Name: Misurazione dellassorbimento dellanalogo del glucosio, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)ammino)-6-desossiglucosio, nella retina neurale murina intatta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Impara a misurare l'assorbimento del glucosio nella retina neurale murina intatta utilizzando l'analogo fluorescente 6-NBDG. Questo protocollo rapido ed economico facilita lo studio dei cambiamenti metabolici legati all'invecchiamento.

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<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 pinze</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>Utilizzato per la dissezione della retina</td></tr><tr><td>Provette per microcentrifuga da 1,5 ml</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 G x 5/8" ago</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>Utilizzato per perforare la cornea durante la dissezione</td></tr><tr><td>Provette da 5 mL</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>Provette da 50 mL</td><td>Avantor di VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>Piastre fluorescenti a 96</td></tr><tr><td>pozzetti analoghe a 96 pozzetti nere con fondo trasparente</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>Filtro anestetico al carbone</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>Utilizzato in anestesia</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>Per l'inibizione di GLUT1.</td></tr><tr><td>Centrifuga a 4 gradi C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>Gas compresso (5% di anidride carbonica, 95% di ossigeno)</td><td>Airgas</td><td>UN3156</td><td>Utilizzato nell'anestesia set up</td></tr><tr><td>pinza curva</td><td>Strumento chirurgico Roboz</td><td>RS-5137</td><td>Utilizzato per la dissezione della retina</td></tr><tr><td>DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>Utilizzato dopo l'etanolo per pulire il sonicatore tra i campioni</td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Olympus</td><td>szX12</td><td>Utilizzato per la dissezione della retina</td></tr><tr><td>Etanolo 200 proof</td><td>Decon laboratories</td><td>2701</td><td>Da utilizzare per pulire il sonicatore tra i campioni</td></tr><tr><td>Rack per tubi galleggiante in schiuma</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>Per tubi durante l'incubazione in fasi di bagno d'acqua</td></tr><tr><td>Forbici generali Strumento</td><td>chirurgico Roboz</td><td>RS-680</td><td>Utilizzato per la retina dissezione</td></tr><tr><td>Isoflurano 250 mL flacone</td><td>Piramal terapia intensiva</td><td>NDC &nbsp; 6679401725</td> Apparecchiature per <td>anestesia</td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>Vetequip vendute da VWR</td><td>89012-492</td><td>Utilizzate per anestetizzare prima dell'eutanasia</td></tr><tr><td>Salviette Kim</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre</td><td>Dispositivi molecolari Lettore di</td><td>micropiastre SpectraMax M2</td><td>Utilizzato per leggere il campione</td></tr><tr><td>Neurobasal- A media</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>Cono nasale (basso maschera per anestesia di profilo)</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0801</td><td>Utilizzato per erogare l'anestesia</td></tr><tr><td>Obiettivo sul microscopio da dissezione</td><td>Olympus</td><td>DF plapo 1x pf</td><td>Utilizzato per la dissezione della retina</td></tr><tr><td>Piastra di Petri</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>Utilizzato durante la dissezione della retina</td></tr><tr><td>Reagente per il test di perforazione</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>Puntali per pipette P20</td><td>Olympus Materie plastiche</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>Puntali per pipette P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Pipetteman P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M, F144059M</td><td></td></tr><tr><td>Software SoftMax Pro su computer</td><td>Dispositivi molecolari</td><td></td><td>Software utilizzato per leggere il campione</td></tr><tr><td>Dismembratore sonico</td><td>Thermo Fisher Scientifico</td><td>FB50110</td><td>Campione sonicato (retina)</td></tr><tr><td>Pipette di trasferimento</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-9AM</td><td>Utilizzato per trasferire la retina da un tubo all'altro</td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>Utilizzato per la dissezione della retina</td></tr><tr><td>Bagno d'acqua impostato a 37 &deg; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Utilizzato per l'incubazione</td></tr></tbody></table>

misurazione dell'assorbimento dell'analogo del glucosio, 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)ammino)-6-desossiglucosio, nella retina neurale murina intatta

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

La Figura 4 mostra le misurazioni rappresentative della fluorescenza del glucosio da retina di topo WT incubata con 6-NBDG per diversi periodi di tempo. Dopo 30 minuti di incubazione, i livelli di 6-NBDG erano in media di 336 ± 27,91 UA, mentre dopo 60 minuti, i livelli di 6-NBDG sono aumentati a una media di 616,3 ± 8,38 UA. Un'ulteriore incubazione di 30 minuti ha portato a una riduzione del livello di 6-NBDG (506,4 ± 5,3 UA). A 60 minuti, la variabilità dei risultati era al minimo e quind...

Misurazione dell'assorbimento dell'analogo del glucosio, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)ammino)-6-desossiglucosio, nella retina neurale murina intatta

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

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Un metodo semplice e pratico per determinare il grado di accoppiamento tracciante gap junction tra i neuroni della retina è descritta. Questa tecnica permette di studiare la funzione delle sinapsi elettrica tra i neuroni della retina intatta in condizioni di illuminazione diverse e in momenti diversi del giorno e della notte.

Cut-loading: uno strumento utile per esaminare fino di accoppiamento Tracer Junction Gap tra i neuroni della retina

In questo video, dimostriamo una tecnica ex vivo per misurare la deplezione dell'analogo del glucosio extracellulare negli organi di topo prelevati. Consiste nell'incubare il tessuto di topo in una soluzione contenente deossiglucosio marcato in fluorescenza, che viene assorbito dalle cellule. L'assorbimento dell'analogo del glucosio può essere determinato indirettamente misurando la fluorescenza del terreno incubato.

Misurazione della deplezione dell'analogo del glucosio fluorescente extracellulare: una tecnica di misurazione surrogata per valutare l'assorbimento del glucosio negli organi di topo ex vivo

L'attività di singoli neuroni di topi-adulti di età può essere studiato dissociandosi neuroni da regioni specifiche del cervello e l'utilizzo di membrana fluorescenti potenziale di imaging colorante. Da sperimentazioni risposte alle modifiche del glucosio, questa tecnica può essere utilizzata per studiare la sensibilità glucosio di adulti neuroni ipotalamici ventromedial.

Potenziale di membrana Dye Imaging di ventromediale dell&#39;ipotalamo neuroni da topi adulti per studiare glucosio Sensing

Questa tecnica viene descritto la registrazione in tempo reale del consumo di ossigeno e tassi di acidificazione extracellulare nei tessuti retinici explanted del mouse utilizzando un analizzatore di flusso extracellulare.

Misurazione del metabolismo energetico in tessuto retinico Explanted usando l'analisi di flusso extracellulare

L'imaging in vivo è un potente strumento per lo studio della biologia in salute e malattia. Questo protocollo descrive l'imaging transpupillare della retina del topo con un microscopio standard a due fotoni. Dimostra anche diversi metodi di imaging in vivoimaging per marcare in modo fluorescente più coorti cellulari della retina.

Transpupillare Due fotoni In vivo Imaging della retina del topo

Questo protocollo descrive un metodo dettagliato per la preparazione e la colorazione con immunofluorescenza dei supporti piatti retinici dei topi e l'analisi. Anche l'uso della fluorangiografia del fondo oculare (FFA) per i cuccioli di topo e l'elaborazione delle immagini sono descritti in dettaglio.

Monitoraggio della crescita dinamica dei vasi retinici in un modello murino di retinopatia indotta da ossigeno

L'assorbimento del glucosio è aumentato nei motoneuroni Drosophila affetti da proteinopatia TDP-43 (TAR DNA binding protein), come indicato da un sensore di glucosio geneticamente codificato basato su FRET.

Misurazione dell'assorbimento di glucosio in modelli di Drosophila di proteinopatia TDP-43

La vascolarizzazione retinica del topo è particolarmente interessante per comprendere i meccanismi di formazione del pattern vascolare. Questo protocollo misura automaticamente il diametro dei vasi retinici di topo da immagini del fondo oculare dell'angiografia fluorescente a una distanza fissa dal disco ottico.

Misurazione del diametro dei vasi retinici da immagini di angiografia fluorescente di topo

Descriviamo un metodo per la visualizzazione ripetutamente microglia murina e monociti...

Un sottile cranio Tecnica Finestra per cronica a due fotoni In vivo</emImaging> della microglia nei modelli murini di neuroinfiammazione

Questo articolo descrive la registrazione delle singole cellule da fluorescente tag popolazioni neuronali della retina topo intatto. Con l'eccitazione a due fotoni infrarossi cellule transgenetically etichettati sono stati mirati per patch-clamp per lo studio di registrazione le loro risposte luce, proprietà del campo recettivo, e la morfologia.

Caratterizzazione elettrofisiologica di GFP-Esprimendo popolazioni di cellule nella retina intatto

Impara a misurare l'assorbimento del glucosio nella retina neurale murina intatta utilizzando l'analogo fluorescente 6-NBDG. Questo protocollo rapido ed economico facilita lo studio dei cambiamenti metabolici legati all'invecchiamento.

Misurazione dellassorbimento dellanalogo del glucosio, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)ammino)-6-desossiglucosio, nella retina neurale murina intatta (Video) | JoVE Journal

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