Name: Deplezione rapida dei macrofagi renali utilizzando lo strumento di ablazione cellulare CD59/intermedisina umana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Scopri la deplezione selettiva dei macrofagi renali con intermedilysin e CD59 umano nel topo. Questo metodo permette di studiare la rigenerazione cellulare e la sorveglianza immunitaria dopo lesione renale acuta.

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<ol><li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Nelson, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+renal+mononuclear+phagocytic+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The renal mononuclear phagocytic system.</a> J Am Soc Nephrol. 23 (2), 194-203 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Harris, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in renal disease.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (1), 21-27 (2011).</li>
<li>Islamuddin, M., Qin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+macrophages+and+NLRP3+inflammasomes+in+kidney+diseases+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Renal macrophages and NLRP3 inflammasomes in kidney diseases and therapeutics.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 229(2024).</li>
<li>Ricardo, S. D., van Goor, H., Eddy, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+diversity+in+renal+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Macrophage diversity in renal injury and repair.</a> J Clin Invest. 118 (11), 3522-3530 (2008).</li>
<li>Mily, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+of+M1+and+M2+Human+Monocyte-Derived+Cells+and+Analysis+with+Flow+Cytometry+upon+Mycobacterium+tuberculosis+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polarization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Cells and Analysis with Flow Cytometry upon Mycobacterium tuberculosis Infection.</a> J Vis Exp. (163), e61807(2020).</li>
<li>Huen, S. C., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Renal+Injury+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Renal Injury and Repair.</a> Annu Rev Physiol. 79, 449-469 (2017).</li>
<li>Tang, P. M., Nikolic-Paterson, D. J., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%3A+versatile+players+in+renal+inflammation+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages: versatile players in renal inflammation and fibrosis.</a> Nat Rev Nephrol. 15 (3), 144-158 (2019).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+fate%2C+dynamics+and+niches+of+renal+macrophages+of+bone+marrow+or+embryonic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Distinct fate, dynamics and niches of renal macrophages of bone marrow or embryonic origins.</a> Nat Commun. 11 (1), 2280(2020).</li>
<li>Chew, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+resident+macrophages+have+distinct+subsets+and+multifunctional+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Kidney resident macrophages have distinct subsets and multifunctional roles.</a> Matrix Biol. 127, 23-37 (2024).</li>
<li>Cheung, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+macrophage+subpopulations+occupy+distinct+microenvironments+in+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Resident macrophage subpopulations occupy distinct microenvironments in the kidney.</a> JCI Insight. 7 (20), 161078(2022).</li>
<li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li>
<li>Feng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre-inducible+human+CD59+mediates+rapid+cell+ablation+after+intermedilysin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cre-inducible human CD59 mediates rapid cell ablation after intermedilysin administration.</a> J Clin Invest. 126 (6), 2321-2333 (2016).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+conditional+targeted+ablation+of+cells+expressing+human+CD59+in+transgenic+mice+by+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid conditional targeted ablation of cells expressing human CD59 in transgenic mice by intermedilysin.</a> Nat Med. 14 (1), 98-103 (2008).</li>
<li>Giddings, K. S., Zhao, J., Sims, P. J., Tweten, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD59+is+a+receptor+for+the+cholesterol-dependent+cytolysin+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human CD59 is a receptor for the cholesterol-dependent cytolysin intermedilysin.</a> Nat Struct Mol Biol. 11 (12), 1173-1178 (2004).</li>
<li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+learning-dependent+synapse+formation+through+brain-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia promote learning-dependent synapse formation through brain-derived neurotrophic factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li>
<li>Cao, Q., Harris, D. C., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+kidney+injury%2C+inflammation%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in kidney injury, inflammation, and fibrosis.</a> Physiology. 30 (3), 183-194 (2015).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+macrophages+in+fibrosis+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">The role of macrophages in fibrosis of chronic kidney disease.</a> Biomed Pharmacother. 177, 117079(2024).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+cell+ablation+tools+and+their+applications+to+study+loss+of+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Versatile cell ablation tools and their applications to study loss of cell functions.</a> Cell Mol Life Sci. 76 (23), 4725-4743 (2019).</li>
<li>Yashchenko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cx3cr1+kidney+resident+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cx3cr1 kidney resident macrophage heterogeneity.</a> Front Immunol. 14, 1082078(2023).</li>
<li>Duffield, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+and+immunologic+inflammation+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages and immunologic inflammation of the kidney.</a> Semin Nephrol. 30 (3), 234-254 (2010).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (2), 317-326 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Tissue+Repair%2C+Regeneration%2C+and+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Tissue Repair, Regeneration, and Fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Guo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+proximal+tubular+epithelial+cells+and+other+interstitial+cells+in+tubulointerstitial+fibrosis+after+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between proximal tubular epithelial cells and other interstitial cells in tubulointerstitial fibrosis after renal injury.</a> Front Endocrinol. 14, 1256375(2023).</li>
<li>Guillot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acid-activated+macrophages+promote+biliary+epithelial+cell+proliferation+through+integrin+%CE%B1v%CE%B26+upregulation+following+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Bile acid-activated macrophages promote biliary epithelial cell proliferation through integrin αvβ6 upregulation following liver injury.</a> J Clin Invest. 131 (9), 132305(2021).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+Death+Preferentially+Induces+Liver+Injury+and+Inflammation+Through+the+Activation+of+Chemokine+%28C-C+Motif%29+Receptor+2-Positive+Macrophages+and+Lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Adipocyte Death Preferentially Induces Liver Injury and Inflammation Through the Activation of Chemokine (C-C Motif) Receptor 2-Positive Macrophages and Lipolysis.</a> Hepatology. 69 (5), 1965-1982 (2019).</li>
<li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Atp6v1g3-Cre+mice+for+investigation+of+intercalated+cells+and+the+collecting+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Generation of Atp6v1g3-Cre mice for investigation of intercalated cells and the collecting duct.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 325 (6), F770-F778 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,45 & micro; m filtro per siringhe</td><td>Millipore</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>4-15% Gel proteici senza macchie TGX</td><td>Bio-Rad</td><td>4568084</td><td></td></tr><tr><td>Buffer di caricamento 6X</td><td>Pescatore</td><td>50-103-6570</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanolo</td><td>WWR Scienze della Vita</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>ACK (Cloruro di Ammonio-Potassio) Tampone Lisanti</td><td>Gibco</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Perle in resina Affinity</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di ampicillina sodica</td><td>Ricerca Zymo</td><td>A1001-5</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD11b-PE-Cy7 (Clone M1/70)</td><td>Invitrogen</td><td>25-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD16/32 (Fc&gamma; RIII/II, Clone 93)</td><td>eBioscience</td><td>48-0161-80</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45-e450 (Clone 30-F11)</td><td>eBioscience</td><td>48-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80-BV605 (clone BM8)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>123133</td><td></td></tr><tr><td>Anti-hCD59-PE (Clone OV9A2)</td><td>Invitrogen</td><td>12-0596-42</td><td></td></tr><tr><td>Colorante Aqua Live/Dead</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; L34957A</td><td></td></tr><tr><td>Perline (resina)</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>Benzonasi Nucleasi</td><td>Millipore</td><td>70664-10KUN</td><td></td></tr><tr><td>Reagente per l'estrazione di proteine BugBuster</td><td>Millipore</td><td>70584-4</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga per microprovette</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga per provette</td><td>Termo Scientifico</td><td>75-001-241</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi tipo IV</td><td>Società biochimica Worthington</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>Olio di mais</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Visualizzazione del materiale C8267</td><td></td></tr><tr><td>Desossiribonucleasi (DNAsi) I</td><td>Società biochimica Worthington</td><td>LS002007</td><td></td></tr><tr><td>Colonna di resina Detoxi-Gel</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco' soluzione salina tamponata con fosfato)</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Provette EDTA</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>FBS (Siero fetale bovino)</td><td>Gibco</td><td>10082-139</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Pescatore</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (Hank' s Soluzione salina ballanced)</td><td>Gibco</td><td>24020117</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropil &beta;-D-1-tiogalattopiranoside)&nbsp;</td><td>Millipore-Sigma</td><td>206-703-0</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VET uno</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>LB media</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRCcitometro a flusso a flusso a frottola</td><td>BD Bioscienze</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MES [acido 2-(N-morfinolino) etansolfonico]</td><td>Pescatore</td><td>50-488-796</td><td></td></tr><tr><td>MOPS [acido 3-(N-morfinolino) propansolfonico]</td><td>Pescatore</td><td>50-213-522</td><td></td></tr><tr><td>Mezzi di gradiente di densità Percoll</td><td>Citiva</td><td>17089101</td><td></td></tr><tr><td>Pompa peristaltica</td><td>Fisher Scientifico</td><td></td><td>Fuori produzione ora, usa un'alternativa</td></tr><tr><td>PFA (Paraformaldeide)</td><td>Termo Scientifico</td><td>I28800</td><td></td></tr><tr><td>Colonna di depurazione</td><td>Millipore</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione rLysozyme</td><td>Novagen</td><td>Codice 20C71110</td><td></td></tr><tr><td>Bagno d'acqua tremante&nbsp;</td><td>Termo Scientifico</td><td>TSSB15</td><td></td></tr><tr><td>Kit per dialisi Slide-A-Lyzer</td><td>Termo</td><td>66107</td><td></td></tr><tr><td>Desossicolato di sodio</td><td>Pescatore</td><td>BP349-100</td><td>Appena fatto o da meno di un mese</td></tr><tr><td>Filtro cellulare sterile (40 &mu; m)</td><td>Fisher Scientifico</td><td>22-363-547</td><td></td></tr><tr><td>Tamoxifene</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6734</td><td></td></tr><tr><td>Filtro ultra centrifugo</td><td>Millipore</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>Acqua ultrapura</td><td>Termo</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Miscelatore a vortice</td><td>Fisher Scientifico</td><td>2215365</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-ME (&beta;-mercaptoetanolo)</td><td>Pescatore</td><td>BP176-100</td><td></td></tr></tbody></table>

deplezione rapida dei macrofagi renali utilizzando lo strumento di ablazione cellulare cd59/intermedisina umana

Rapid Depletion of Renal Macrophages Using Human CD59/Intermedilysin Cell Ablation Tool

La purificazione dell'ILY ricombinante His-Tag ha seguito lo stesso protocollo precedentemente descritto in14. ILY è stato espresso con successo in cellule BL21(DE3) di E. coli , trasformate con un plasmide codificante il gene ILY da Streptococcus intermedius. Dopo l'induzione con IPTG, era evidente una sovraespressione della proteina bersaglio. Dopo l'espressione, l'ILY è stato purificato mediante cromatografia di affinità nichel-NTA, sfruttando un His-tag C-terminale per il leg...

Deplezione rapida dei macrofagi renali utilizzando lo strumento di ablazione cellulare CD59/intermedisina umana

Renal macrophages (RMs) are essential for kidney health, orchestrating immune surveillance, tissue homeostasis, and responses to injury. Previously, we ...

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Biologia dello sviluppo

I macrofagi hanno un ruolo centrale nella omeostasi e patologia in molti tessuti. Il protocollo presentato qui descrive i metodi per esaurire i...

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I macrofagi sono cellule plastiche del sistema ematopoietico che hanno un ruolo fondamentale nell'immunità protettiva e nell'omeostasi. In questa relazione, descriviamo tecniche ottimizzate in vitro per caratterizzare fenotipicamente e funzionalmente macrofagi regolatori infiltranti che si accumulano nell'organo trapiantato in condizioni tolerogene.

Caratterizzazione funzionale dei macrofagi regolatori che inibiscono l&#39;immunità reattiva dell&#39;inferta

Per le applicazioni a valle sono necessarie tecniche affidabili ed efficienti per l'isolamento delle cellule immunitarie renali. Ciò richiede la marcatura degli anticorpi di superficie di un piccolo numero di cellule immunitarie renali. Qui, descriviamo un metodo conciso per l'isolamento delle cellule immunitarie renali che sembra raggiungere questo obiettivo.

Affidabile e di alta efficienza di estrazione del rene cellule immunitarie

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Questo protocollo consente un ricercatore di isolare e caratterizzare residente in tessuto hallmark macrofagi in vari tessuti infiammati estratte dai modelli indotta da dieta di disordini metabolici.

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Qui descriviamo un approccio microscopico a foglio leggero per visualizzare l'infiltrato cardiovascolare CD45 + in un modello murino di miocardite fulminante asettica, che è indotto dal trattamento tossicolare intracellulare di tenebre di topi CD11c.DTR.

Visualizzazione quantitativa di leucociti infiltrati in un modello di murina della miocardite fulminante mediante microscopia a foglio chiaro

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Qui, vi presentiamo un protocollo per preparare i timociti apoptotici e i macrofagi peritoneali e analizzare l'efficienza dell'efferocitosi e il blocco specifico inibitore-mediato di timociti apoptotici engulfment. Questo protocollo ha un'ampia applicazione nella clearance mediata da cellule di altre particelle, tra cui perle artificiali e batteri.

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Qui presentiamo un protocollo di dissociazione meccanica per isolare rapidamente i macrofagi dal ganglio della radice dorsale per la fenotipizzazione e l'analisi funzionale.

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Dati i limitati modelli di xenotrapianto disponibili per studiare le interazioni tra CART umane e cellule mieloidi, abbiamo stabilito modelli in vitro e in vivo per comprendere l'impatto dei macrofagi umani sulle cellule CART. I risultati possono potenzialmente essere generalizzati per valutare i ruoli dei macrofagi nel microambiente tumorale e testare immunoterapie mirate ai macrofagi.

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Utilizzando un modello ex vivo di espianti, piccoli pezzi della porzione rostrale del tessuto adiposo bianco viscerale di topi magri vengono coltivati per 7–10 giorni, permettendo l'induzione e lo studio dell'infiammazione del tessuto adiposo durante l'alimentazione ricca di grassi.

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