comune di animali morti.

Procedure per l&#39;identificazione Infettive prioni dopo il passaggio attraverso l&#39;apparato digerente di una specie aviaria

Misurare la barriera alla trasmissione interspecie delle malattie da prioni è impegnativo e in genere comporta sfide animali o saggi biochimici. Qui, presentiamo un saggio di conversione della proteina prionica in vitro con la capacità di prevedere le barriere di specie.

Valutare l&#39;encefalopatia spongiforme trasmissibile Specie Barriere con un<em&gt; In Vitro</em&gt; Prion Protein Assay Conversion

L'esecuzione di saggi virali in un laboratorio BSL-4 è più complessa rispetto al lavoro in un laboratorio BSL-2 a causa delle precauzioni di sicurezza aggiuntive richieste. Qui, presentiamo una panoramica delle pratiche e delle procedure utilizzate all'interno di un laboratorio BSL-4 che illustrano il corretto utilizzo della cabina di biosicurezza di Classe II, la gestione/smaltimento dei rifiuti e la rimozione dei campioni.

Misure di sicurezza e procedure operative in un (A) laboratorio BSL-4: 2. Pratiche generali

Questo protocollo descrive una metodologia di alto-rendimento allo schermo funzionalmente per base di proteine di ereditarietà in S. cerevisiae.

High throughput Screening per eredità a base di proteine in S. cerevisiae

Qui, presentiamo un protocollo per descrivere una tecnica di amplificazione del prion semplice, veloce ed efficiente, il metodo di conversione indotta da tremare in tempo reale (RT-QuIC).

In tempo reale tremare-indotta conversione analisi per rilevazione di CWD prioni nel materiale fecale

Il test immunohistochimico rapido diretto (DRIT) offre un'Organizzazione Mondiale per la Salute Animale e l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OIE/OMS) riconosciuta alternativa al test di anticorpo fluorescente diretto (DFA) per la diagnosi della rabbia. Questo test consente di applicazioni sul campo che possono essere eseguite in circa 1 h su impronte cerebrali utilizzando la microscopia leggera.

Sorveglianza della rabbia migliorata utilizzando un test immunoistochimico rapido diretto

Presentiamo un protocollo completo per la diagnosi post-mortem della rabbia animale in condizioni di campo utilizzando un rapido test diagnostico immunocromatico (RIDT), dal campionamento della biopsia cerebrale all'interpretazione finale. Descriviamo anche ulteriori applicazioni utilizzando il dispositivo per l'analisi molecolare e la genotipizzazione virale.

Test diagnostico immunocromatico rapido sulla rabbia sul campo per impostazioni limitate alle risorse con ulteriori applicazioni molecolari

L'immunomarcatura della proteina prionica anomala utilizzando protocolli immunoistochimici richiede specifiche metodologie di preparazione di campioni e anticorpi anti-PrP. Il presente protocollo descrive i passaggi chiave del demasking degli epitopi per garantire una corretta etichettatura immunologica della PrP e per ridurre al minimo la colorazione di fondo non specifica. Inoltre, questo approccio considera le misure di biosicurezza quando si conducono studi di immunoistochimica con i...

Rilevazione di proteine prioniche anomale mediante immunoistochimica

Impara il metodo di tamponamento con RT-QuIC per rilevare la contaminazione da prioni nelle superfici di laboratorio. Questo protocollo migliora la sicurezza biologica e valuta l'efficacia della disinfezione.

Test di strisciamento del laboratorio di sicurezza dei prioni

Esplora altri video