Name: Somministrazione di anestetici volatili a larve di pesce zebra per losservazione comportamentale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: Scopri un protocollo economico per somministrare anestetici volatili a larve di Danio rerio in camera sigillata. Questo metodo consente studi comportamentali dettagliati sulla farmacologia anestetica.

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<ol><li>Wasilczuk, A. Z., Maier, K. L., Kelz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+as+a+model+organism+for+assessing+anesthetic+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The mouse as a model organism for assessing anesthetic sensitivity.</a> Methods Enzymol. 602, 211-228 (2018).</li>
<li>Shortal, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+brain+target-controlled+infusion+of+propofol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of brain target-controlled infusion of propofol in mice.</a> PLoS One. 13, 1-14 (2018).</li>
<li>Halbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yolk+sac+of+zebrafish+embryos+as+backpack+for+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Yolk sac of zebrafish embryos as backpack for chemicals.</a> Environ Sci Technol. 54 (16), 10159-10169 (2020).</li>
<li>Bedell, V. M., Meng, Q. C., Pack, M. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vertebrate+model+to+reveal+neural+substrates+underlying+the+transitions+between+conscious+and+unconscious+states%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A vertebrate model to reveal neural substrates underlying the transitions between conscious and unconscious states.</a> Sci Rep. 10, 1-10 (2020).</li>
<li>Stetter, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+anesthesia+in+amphibians%3A+Comparison+of+five+application+methods%5BTitle%5D)+AND+%22In+American+Association+of+Zoo+Veterinarians%22%5BJournal%5D)">Isoflurane anesthesia in amphibians: Comparison of five application methods.</a> In American Association of Zoo Veterinarians. , Puerto Vallarta, Mexico. 255-257 (1996).</li>
<li>Woll, K. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+to+identify+anesthetic+ligands+using+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening to identify anesthetic ligands using Xenopus laevis tadpoles.</a> Methods Enzymol. 602, 177-187 (2018).</li>
<li>Meyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zur+Theorie+der+Alkoholnarkose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Exp+Pathol+Pharmakol%22%5BJournal%5D)">Zur Theorie der Alkoholnarkose.</a> Arch Exp Pathol Pharmakol. 46, 338-346 (1901).</li>
<li>Downes, H., Courogen, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+effects+of+anesthetics+in+tadpole+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Contrasting effects of anesthetics in tadpole bioassays.</a> J Pharmacol Exp Ther. 278, 284-296 (1996).</li>
<li>Kalueff, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10, 70-86 (2013).</li>
<li>Abramova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+pregnanolone+glutamate+and+its+metabolites+on+GABAA+and+NMDA+receptors+and+zebrafish+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of pregnanolone glutamate and its metabolites on GABAA and NMDA receptors and zebrafish behavior.</a> ACS Chem Neurosci. 14, 1870-1883 (2023).</li>
<li>Germann, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+behavioral+effects+of+GABAergic+low-and+high-efficacy+neuroactive+steroids+in+the+zebrafish+larvae+assay%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Comparison of behavioral effects of GABAergic low-and high-efficacy neuroactive steroids in the zebrafish larvae assay.</a> ACS Chem Neurosci. 15, 909-915 (2024).</li>
<li>Hoyt, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photomotor+responses+in+zebrafish+and+electrophysiology+reveal+varying+interactions+of+anesthetics+targeting+distinct+sites+on+gamma-aminobutyric+acid+type+A+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Photomotor responses in zebrafish and electrophysiology reveal varying interactions of anesthetics targeting distinct sites on gamma-aminobutyric acid type A receptors.</a> Anesthesiology. 137, 568(2022).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+locomotor+activities+of+zebrafish+larvae+under+the+influence+of+various+neuroactive+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of the locomotor activities of zebrafish larvae under the influence of various neuroactive drugs.</a> Annals Trans Med. 6, 173(2018).</li>
<li>McCarroll, M. N., Gendelev, L., Kinser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavioural+profiling+identifies+GABA+and+serotonin+receptor+ligands+related+to+sedation+and+paradoxical+excitation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavioural profiling identifies GABA and serotonin receptor ligands related to sedation and paradoxical excitation.</a> Nat Commun. 10, 4078(2019).</li>
<li>Plasencia, D. M., Rodgers, L. H., Knighton, A. R., Eckenhoff, R. G., White, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+propofol+anesthesia+by+alkyl-fluorobenzene+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antagonism of propofol anesthesia by alkyl-fluorobenzene derivatives.</a> Sci Rep. 14, 15943(2024).</li>
<li>Dash, S. N., Lipika, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flight+for+fish+in+drug+discovery%3A+A+review+of+zebrafish-based+screening+of+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Lett%22%5BJournal%5D)">Flight for fish in drug discovery: A review of zebrafish-based screening of molecules.</a> Biology Lett. 19, 20220541(2023).</li>
<li>Nelson, J. C., Michael, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavior+as+a+gateway+to+nervous+system+assembly+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavior as a gateway to nervous system assembly and plasticity.</a> Development. 149, 177998(2022).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sevoflurane+postconditioning+ameliorates+cerebral+hypoxia%2Freoxygenation+injury+in+zebrafish+involving+the+Akt%2FGSK-3%CE%B2+pathway+activation+and+the+microtubule-associated+protein+2+promotion%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Sevoflurane postconditioning ameliorates cerebral hypoxia/reoxygenation injury in zebrafish involving the Akt/GSK-3β pathway activation and the microtubule-associated protein 2 promotion.</a> Biomed Pharmacother. 175, 116693(2024).</li>
<li>Abdallah, S. J., Thomas, B. S., Jonz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquatic+surface+respiration+and+swimming+behaviour+in+adult+and+developing+zebrafish+exposed+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Aquatic surface respiration and swimming behaviour in adult and developing zebrafish exposed to hypoxia.</a> J Exp Biol. 218, 1777-1786 (2015).</li>
<li>Targ, A. G., Yasuda, N., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solubility+of+I-653%2C+sevoflurane%2C+isoflurane%2C+and+halothane+in+plastics+and+rubber+composing+a+conventional+anesthetic+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Solubility of I-653, sevoflurane, isoflurane, and halothane in plastics and rubber composing a conventional anesthetic circuit.</a> Anesth Analg. 69, 218-225 (1989).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-selective+Anesthetic+insensitivity+of+zebrafish+lacking+%CE%B3-aminobutyric+acid+Type+A+receptor+%CE%B23+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Drug-selective Anesthetic insensitivity of zebrafish lacking γ-aminobutyric acid Type A receptor β3 subunits.</a> Anesthesiology. 131, 1276-1291 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Micropiastre in vetro a 96 pozzetti</td><td>Zinsser Nord America</td><td>3600500</td><td>"Queste micropiastre di vetro sono realizzate in speciale vetro borosilicato ad alta purezza e resistente alla temperatura e le superfici sono lucidate con acido. Le piastre sono rettangolari con l'ingombro standard della micropiastra SBS (85 x 127 mm). Queste micropiastre per reattori in vetro sono progettate principalmente per l'uso con applicazioni chimiche e sono resistenti a temperature fino a 530 gradi C. Possono essere sterilizzati in autoclave. Sono lavorati da una lastra di vetro omogenea e presentano una geometria e una forma uniformi per fornire temperature costanti da un pozzetto all'altro (entro 0,2 gradi C tipici)".</td></tr><tr><td>2,0 mL trasparente, ampia apertura, fiale con filettatura da 9 mm&nbsp;</td><td>Chemglass Scienze della Vita</td><td>CV-1150-1232</td><td>"Con un'apertura più grande del 40%, queste fiale sono progettate specificamente per funzionare nei campionatori automatici a braccio robotico. Incorporano anche l'esclusivo design della fiala Step che centra con precisione un inserto di volume limitato nel collo della fiala. "</td></tr><tr><td>Nastro biadesivo 3M 9490LE</td><td>AbbVie Inc</td><td>24WG90</td><td>"Il nastro biadesivo 3M 9490LE con adesivo di laminazione 3M 300LSE offre un'elevata forza di adesione alla maggior parte delle superfici, comprese molte plastiche a bassa energia superficiale come il polipropilene e le vernici verniciate a polvere. L'adesivo acrilico fornisce anche un'eccellente adesione alle superfici leggermente contaminate dall'olio tipicamente utilizzato con le parti delle macchine. Il nastro biadesivo 3M 9490LE offre la funzione aggiuntiva dell'adesivo di laminazione 3M 300MP su un lato per fornire un'eccellente forza di adesione a una varietà di materiali in schiuma e tessuto (6 pollici x 5 yd)"</td></tr><tr><td>Camera di osservazione DanioVision</td><td>Noldus</td><td>DVOC-0041</td><td>"DanioVision è un sistema completo, progettato per l'analisi ad alta produttività di larve di pesce zebra in piastre multipozzetto. Include la camera di osservazione e il rinomato software di tracciamento video EthoVision XT.</td></tr><tr><td>Unità di controllo della temperatura DanioVision</td><td>Noldus</td><td>DVTCU-0011</td><td>"L'unità di controllo della temperatura DanioVision è un sistema a flusso continuo: l'acqua scorre uniformemente sotto la piastra del pozzetto alla temperatura desiderata. La temperatura è la stessa in tutta la piastra del pozzetto".</td></tr><tr><td>Software Ethovision XT16</td><td>Noldus</td><td>NSE-EV-BASE</td><td>"EthoVision XT è il software di tracciamento video più utilizzato che traccia e analizza il comportamento, il movimento e l'attività di qualsiasi animale, marchio registrato da Noldus"</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Terapia Intensiva</td><td>NDC # 66794-017-10</td><td>Liquido per inalazione, un anestetico per inalazione non infiammabile e non esplosivo, contenente 100 ml di isoflurano. Conservato a temperatura ambiente controllata 20&ordm; a 25&ordm; C</td></tr><tr><td>Primer adesivo istantaneo Scotch-Weld AC79 Trasparente</td><td>3M</td><td>"62-3916-0860-1 (ID prodotto) C2103N (Lotto)"</td><td>"Il primer adesivo istantaneo 3M Scotch-Weld AC79 è progettato per l'uso su elastomeri a bassa energia superficiale difficili da incollare, come EPDM, silicone e altre gomme. La preparazione e l'applicazione della superficie sono semplici e il primer adesivo si asciuga rapidamente per mantenere i lavori in rapido movimento".</td></tr><tr><td>Fogli di silicone spessore 0,5 mm</td><td>Fornitori vari</td><td>N/A</td><td>I fogli di silicone traslucido sono stati acquistati da più fornitori</td></tr><tr><td>Speedball Pop-in Brayer in gomma dura con telaio in plastica, 4 pollici "</td><td>Speedball</td><td>793728</td><td>"Il brayer Speedball Pop-In Hard Brayer è dotato di un rullo che si stacca a scatto per una facile pulizia. Telaio in plastica in un unico pezzo con rullo staccabile largo 4 pollici. Realizzato in pura gomma naturale con finitura rettificata. Il braciere in gomma dura è largo 4 pollici con un robusto telaio in plastica ed è ottimo per l'applicazione della colla"</td></tr><tr><td>Tappi a vite SureSTART da 9 mm, livello 2 Applicazioni ad alta produttività, Tipo: Tappo a vite AVCS PP nero, silicone bianco/PTFE ROSSO Septa 1,0 mm</td><td>Termo Scientifico</td><td>6ASC9ST1B</td><td>"Utilizzare i tappi a vite Thermo Scientific SureSTART da 9 mm con fiale a vite con un'apertura di 9 mm. I tappi di livello 2 sono prodotti e testati per garantire un basso sanguinamento, robustezza e riproducibilità dei risultati per le analisi GC-MS e LC-MS di routine. È possibile scegliere tra cappucci in polipropilene con setti multiuso in silicone/PTFE di vari valori di durezza, progettati per ridurre i problemi dell'ago dell'autocampionatore. I nostri tappi AVCS incorporano la tecnologia Advanced Vial Closure System per garantire una compressione ottimale della tenuta durante la chiusura di una fiala".</td></tr><tr><td>Ultane Sevoflurano</td><td>AbbVie Inc</td><td>NDC # 0074-4456-04</td><td>Volatile Liquid for Inhalation, è confezionato in flaconi di colore ambrato contenenti 250 mL di sevoflurano. Conservato a temperatura ambiente controllata 15&ordm; a 30&ordm; C</td></tr><tr><td>Fiale a scintillazione liquida Wheaton, tappi attaccati alle fiale, vetro, lamina / polpa di metallo, 24-400, 20 mL&nbsp;</td><td>DWK Scienze della vita</td><td>986561</td><td>Fiale di scintillazione da 20 mL convertite da tubi in vetro borosilicato di Tipo I, PET o HDPE. Disponibile con tappo attaccato.</td></tr></tbody></table>

somministrazione di anestetici volatili a larve di pesce zebra per l'osservazione comportamentale

Administration of Volatile Anesthetics to Zebrafish Larvae for Behavioral Observation

Confronto con l'osservazione tradizionale a pozzo aperto Al fine di valutare se la sigillatura adesiva ha un effetto sul movimento spontaneo, è stato effettuato un confronto tra i controlli nei pozzetti aperti e quelli sigillati. Come si vede nella Figura 2A, non è stata osservata alcuna differenza statisticamente significativa nel movimento tra questi gruppi per la durata standard di ~30 minuti utilizzata negli esperimenti descritti in questo articolo. Riconoscendo che a...

Somministrazione di anestetici volatili a larve di pesce zebra per l'osservazione comportamentale

This study describes a unique method for administering volatile anesthetics, such as isoflurane and sevoflurane, to larval zebrafish during behavioral ...

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Dimostriamo iniezione intraperitoneale in zebrafish adulti. Usiamo una microsiringa da 10 microlitri NanoFil controllato da un controller Micro4 e UltraMicroPump III. Questa dimostrazione include l'uso di acqua fredda come anestetico.

Iniezione intraperitoneale in Zebrafish adulti

Source: Morsch, M.,  et. al., Triggering Cell Stress and Death utilizzando la microscopia confocale laser UV convenzionale. J. Vis. Exp. (2017) In questo video, esploriamo la tecnica dell'ablazione laser UV ad alta intensità per indirizzare e studiare con precisione i singoli neuroni nel pesce zebra transgenico. Dimostriamo come preparare, immobilizzare e visualizzare le risposte neuronali, evidenziando le dinamiche cellulari della lesione e del recupero.

Ablazione laser selettiva a singolo neurone in una larva di zebrafish utilizzando un microscopio confocale

Fonte: Schramm, P. et al. Imaging in vivo di tessuto cerebrale completamente attivo in larve di zebrafish sveglie e giovani mediante rimozione del cranio e della pelle. J. Vis. Exp. (2021)Questo video dimostra l'imaging in vivo dei neuroni cerebellari nelle larve transgeniche di zebrafish, che esprimono proteine fluorescenti nei neuroni di Purkinje. Il processo prevede l'anestetizzazione delle larve, l'immobilizzazione in agarosio e la rimozione accurata della pelle pigmentata per migliorare la...

Imaging in vivo del cervello larvale di pesce zebra per la visualizzazione dei neuroni cerebellari

Un metodo semplice per registrare potenziali di campo extracellulari nel proencefalo larvale zebrafish è descritto. Il metodo fornisce un...

Proencefalo registrazione elettrofisiologica in larvale Zebrafish

Il nostro laboratorio ha sviluppato un sistema di imaging automatizzato romanzo ad alta produttività che è utile per il rilevamento di diversi comportamenti differenti in 7 giorni di età zebrafish larve. Il sistema può essere usato per rilevare sottili cambiamenti nel comportamento dopo le larve sono stati esposti agli agenti tossici ambientali o farmaceutici.

Automatizzati high-throughput analisi comportamentali nelle larve Zebrafish

Le manipolazioni mirate per causare stress diretto o morte nelle singole cellule sono state relativamente difficili da realizzare. In questo articolo, viene descritto un approccio di ablazione con risoluzione di singole cellule per stressare e uccidere selettivamente singole cellule in coltura cellulare e animali viventi basato su un laser UV confocale standard.

Attivazione delle cellule Lo stress e la morte con i convenzionali UV laser Microscopia confocale

Qui, presentiamo un metodo affidabile, minimamente invasivo e conveniente per registrare e interpretare gli elettrocardiogrammi nel pesce zebra adulto anestesizzato vivo.

Elettrocarcardio in superficie in vivo per il pesce zebra adulto

Questo articolo descrive un metodo per montare fragili embrioni di pesce zebra per la microscopia confocale time-lapse estesa. Questo metodo a basso costo è facile da eseguire utilizzando normali piatti di microscopia con fondo di vetro per l'imaging su qualsiasi microscopio invertito. Il montaggio viene eseguito in strati di agarose a diverse concentrazioni.

Un metodo di montaggio a strati per la microscopia confocale Time-Lapse estesa di embrioni di pesci zebra interi

L'ablazione laser è una tecnologia ampiamente applicabile per lo studio della rigenerazione nei sistemi biologici. Il protocollo presentato descrive l'uso di un microscopio confocale a scansione laser standard per l'ablazione laser e la successiva imaging time-lapse di cellule interneuromast rigeneranti nella linea laterale zebrafish.

Saggio di ablazione e rigenerazione laser a base di microscopio confocale nelle cellule interneuromast zebrafish

Qui presentiamo un metodo per immaginare il cervello embrionale del pesce zebra in vivo fino agli stadi larvale e giovanile. Questa procedura microinvasiva, adattata da approcci elettrofisiologici, fornisce l'accesso ai dettagli cellulari e subcellulari del neurone maturo e può essere combinata con studi optogenetici e neurofarmacologici per caratterizzare la funzione cerebrale e l'intervento farmacologico.

Imaging in vivo del tessuto cerebrale completamente attivo in larve di zebrafish svegli e giovani mediante rimozione del cranio e della pelle

Qui, presentiamo un protocollo dettagliato per esaminare l'attività neurale nelle regioni cerebrali del pesce zebra transgenico che esprimono indicatori di calcio GCaMP utilizzando la microscopia confocale.

In vivo Imaging a fluorescenza confocale dell'attività neurale indotta dalla stimolazione sensoriale in larve di pesce zebra parzialmente trattenute

Scopri un protocollo economico per somministrare anestetici volatili a larve di Danio rerio in camera sigillata. Questo metodo consente studi comportamentali dettagliati sulla farmacologia anestetica.

Somministrazione di anestetici volatili a larve di pesce zebra per l'osservazione comportamentale

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