Name: Imaging a super-risoluzione del biofilm di Proteus mirabilis mediante microscopia ad espansione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Scopri la microscopia ad espansione PmbExM per l'imaging super-risoluzione di biofilm di Proteus mirabilis. Questo metodo consente la visualizzazione nanometrica delle strutture cellulari con microscopi convenzionali.

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<ol><li>Franklin, M. J., Chang, C., Akiyama, T., Bothner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+technologies+for+studying+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">New technologies for studying biofilms.</a> Microbiol Spectr. 3 (4), 10(2015).</li>
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<li>Hurst, P. L., Nielsen, J., Sullivan, P. A., Shepherd, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+properties+of+a+cellulase+from+Aspergillus+niger%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Purification and properties of a cellulase from Aspergillus niger.</a> Biochem J. 165 (1), 33-41 (1977).</li>
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<li>Bano, S., Qader, S. A. U., Aman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+characterization+of+novel+%CE%B1-amylase+from+Bacillus+subtilis+KIBGE+HAS%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+PharmSciTech%22%5BJournal%5D)">Purification and characterization of novel α-amylase from Bacillus subtilis KIBGE HAS.</a> AAPS PharmSciTech. 12, 255-261 (2011).</li>
<li>Kaplan, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+involved+in+the+synthesis+and+degradation+of+matrix+polysaccharide+in+Actinobacillus+actinomycetemcomitans+and+Actinobacillus+pleuropneumoniae+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genes involved in the synthesis and degradation of matrix polysaccharide in Actinobacillus actinomycetemcomitans and Actinobacillus pleuropneumoniae biofilms.</a> J Bacteriol. 186 (24), 8213-8220 (2004).</li>
<li>Kaplan, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+human+DNase+I+decreases+biofilm+and+increases+antimicrobial+susceptibility+in+staphylococci%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antibiot%22%5BJournal%5D)">Recombinant human DNase I decreases biofilm and increases antimicrobial susceptibility in staphylococci.</a> J Antibiot. 65 (2), 73-77 (2012).</li>
<li>Schlapp, G., Scavone, P., Zunino, P., Härtel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+3D+architecture+of+uropathogenic+Proteus+mirabilis+batch+culture+biofilms%3A+A+quantitative+confocal+microscopy+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of 3D architecture of uropathogenic Proteus mirabilis batch culture biofilms: A quantitative confocal microscopy approach.</a> J Microbiol Methods. 87 (2), 234-240 (2011).</li>
<li>Schermelleh, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopy+demystified%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopy demystified.</a> Nat Cell Biol. 21 (1), 72-84 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&alfa;-amilasi da Bacillus sp.</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>10070</td><td>Digestione di polisaccaridi</td></tr><tr><td>0,1% (p/v) soluzione acquosa di poli-L-lisina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td>Immobilizzazione del campione per l'imaging</td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti in vetro da 12 mm</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CLS-1760</td><td>Componente della camera di gelificazione</td></tr><tr><td>Fotocamera C13440-20CU a 16 bit</td><td>Hamamatsu Fotonica</td><td>Non disponibile</td><td>Fotocamera digitale CMOS per l'acquisizione di immagini</td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti in vetro da 24 mm x 50 mm</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CLS-1764</td><td>Manipolazione/manipolazione dei campioni</td></tr><tr><td>Camera di imaging stampata in 3D</td><td>Design</td> <td>interno-Opzione</td> <td>camera di imaging</td></tr><tr><td>4-idrossi-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-ossile (4-idrossi-TEMPO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>176141</td><td>Componente della soluzione gelificante</td></tr><tr><td>Piastra con fondo in vetro a 6 pozzetti con pareti nere</td><td>CelVis</td><td>P06-1.5H-N</td><td>Opzione camera di imaging</td></tr><tr><td>Acido acetico&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>818755</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>acrilammide&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4058</td><td>Componente della soluzione monomerica</td></tr><tr><td>Persolfato di ammonio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3678</td><td>Componente della soluzione gelificante</td></tr><tr><td>Microscopio Axiovert 200</td><td>Zeiss</td><td>Non disponibile</td><td>Microscopio confocale</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8106</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>C-Apocromatico 63x 1,2 NA obiettivo ad immersione in acqua</td><td>Zeiss</td><td>Non disponibile</td><td>Obiettivo per microscopio</td></tr><tr><td>Cellulasi da Aspergillus niger</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>22178</td><td>Digestione polisaccaridica</td></tr><tr><td>Chamlide CMB Camera di imaging magnetica a piastra da 35 mm</td><td>Strumento a cellule vive</td><td>Non disponibile</td><td>Opzione camera di imaging</td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>472301</td><td>MA-NHS soluzione stock di reagenti di ancoraggio&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosfato disodico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3264</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>Pulizia e sterilizzazione</td></tr><tr><td>Acido etilendiamminotetraacetico</td><td>Merck</td><td>324503</td><td>Componente tampone enzimatico Piastre</td></tr><tr><td>a 24 pozzetti in polistirene Falcon</td><td>Corning</td><td>351147</td><td>Piattaforma per procedure generali</td></tr><tr><td>Software</td> <td>FIJINational Institutes of</td> <td>Health-Software</td> di <td>elaborazione delle immagini</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Guanidina cloridrato</td><td>Thermo Scientific</td><td>24115</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Huygens Software</td><td>Scientific Volume Imaging-Deconvoluzione</td><td></td> <td>software per il ripristino delle immagini</td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Supelco</td><td>1.00317</td><td>Preparazione del tampone</td></tr><tr><td>Kimwipes carta velina</td><td>Fisher Scientiffic</td><td>06-666</td><td>Rimozione dell'acqua in eccesso</td></tr><tr><td>Pinzette da laboratorio</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienze M5E</td><td>Manipolazione/manipolazione generale dei campioni</td></tr><tr><td>Luria Bertani brodo</td><td>Invitrogen</td><td>12795-027</td><td>Terreno di crescita del biofilm</td></tr><tr><td>Lyticase da Arthrobacter luteus</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>L4025</td><td>Digestione dei polisaccaridi</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5652</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Acido metacrilico N-idrossisuccinimidil estere</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>730300</td><td>Reagente di ancoraggio</td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32213</td><td>Disidratazione e conservazione dei campioni</td></tr><tr><td>MicrobeJ&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>Plug-in del software di elaborazione delle immagini</td></tr><tr><td>Vetrini per microscopia</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CG-8221</td><td>Componente della camera di gelificazione</td></tr><tr><td>Fosfato monosodico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Mutanolisina da Streptomyces globisporus</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>M990</td><td>Digestione del peptidoglicano</td></tr><tr><td>N, N, N', N'-tetrametiletilendiammina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7024</td><td>Componente della soluzione gelificante</td></tr><tr><td>N,N&prime;-metilenbisacrilammide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1533</td><td>Componente della soluzione monomerica</td></tr><tr><td>Nunc 40,4 mm con fondo di vetro</td><td>Thermo Fisher</td><td>12-567-400</td><td>Opzione camera di imaging</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>Fissazione del campione</td></tr><tr><td>Soluzione salina tampone fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>79383</td><td>Componente della soluzione monomerica, lavaggio, tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Proteinasi K da Engyodontium album</td><td>Invitrogen</td><td>25530-031</td><td>Digestione proteica</td></tr><tr><td>Proteus mirabilis ATCC 12453</td><td>Microbiologics</td><td>0440P</td><td>Soggetto dello studio</td></tr><tr><td>Piccolo pennello piatto</td><td>Negozio di ferramenta</td><td></td> <td>locale-Manipolazione/manipolazione dei campioni</td></tr><tr><td>Acetato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>241245</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Acrilato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408220</td><td>Componente soluzione monomerica</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Cloruro di</td> <td>sodioSigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>Componente della soluzione monomerica, componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Idrossido di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>Pulizia dei vetrini</td></tr><tr><td>Linea laser a stato solido</td><td>Omicron</td><td>Non disponibile</td><td>488, 568 e 647 nm Linea laser di eccitazione</td></tr><tr><td>SYTO 61 colorazione con acido nucleico</td><td>Invitrogen</td><td>S11343</td><td>Colorante</td></tr><tr><td>fluorescente Tris(idrossimetil)amminometano cloridrato</td><td>SAFC</td><td>108219</td><td>Componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>Permeabilizzazione del campione, componente tampone enzimatico</td></tr><tr><td>Software di acquisizione Volocity 7.0.0</td> Software di acquisizione <td>Quorum</td><td></td> <td>Technologies-Microscoy</td></tr><tr><td>Sistema di dischi rotanti Volocity ViewVox</td><td>Perkin-Elmer</td><td>Non disponibile</td><td>Sistema di dischi rotanti per confocali microscopio</td></tr><tr><td>Agglutinina del germe di grano &ndash; Alexa Fluor 488 coniugato di lectina fluorescente</td><td>Invitrogen</td><td>W11261</td><td>Colorante fluorescente</td></tr></tbody></table>

imaging a super-risoluzione del biofilm di proteus mirabilis mediante microscopia ad espansione

Super-resolution Imaging of Proteus mirabilis Biofilm by Expansion Microscopy

PmbExM ha ampliato il biofilm di P. mirabilis di 4,3 volte e ha preservato la morfologia e la topologia 
La Figura 3A-D evidenzia l'ingrandimento fisico delle cellule del biofilm di P. mirabilis e l'aumento della risoluzione portato dalla tecnica. Inoltre, questo non è stato osservato solo in regioni di biofilm sottili dove le cellule si organizzano in un layout simile a un monostrato, ...

Imaging a super-risoluzione del biofilm di Proteus mirabilis mediante microscopia ad espansione

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