Name: Sviluppo di colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Scopri come stabilire colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali per studiare gli effetti citotossici della tossina Shiga. Questo metodo supporta la ricerca nefrologica e tossicologica.

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<ol><li>Rivas, M., Chinen, I., Miliwebsky, E., Masana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli-associated+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Risk factors for Shiga toxin-producing Escherichia coli-associated human diseases.</a> Microbiol Spectr. 2 (5), (2014).</li>
<li>Gianantonio, C. A., Vitacco, M., Mendilaharzu, F., Gallo, G. E., Sojo, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hemolytic-uremic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">The hemolytic-uremic syndrome.</a> Nephron. 11 (2), 174-192 (1973).</li>
<li>Alconcher, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolytic+uremic+syndrome+associated+with+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli+infection+in+Argentina%3A+update+of+serotypes+and+genotypes+and+their+relationship+with+severity+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hemolytic uremic syndrome associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli infection in Argentina: update of serotypes and genotypes and their relationship with severity of the disease.</a> Pediatr Nephrol. 36 (9), 2811-2817 (2021).</li>
<li>Alconcher, L. F., Lucarelli, L. I., Bronfen, S., Meni Battaglia, L., Balestracci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+evolution+of+kidney+function+in+patients+with+STEC-hemolytic+uremic+syndrome+followed+for+more+than+15+years%3A+unexpected+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Dynamic evolution of kidney function in patients with STEC-hemolytic uremic syndrome followed for more than 15 years: unexpected changes.</a> Pediatr Nephrol. 40 (1), 143-150 (2025).</li>
<li>Monteverde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decrease+in+the+incidence+of+Shiga+toxin-related+hemolytic+uremic+syndrome+as+a+cause+of+kidney+transplantation+at+an+Argentine+Referral+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">A decrease in the incidence of Shiga toxin-related hemolytic uremic syndrome as a cause of kidney transplantation at an Argentine Referral Center.</a> Pediatr Transplant. 27 (4), e14489(2023).</li>
<li>Sandvig, K., van Deurs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entry+of+ricin+and+Shiga+toxin+into+cells%3A+molecular+mechanisms+and+medical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Entry of ricin and Shiga toxin into cells: molecular mechanisms and medical perspectives.</a> EMBO J. 19 (22), 5943-5950 (2000).</li>
<li>Obrig, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+Shiga+toxin+mechanisms+of+action+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli Shiga toxin mechanisms of action in renal disease.</a> Toxins (Basel). 2 (12), 2769-2794 (2010).</li>
<li>Karpman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+renal+cortical+cells+in+the+hemolytic-uremic+syndrome%3A+in+vivo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of renal cortical cells in the hemolytic-uremic syndrome: in vivo and in vitro studies.</a> Infect Immun. 66 (2), 636-644 (1998).</li>
<li>Pistone Creydt, v, Silberstein, C., Zotta, E., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effect+of+Shiga+toxin-2+holotoxin+and+its+B+subunit+on+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effect of Shiga toxin-2 holotoxin and its B subunit on human renal tubular epithelial cells.</a> Microbes Infect. 8, 410-419 (2006).</li>
<li>Silberstein, C., Pistone Creydt, V., Gerhardt, E., Nuñez, P., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+water+absorption+in+human+proximal+tubular+epithelial+cells+in+response+to+Shiga+toxin-2%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of water absorption in human proximal tubular epithelial cells in response to Shiga toxin-2.</a> Pediatr Nephrol. 23, 1981-1990 (2008).</li>
<li>Márquez, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Escherichia+coli+subtilase+cytotoxin+and+Shiga+toxin+2+on+primary+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Escherichia coli subtilase cytotoxin and Shiga toxin 2 on primary cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e87022(2014).</li>
<li>Márquez, L. B., Araoz, A., Repetto, H. A., Ibarra, F. R., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Shiga+toxin+2+on+cellular+regeneration+mechanisms+in+primary+and+three-dimensional+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Effects of Shiga toxin 2 on cellular regeneration mechanisms in primary and three-dimensional cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> Microb Pathog. 99, 87-94 (2016).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliglustat+prevents+Shiga+toxin+2+cytotoxic+effects+in+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Eliglustat prevents Shiga toxin 2 cytotoxic effects in human renal tubular epithelial cells.</a> Pediatr Res. 91 (5), 1121-1129 (2022).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+stimulates+cell+proliferation+through+classic+estrogen+receptors+and+GPER-1+in+human+renal+tubular+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Estradiol stimulates cell proliferation through classic estrogen receptors and GPER-1 in human renal tubular epithelial cell primary cultures.</a> Biochem Biophys Res Commun. 512, 170-175 (2019).</li>
<li>Fernandez Miyakawa, M., Zabal, O., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens+epsilon+toxin+is+cytotoxic+for+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens epsilon toxin is cytotoxic for human renal tubular epithelial cells.</a> Hum Exp Toxicol. 30, 275-282 (2011).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+application+of+transcriptomics+and+ceRNA+hypothesis%3A+ln+cRNA-00742%2FmiR-116+targets+CD74+to+mediate+vanadium-induced+mitochondrial+apoptosis+in+duck+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Cooperative application of transcriptomics and ceRNA hypothesis: ln cRNA-00742/miR-116 targets CD74 to mediate vanadium-induced mitochondrial apoptosis in duck liver.</a> J Hazard Mater. 480, 135904(2024).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+toxicity+in+the+liver+of+broiler+chicken%3A+insights+from+metabolomics+and+AMPK-mTOR+mediated+autophagy+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Poult+Sci%22%5BJournal%5D)">Copper toxicity in the liver of broiler chicken: insights from metabolomics and AMPK-mTOR mediated autophagy perspective.</a> Poult Sci. 103 (9), 104011(2024).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Caveolin-1+on+the+molybdenum+and+cadmium+exposure+induces+pulmonary+ferroptosis+and+fibrosis+in+the+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Role of Caveolin-1 on the molybdenum and cadmium exposure induces pulmonary ferroptosis and fibrosis in the sheep.</a> Environ Pollut. 334, 122207(2023).</li>
<li>Fujiki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockage+of+Akt+activation+suppresses+cadmium-induced+renal+tubular+cellular+damages+through+aggrephagy+in+HK-2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Blockage of Akt activation suppresses cadmium-induced renal tubular cellular damages through aggrephagy in HK-2 cells.</a> Sci Rep. 14, 14552(2024).</li>
<li>Joun, J. I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+effects+of+molybdenum+and+its+association+with+reduced+prevalence+of+hyperuricemia+in+the+adult+population%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Antioxidative effects of molybdenum and its association with reduced prevalence of hyperuricemia in the adult population.</a> PLoS One. 19 (8), e0306025(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Collagenasi tipo I</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, Stati Uniti</td><td>637958</td><td></td></tr><tr><td>Integratore per la crescita delle cellule endoteliali</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, Stati Uniti</td><td>E2759</td><td></td></tr><tr><td>Matrice della membrana basale Matrigel</td><td>BD Biosciences, Stati Uniti; Sigma Merck, St Louis, MO, Stati Uniti</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; Filtro a rete a pori m</td><td>BD Bioscience, MA, Stati Uniti</td><td>css010070</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium con L-glutammina&nbsp;</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, Stati Uniti</td><td>R8758-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Soluzione salina bilanciata&nbsp; Senza Ca2+ e Mg2+</td><td>Gibco Invitrogen, NY, Stati Uniti</td><td>14175046</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di tripsina-EDTA</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, Stati Uniti</td><td>T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

sviluppo di colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali

Development of Human Renal Tubular Epithelial Cell Primary Cultures in Monolayers and Three-Dimensional Conditions

Le colture primarie HRTEC confluenti hanno mostrato una morfologia simile osservata al microscopio ottico (Figura 1). Le cellule sono state caratterizzate da immunofluorescenza come descritto nelle nostre precedenti pubblicazioni utilizzando anticorpi contro l'acquaporina 1 (AQP1) e PECAM CD31 9,12,13. Gli studi di immunofluorescenza hanno dimostrato che oltre il 90% degli HRTEC era positivo per l'A...

Sviluppo di colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali

Human renal tubular epithelial cell (HRTEC) primary cultures are isolated from kidneys removed from pediatric patients undergoing nephrectomies indicated ...

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Un rotante sistema di coltura cellulare che consente alle cellule epiteliali di crescere in condizioni fisiologiche con conseguente 3-D formazione di aggregati cellulare viene descritto. Gli aggregati di visualizzazione...

Coltura e Applicazioni di bioreattore rotante Vessel parete Derivato di modelli 3D di cellule epiteliali

In questo video, dimostriamo i passaggi per isolare e purificare le cellule epiteliali tubulari renali per un'ampia gamma di studi di biologia molecolare e colture cellulari.

Isolamento di cellule renali mure: una tecnica per isolare e generare colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali

Questo protocollo descrive la decellularizzazione dei reni di ratto Sprague Dawley mediante perfusione anterograda di detergenti attraverso il sistema vascolare, producendo matrici extracellulari renali acellulari che fungono da modelli per il ripopolamento con cellule epiteliali renali umane. La ricellularizzazione e l'uso del saggio di perfusione della resazurina per monitorare la crescita vengono eseguiti all'interno di bioreattori di perfusione appositamente progettati.

Ripopolamento cellule epiteliali e preparazione di roditori matrice extracellulare Ponteggi per lo sviluppo del tessuto renale

Questo protocollo descrive un metodo per isolare e coltivare rudimenti metanufricani da embrioni di topo.

Dissezione e cultura del rene embrionale del mouse

Questo protocollo fornisce un approccio conveniente per isolare e caratterizzare del mouse primario cellule tubolari renali che possono successivamente essere sub-coltivate per valutare funzioni biologiche renale ex vivo, tra cui bioenergetiche mitocondriali.

Isolamento, caratterizzazione e Throughput elevato flusso extracellulare analisi di cellule epiteliali tubolari renali primari del Mouse

Questo lavoro descrive due metodi per studiare lo sviluppo degli organi, una migliore impostazione dello xenotrapianto sulla membrana corioallantoica (CAM) dagli embrioni aviari che consente la vascolarizzazione di organi embrionali e organoidi coltivati e una nuova direzione z fissa metodo di coltura dell'organo con condizioni sperimentali modificate che consente l'imaging confocale time-lapse ad alta risoluzione.

Ottimizzazione della cultura organoide e organipica renale per la vascolarizzazione, lo sviluppo esteso e l'imaging di microscopia migliorato

Qui viene presentato un protocollo chimicamente definito per la derivazione di podociti renali umani da cellule staminali pluripotenti indotte ad alta efficienza (&gt;90%) e indipendenti da manipolazioni genetiche o selezione di sottopopolazioni. Questo protocollo produce il tipo di cellula desiderato entro 26 giorni e potrebbe essere utile per i test di nefrotossicità e la modellazione della malattia.

Differenziazione guidata di podociti renali maturi da cellule staminali pluripotenti indotte umane in condizioni chimicamente definite

Le colture tubuloidi renali umane rappresentano un prezioso modello in vitro per studiare la fisiologia e la malattia renale. I tubuloidi possono essere stabiliti dal tessuto renale (sano e malato) e dall'urina, quest'ultima rappresenta una fonte facilmente ottenibile e meno invasiva di materiale di ricerca.

Generazione di tubuloidi renali umani da tessuti e urine

Qui, presentiamo protocolli che descrivono in dettaglio le istruzioni per l'implementazione di colture cellulari 3D utilizzando matrici di collagene e collagene-agarosio in un sistema microfisiologico. Questi protocolli supportano la co-coltura del tubulo prossimale renale e degli sferoidi del carcinoma a cellule renali, simulando condizioni in vivo e consentendo un'indagine avanzata sulle interazioni tra le cellule tumorali del rene.

Co-coltura microfluidica dell'epitelio renale sano e tumorale per modellare la progressione del cancro del rene

Presentiamo un protocollo ottimizzato per l'elaborazione di interi reni umani per isolare e coltivare cellule epiteliali del tubulo prossimale renale primario e l'applicazione di queste cellule in una piattaforma microfluidica tridimensionale, microfluidica e microfisiologica per ricapitolare il tubulo prossimale renale.

Isolamento di cellule epiteliali primarie del tubulo prossimale umano e loro utilizzo nella creazione di un modello microfisiologico del tubulo prossimale renale

Scopri come stabilire colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali per studiare gli effetti citotossici della tossina Shiga. Questo metodo supporta la ricerca nefrologica e tossicologica.

Sviluppo di colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali

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