Name: Isolamento rapido di vescicole extracellulari derivate dal latte materno umano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T12:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Impara un metodo di filtrazione rapida per isolare vescicole extracellulari dal latte materno umano con elevata purezza. Questa tecnica riduce i tempi rispetto all'ultracentrifugazione e offre potenziali applicazioni terapeutiche.

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<ol><li>Galley, J. D., Besner, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+breast+milk-derived+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of breast milk-derived extracellular vesicles.</a> Nutrients. 12 (3), 745(2020).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk-derived+exosomes+attenuate+cell+death+in+intestinal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Human breast milk-derived exosomes attenuate cell death in intestinal epithelial cells.</a> Innate Immun. 24 (5), 278-284 (2018).</li>
<li>Hock, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+milk-derived+exosomes+promote+intestinal+epithelial+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Breast milk-derived exosomes promote intestinal epithelial cell growth.</a> J Pediatr Surg. 52 (5), 755-759 (2017).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nat Commun. 6, 7321(2015).</li>
<li>Lasser, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+saliva%2C+plasma%2C+and+breast+milk+exosomes+contain+RNA%3A+Uptake+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Human saliva, plasma, and breast milk exosomes contain RNA: Uptake by macrophages.</a> J Transl Med. 9, 9(2011).</li>
<li>Chan, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+interferon+sensing+unlocks+dormant+adipocyte+inflammatory+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Type I interferon sensing unlocks dormant adipocyte inflammatory potential.</a> Nat Commun. 11 (1), 2745(2020).</li>
<li>Miyake, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk+exosomes+attenuate+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Human breast milk exosomes attenuate intestinal damage.</a> Pediatr Surg Int. 36 (2), 155-163 (2020).</li>
<li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+isolating+methods+for+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recent developments in isolating methods for exosomes.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1100892(2022).</li>
<li>Patel, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+exosome+isolation+methods+using+culture+supernatant+for+optimum+yield%2C+purity+and+downstream+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications.</a> Sci Rep. 9 (1), 5335(2019).</li>
<li>Gandhi, J., Naik, M. N., Mishra, D. K., Joseph, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+Aspergillus+flavus+endophthalmitis-derived+extracellular+vesicles+in+an+in+vivo+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mycol%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of Aspergillus flavus endophthalmitis-derived extracellular vesicles in an in vivo murine model.</a> Med Mycol. 60 (9), myac064(2022).</li>
<li>Palinski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+purinergic+receptor+p2x4+regulates+neoangiogenesis+induced+by+microvesicles+from+sarcoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lysosome purinergic receptor p2x4 regulates neoangiogenesis induced by microvesicles from sarcoma patients.</a> Cell Death Dis. 12 (9), 797(2021).</li>
<li>Tantengco, O. aG., Radnaa, E., Shahin, H., Kechichian, T., Menon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+talk%3A+Trafficking+and+functional+impact+of+maternal+exosomes+at+the+feto-maternal+interface+under+normal+and+pathologic+statesdagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Cross talk: Trafficking and functional impact of maternal exosomes at the feto-maternal interface under normal and pathologic statesdagger.</a> Biol Reprod. 105 (6), 15621576(2021).</li>
<li>Caruso Bavisotto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+hsp60%3A+A+potentially+useful+biomarker+for+diagnosis%2C+assessing+prognosis%2C+and+monitoring+response+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Exosomal hsp60: A potentially useful biomarker for diagnosis, assessing prognosis, and monitoring response to treatment.</a> Expert Rev Mol Diagn. 17 (9), 815-822 (2017).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+trend+of+milk-derived+exosomes%3A+Cargos%2C+functions%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Latest trend of milk-derived exosomes: Cargos, functions, and applications.</a> Front Nutr. 8, 747294(2021).</li>
<li>Li, P., Kaslan, M., Lee, S. H., Yao, J., Gao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+exosome+isolation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Progress in exosome isolation techniques.</a> Theranostics. 7 (3), 789-804 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>(H+L) Anti-topo coniugato HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1721011</td><td></td></tr><tr><td>(H+L) Anti-coniglio coniugato HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1706515</td><td></td></tr><tr><td>Filtro a siringa 0,20</td><td>Fisherbrand</td><td>09-719C</td><td></td></tr><tr><td>Filtro a 0,70 di cellule um</td><td>Corning</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td>1,5M Tris HCL</td><td>Realizzati internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubi da 15 mL</td><td>Falcone</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Set di estensione filtro da 16 pollici</td><td>B-BRAUN</td><td>FE2012F</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris HCL</td><td>Teknova</td><td>T1068</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>Tubi da 50 mL</td><td>Falcone</td><td>353070</td><td></td></tr><tr><td>Buffer di campione riducente 5x</td><td>Thermo Scientific</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Acilamide</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>BP1410-1</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td></td></tr><tr><td>AMT NanoSprint43 Mark-II</td><td>AMT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD63</td><td>Novusbio</td><td>NBP2-32830</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD9</td><td>Invitrogen</td><td>10626D</td><td></td></tr><tr><td>APS</td><td>Thermo Scientific</td><td>17874</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il test proteico BCA</td><td>Pierce</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Tubi Beckman</td><td>Beckman coulter&nbsp;</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>BrightStar ECL Chemiluminescente</td><td>Alkali Scientific</td><td>XR92</td><td></td></tr><tr><td>FBS esgotata da esosomi</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0464480</td><td></td></tr><tr><td>Buffer di blocco rapido</td><td>Pierce</td><td>37575</td><td></td></tr><tr><td>Siero bovino fetale</td><td>Life Technologies</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Hsp70</td><td>Invitrogen</td><td>MA3-006</td><td></td></tr><tr><td>Insulina umana</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno</td><td>Fisher Scientific</td><td>H325-500</td><td></td></tr><tr><td>IEC-6&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1592</td><td></td></tr><tr><td>JEOL 1400 FLASH TEM</td><td>JEOL USA Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer di campione riducente a traccia di corsia</td><td>Thermo Scientific</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Latte in polvere</td><td>Bioworld</td><td>30620074-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NS 300</td><td>Malvern Instruments Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana di nitrocellulosa</td><td>Tecnologie vitali</td><td>88018</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchio di scarica PELCO easiGlow</td><td>Ted Pella</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini compresse inibitori della proteasi</td><td>Pierce</td><td>A32955</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RIPA</td><td>Pierce</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>BP2436-200</td><td></td></tr><tr><td>Fiaschetta T-25</td><td>Thermo Scientific</td><td>156367</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>Realizzati internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0801</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina EDTA</td><td>Gibso</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescenti 20</td><td>Thermo Scientific</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento rapido di vescicole extracellulari derivate dal latte materno umano

Rapid Isolation of Human Breast Milk-Derived Extracellular Vesicles

Isolamento rapido di vescicole extracellulari derivate dal latte materno umano

Extracellular vesicles (EVs), nanosized particles approximately 20-1000 nm in size, are rapidly garnering attention for their therapeutic potential. ...

rapid-isolation-of-human-breast-milk-derived-extracellular-vesicles

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Fonte: Watson, DC, et.al. Isolamento e purificazione scalabili di vescicole extracellulari da Escherichia coli e altri batteri. J. Vis. Exp. (2021)Questo video mostra l'isolamento e la concentrazione di vescicole extracellulari (EV) derivate dalla membrana esterna di batteri geneticamente modificati. Il processo prevede la coltura dei batteri per rilasciare le vescicole extracellulari, seguita da fasi sequenziali di centrifugazione e filtrazione per rimuovere cellule e detriti. Infine,...

Isolamento e arricchimento di vescicole extracellulari derivate dalla membrana esterna da batteri

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Separation and Enrichment of Extracellular Vesicles in the Presence of Virions

Dettagli Questo protocollo di un metodo per isolare vescicole extracellulari (EV), piccole particelle membranose rilasciate dalle cellule, da un minimo di 10 campioni di siero microlitri. Questo approccio elude la necessità di ultracentrifugazione, richiede solo pochi minuti di tempo di saggio, e permette l'isolamento di EVs da campioni di volumi limitati.

Dispositivi a base di carta per Isolamento e caratterizzazione di extracellulare vescicole

Questo protocollo descrive metodi per purificare, quantificare e caratterizzare vescicole extracellulari (EVs) / esosomi da cellule epiteliali mammarie non aderenti / mesenchimali e per usarle per trasferire la capacità di formazione delle ghiandole mammarie alle cellule epiteliali mammarie luminali. EVs / esosomi derivati ​​da cellule epiteliali mammarie simili a stelo possono trasferire questa proprietà cellulare alle cellule che ingeriscono gli EV / esosomi.

Trasferimento di abilità di formazione del ghiandale mammario tra le cellule epiteliali basali del mammifero e le cellule luminescenti mammarie attraverso le vescicole / esosomi extracellulari

Qui, descriviamo due protocolli di isolamento delle vescicole extracellulari, centrifugazione di ultrafiltrazione e ultracentrifugazione con centrifugazione su gradiente densità, per isolare le vescicole extracellulari da campioni di liquido di lavaggio broncoalveolare murino. Le vescicole extracellulari derivate dal fluido di lavaggio broncoalveolare murino con entrambi i metodi sono quantificate e caratterizzate.

Isolamento delle vescicole extracellulari dal fluido di lavaggio broncoalveolare murino usando una tecnica di centrifugazione di ultrafiltrazione

Viene descritta una procedura passo-passo per l'immobilizzazione senza etichette di esosomi e vescicoli extracellulari da campioni liquidi e la loro imaging mediante microscopia a forza atomica (AFM). Le immagini AFM vengono utilizzate per stimare le dimensioni delle vesciche nella soluzione e caratterizzare altre proprietà biofisiche.

Imaging delle vescibole extracellulari mediante microscopia a forza atomica

Questo protocollo isola le vesciche extracellulari (EV) lontano dai virioni con elevata efficienza e resa incorporando precipitazioni EV, ultracentrifugazione del gradiente di densità e cattura di particelle per consentire un flusso di lavoro semplificato e una riduzione dell'avvio volume, con conseguente preparazione riproducibile per l'uso in tutte le ricerche EV.

Purificazione dei preparati vescicoli extracellulari ad alto rendimento lontano dal virus

Il protocollo qui dimostra che le vescicole extracellulari possono essere adeguatamente separate dai terreni di coltura cellulare condizionati utilizzando la cromatografia ad esclusione dimensionale.

Cromatografia ad esclusione dimensionale per separare le vescicole extracellulari dai terreni di coltura cellulare condizionati

Questo protocollo dimostra come isolare le piccole vescicole extracellulari derivate dal cordone ombelicale umano (hUC-MSC-sEV) con una semplice impostazione da banco su scala di laboratorio. La distribuzione dimensionale, la concentrazione proteica, i marcatori sEVs e la morfologia degli hUC-MSC-sEV isolati sono caratterizzati rispettivamente dall'analisi del tracciamento delle nanoparticelle, dal saggio della proteina BCA, dal western blot e dal microscopio elettronico a trasmissione.

Un semplice metodo di filtrazione da banco per isolare piccole vescicole extracellulari da cellule staminali mesenchimali umane

Questo studio descrive un metodo per isolare e purificare le vescicole extracellulari batteriche (BEV) arricchite da feci umane tramite centrifugazione a gradiente di densità (DGC), identifica le caratteristiche fisiche dei BEV dalla morfologia, dalla dimensione delle particelle e dalla concentrazione e discute le potenziali applicazioni dell'approccio DGC nella ricerca clinica e scientifica.

Isolamento e purificazione di vescicole extracellulari batteriche da feci umane mediante centrifugazione a gradiente di densità

Impara un metodo di filtrazione rapida per isolare vescicole extracellulari dal latte materno umano con elevata purezza. Questa tecnica riduce i tempi rispetto all'ultracentrifugazione e offre potenziali applicazioni terapeutiche.

Isolamento rapido di vescicole extracellulari derivate dal latte materno umano

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