Name: Assemblaggio di bioreattori per la coltura continua di comunità fecali complesse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Impara a montare bioreattori miniaturizzati per la coltura continua di comunità fecali complesse in condizioni anaerobiche. Questo metodo consente esperimenti paralleli controllati per studiare l'interazione tra microbioma e risposta alle terapie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+estimates+for+the+number+of+human+and+bacteria+cells+in+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Revised estimates for the number of human and bacteria cells in the body.</a> PLoS Biol. 14 (8), e1002533(2016).</li>
<li>Postler, T. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+holobiont%3A+how+microbial+metabolites+affect+human+health+and+shape+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Understanding the holobiont: how microbial metabolites affect human health and shape the immune system.</a> Cell Metab. 26 (1), 110-130 (2017).</li>
<li>Rooks, M. G., Garrett, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+metabolites+and+host+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, metabolites and host immunity.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 341-352 (2016).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Farrell, K., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+Arrays+%28MBRAs%29+as+a+tool+for+studying+C.+difficile+physiology+in+the+presence+of+a+complex+community%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor Arrays (MBRAs) as a tool for studying C. difficile physiology in the presence of a complex community.</a> Methods Mol Biol. 1476, 235-258 (2016).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+metabolomics+pipeline+for+the+mechanistic+interrogation+of+the+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A metabolomics pipeline for the mechanistic interrogation of the gut microbiome.</a> Nature. 595 (7867), 415-420 (2021).</li>
<li>Bilinski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fresh+versus+frozen+stool+for+fecal+microbiota+transplantation-assessment+by+multimethod+approach+combining+culturing%2C+flow+cytometry%2C+and+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Fresh versus frozen stool for fecal microbiota transplantation-assessment by multimethod approach combining culturing, flow cytometry, and next-generation sequencing.</a> Front Microbiol. 13, 872735(2022).</li>
<li>Li, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+stool+sample+preservation+methods+on+gut+microbiota+biodiversity%3A+New+original+data+and+systematic+review+with+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Effects of stool sample preservation methods on gut microbiota biodiversity: New original data and systematic review with meta-analysis.</a> Microbiol Spectr. 11 (3), e0429722(2023).</li>
<li>Fouhy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+freezing+on+faecal+microbiota+as+determined+using+MiSeq+sequencing+and+culture-based+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effects of freezing on faecal microbiota as determined using MiSeq sequencing and culture-based investigations.</a> PLoS One. 10 (3), e0119355(2015).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota-derived+metabolic+factors+reduce+Campylobacteriosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Microbiota-derived metabolic factors reduce Campylobacteriosis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (6), 1751-1763.e2 (2018).</li>
<li>He, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+jejuni+promotes+colorectal+tumorigenesis+through+the+action+of+cytolethal+distending+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Campylobacter jejuni promotes colorectal tumorigenesis through the action of cytolethal distending toxin.</a> Gut. 68 (2), 289-300 (2019).</li>
<li>Newsome, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bacterial+genera+associated+with+therapeutic+response+to+immune+checkpoint+PD-1+blockade+in+a+United+States+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Interaction of bacterial genera associated with therapeutic response to immune checkpoint PD-1 blockade in a United States cohort.</a> Genome Med. 14 (1), 35(2022).</li>
<li>Ziv, N., Brandt, N. J., Gresham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+chemostats+in+microbial+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of chemostats in microbial systems biology.</a> J Vis Exp. (80), e50168(2013).</li>
<li>Wille, J., Coenye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+dispersion%3A+The+key+to+biofilm+eradication+or+opening+Pandora%27s+box%5BTitle%5D)+AND+%22Biofilm%22%5BJournal%5D)">Biofilm dispersion: The key to biofilm eradication or opening Pandora's box.</a> Biofilm. 2, 100027(2020).</li>
<li>Biagini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designs+and+methodologies+to+recreate+in+vitro+human+gut+microbiota+models%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-des+Manuf%22%5BJournal%5D)">Designs and methodologies to recreate in vitro human gut microbiota models.</a> Bio-des Manuf. 6 (3), 298-318 (2023).</li>
<li>Qi, Y., Yu, L., Tian, F., Zhao, J., Zhai, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+to+study+human+gut-microbiota+interactions%3A+Applications%2C+advances%2C+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro models to study human gut-microbiota interactions: Applications, advances, and limitations.</a> Microbiol Res. 270, 127336(2023).</li>
<li>Gościniak, A., Eder, P., Walkowiak, J., Cielecka-Piontek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+gastrointestinal+models+for+nutraceuticals+research-achievements+and+challenges%3A+A+practical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Artificial gastrointestinal models for nutraceuticals research-achievements and challenges: A practical review.</a> Nutrients. 14 (13), 2560(2022).</li>
<li>Marrero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut-on-a-chip%3A+Mimicking+and+monitoring+the+human+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Gut-on-a-chip: Mimicking and monitoring the human intestine.</a> Biosens Bioelectron. 181, 113156(2021).</li>
</ol>

Il microbiota intestinale è una vasta rete di microrganismi, tra cui batteri, funghi, archei e virus, che contengono un enorme repertorio genetico e metabolico che supera di gran lunga quello diun ospite umano. La ricca capacità metabolica del microbioma comprende metaboliti prodotti dall'elaborazione batterica dei nutrienti alimentari, metaboliti dell'ospite modificati chimicamente dai batteri e metaboliti sintetizzati in modo univoco dal microbiota2. Il microbiota è implicato in quasi tutti i bioprocessi dell'ospite, ma anche in stati patologici come la malattia infiammatoria intestinale, il cancro, i disturbi metabolici e persino i disturbi neurologici 2,3. Sezionare il contributo del microbiota da quello dell'ospite è essenziale per comprendere il ruolo di microrganismi specifici o comunità complesse nella salute e nella malattia. Un approccio che consente questa dissezione è l'uso di bioreattori microbici, che coltivano diverse comunità microbiche in condizioni dinamiche. Esistono molti bioreattori disponibili in commercio che consentono la crescita di comunità batteriche fecali per quasi tutti gli scopi, tra cui la coltivazione di bioprodotti su larga scala o il controllo preciso di specifici fattori nutritivi per lo studio dei processi metabolici. Tuttavia, questi sistemi sono enormemente costosi e richiedono un'ampia preparazione e non consentono di esaminare in parallelo diverse condizioni sperimentali. Per un approccio semplificato che sia meno costoso, più adattabile e che consenta molte condizioni parallele, presentiamo qui il protocollo per la configurazione e l'uso di un array di mini-bioreattori a flusso continuo adattato da Auchtung et al.4.
La configurazione completa del sistema del mini-bioreattore è illustrata nella Figura 1A. Questo sistema di mini-bioreattore utilizza array di 6 pozzetti del reattore, che sono completamente indipendenti l'uno dall'altro e sono installati in una camera anaerobica sotto flusso peristaltico per consentire l'erogazione e la rimozione continua dei media (Figura 1A). Ogni array di reattori si trova su una piastra di agitazione magnetica a 60 posizioni, con due pompe peristaltiche a 48 cassette che contengono un tubo a 2 arresti per il fluido sorgente e il flusso di rifiuti (Figura 1A). La camera anaerobica è dotata di un monitor anaerobico CAM-12 per il contenuto di ossigeno, una scatola del catalizzatore per rimuovere l'ossigeno con capacità di riscaldamento e una colonna di rimozione dell'idrogeno solforato per assorbire il gas in eccesso dal metabolismo batterico. Ogni pozzetto del reattore è dotato di un ingresso del mezzo sorgente, di un'uscita di scarico e di una porta di campionamento, che consente l'inoculazione o il campionamento di ogni singolo pozzetto del reattore (Figura 1B).
Come descritto, il sistema di bioreattore consente il controllo dinamico della temperatura, del consumo di terreni e della disponibilità di nutrienti per supportare la coltivazione e il mantenimento delle comunità fecali. La temperatura è modulata da una scatola catalizzatore con capacità di riscaldamento, che consente di implementare rapidamente le variazioni di temperatura in tutta la camera anaerobica. Il consumo dei fluidi è regolato dalle portate delle pompe peristaltiche, che possono essere modificate per modificare il turnover dei fluidi nei reattori. Il turnover dei media può essere personalizzato in base ai tipi di comunità coltivati nei reattori, ad esempio, adattandosi a ceppi bersaglio a crescita lenta o molto rapida. Infine, la disponibilità di nutrienti può essere modificata dinamicamente aggiungendo componenti attraverso le singole porte di campionamento per ciascun pozzetto del reattore. Le condizioni statiche che possono essere modificate all'inizio di un esperimento, ma che non hanno un controllo dinamico nel sistema, sono il tipo di fluido, il contenuto di ossigeno e il numero di reattori simultanei. Gli investigatori possono scegliere di implementare qualsiasi media sorgente che desiderano e, sebbene un media sia descritto qui, sono stati implementati con successo infiniti altri tipi di media sorgente. È possibile far funzionare i reattori in condizioni aerobiche o microaerofile (a seconda della disponibilità di una camera microaerofila). Infine, è possibile installare il numero di reattori necessario a seconda delle esigenze sperimentali del ricercatore. Mentre i reattori sono in gruppi di sei all'interno di un array, ogni reattore funziona indipendentemente dagli altri e ognuno può essere collegato a una fonte diversa, se lo si desidera.
Questo sistema di bioreattore modulare può essere completamente configurato per circa $ 25.000 (esclusa la camera anaerobica o i componenti specifici della camera), con l'unica parte non riutilizzabile che è il tubo che può essere sostituito per meno di $ 100 per corsa del sistema. Il sistema è per lo più automatizzato, ma richiede un controllo quotidiano dei livelli dei terreni, poiché i flaconi di origine dei terreni dovranno essere sostituiti quando sono vuoti. Inoltre, qualsiasi campionamento deve essere completato manualmente e qualsiasi modifica condizionale dinamica al sistema dovrà essere avviata manualmente (ad esempio, la modifica della temperatura). Dal protocollo di sistema originale pubblicato da Auchtung et al., sono state implementate alcune modifiche per migliorare le prestazioni complessive e l'utilità4. In primo luogo, il materiale per la stampa 3D dell'array di bioreattori viene modificato per essere una plastica trasparente traslucida simile all'ABS per migliorare l'integrità strutturale del sistema attraverso ripetuti cicli di sterilizzazione in autoclave. Inoltre, al posto del tubo in PTFE con diametro esterno di 1/8 di pollice (3,2 mm), E-LFL, diametro interno di 2,06 mm, viene invece utilizzato un tubo da 100 piedi a causa del materiale più robusto, che è più resistente al collasso, che causerebbe blocchi nel flusso nel sistema. Infine, un raccordo aggiuntivo che utilizza una filettatura da 1/4 -28 mm per adattatori maschio spinato viene utilizzato per ridurre le variazioni di slittamento del tubo dai flaconi di origine del terreno. Da Han et al., la ricetta adattata del terreno MEGA fornisce un terreno indefinito, complesso e altamente ricco che consente la coltivazione di microrganismi anaerobi esigenti5. Il terreno viene modificato per utilizzare una preparazione alternativa del componente istidina-ematina, poiché l'originale non è più disponibile in commercio. L'idrossido di sodio viene utilizzato anche per pH del terreno a 7,0 o a qualsiasi pH desiderato. Nel complesso, questo sistema è economico e facile da usare, ottimizzato e un eccellente punto di ingresso ai sistemi di coltura a flusso continuo.
In questo protocollo, descriviamo in dettaglio la configurazione di questo sistema array di mini-bioreattori, compresi i materiali, la sterilizzazione del sistema e il successivo utilizzo per la coltivazione di campioni fecali murini umanizzati intestinali. L'obiettivo generale di questo metodo è quello di costruire un sistema di bioreattori adattabile ed economico che possa essere utilizzato per coltivare comunità microbiche in condizioni controllate. Uno schema dettagliato del flusso di lavoro per l'assemblaggio del sistema del mini-bioreattore è fornito nella Figura 2 e vi si fa riferimento nelle fasi appropriate all'interno del protocollo. Nel nostro esempio, inoculiamo due reattori con lo stesso campione fecale da topi intestinali umanizzati e descriviamo la struttura della comunità microbica sotto un flusso continuo di terreni MEGA.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Diagramma schematico della configurazione dell'array di mini-bioreattori nella camera anaerobica. (A) Vista completa della configurazione completa dell'array di mini-bioreattori nella camera anaerobica. L'array di bioreattori a 6 pozzetti è situato sulla piastra di agitazione magnetica a 60 posizioni. La rete luer tee sorgente è collegata al supporto sorgente sul lato sinistro attraverso il tappo di bottiglia a due fori. Due pompe peristaltiche trattengono il tubo a 2 stop dalla rete di origine e di scarico rispettivamente a sinistra e a destra. La rete di scarico a T si svuota nella bottiglia di scarico sul lato destro. Le apparecchiature essenziali per il funzionamento della camera anaerobica, tra cui il monitor CAM-12, la scatola del catalizzatore con capacità di riscaldamento e la colonna di rimozione dell'idrogeno solforato, sono disposte all'interno della camera attorno al sistema array. (B) Vista dall'alto delle porte di origine, campione e di scarto collegate a un pozzetto del reattore con il fluido all'altezza appropriata nel reattore. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2.jpg"> 
Figura 2: Diagramma schematico del flusso di lavoro dell'assemblaggio dell'array di mini-bioreattori. (A) Vista dall'alto verso il basso dell'array di mini-bioreattori, che mostra l'orientamento delle porte della sorgente, dei rifiuti e del campione. (B) Vista laterale dell'array di mini-bioreattori con vista che illustra i passaggi 2.3-2.4 del protocollo. Il tubo in PTFE da 1/8 di pollice e il raccordo (1) sono fissati e inseriti nelle porte di scarico e di campionamento. Il raccordo (1) senza PTFE viene inserito nella porta di origine. (C) Vista laterale dell'array di mini-bioreattori che illustra i passaggi 2.5-2.6 del protocollo. Il raccordo (2) è fissato alle porte di origine e di scarico. Il raccordo (3) è fissato alla porta del campione e a questo è inserito il raccordo (4) sulla parte superiore. (D) Vista laterale dell'array di mini-bioreattori che illustra i passaggi 2.9-2.11. Il tubo E-LFL da 2,06 mm è collegato alle porte di origine e di scarico e l'altra estremità è collegata ai raccordi (5) e quindi (6). Il tubo a 2 arresti del diametro appropriato viene quindi collegato al raccordo (6). Il collegamento inverso viene quindi ripetuto all'estremità del tubo a 2 arresti, con il raccordo (6) che si collega al tubo a 2 arresti e il raccordo (5) che si collega a quello. Infine, il tubo E-LFL da 2,06 mm sarà collegato al raccordo (5) per il collegamento alla rete luer tee. (E) Vista dall'alto verso il basso dell'array di mini-bioreattori che mostra la configurazione della rete luer tee di origine e di scarto descritta nei passaggi 2.12-2.15. Il tubo E-LFL da 2,06 mm che termina nel raccordo (5) viene utilizzato per collegare ciascun reattore a diversi raccordi (7), l'ultima delle quali è collegata al tappo della sorgente o della bottiglia di scarico. (F) Vista laterale del gruppo tappo di bottiglia a due fori descritto nei passaggi 2.16-2.17. Un'apertura nel tappo è collegata a un tubo in PTFE che viene posizionato all'interno della bottiglia. A tale apertura viene inserito il raccordo (1), seguito dal raccordo (2) e dal tubo E-LFL da 2,06 mm collegato al raccordo (5). Questo raccordo è collegato alla rete di sorgente o di scarico luer. All'apertura non collegata al tubo in PTFE, viene inserito il raccordo (1), seguito dal raccordo (2), e il tubo E-LFL da 2,06 mm viene collegato a un altro raccordo (5). Questa estremità viene tappata con un foglio durante la sterilizzazione in autoclave per il successivo collegamento a un filtro per siringa sterile da 0,22 μM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

<table><tbody><tr><td>Siringa da 1 mL BD Slip Tip sterile, monouso</td><td>Fisher Scientific</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>filettatura da 1/4-28 mm a maschio spinato (3,2 mm), 5/confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>008NB32-KD5L</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessarie 2 confezioni</td></tr><tr><td>da 10M NaOH (idrossido di sodio)</td><td>Sigma</td><td>72068-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tubo con tappo a vite da 2,0 ml, non zigrinato, con bordatura, naturale, E-Beam Tubo sterile con tappo attaccato</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>2mag MIXdrive 60 Agitatore Drive</td><td>2mag</td><td>40060</td><td>Piastra di agitazione magnetica a 60 posizioni (aggiunta opzionale di capacità di riscaldamento - cat# 40260)</td></tr><tr><td>Piastra di agitazione a 6 pozzetti, simile all'ABS Traslucido Plastica trasparente</td><td>Protolabs</td><td>Custom</td><td>Vedere i file supplementari per il file .stl per la stampa 3D</td></tr><tr><td>Etanolo assoluto (200 Proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico, glaciale</td><td>Sigma</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Adattatore, nylon, luer maschio a filettatura 1/4-28, 25/confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-82</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 6 (1 confezione)</td></tr><tr><td>Foglio di alluminio</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Camera anaerobica</td><td>Coy Lab Prodotti</td><td>Tipo B</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art&nbsp; SP Scienceware Flea Micro Spinbar Barre di agitazione magnetiche (1/confezione)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-261679</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 6&nbsp;</td></tr><tr><td>Cabina di biosicurezza classe 2</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acido butirrico</td><td>Sigma</td><td>B103500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 & middot; 2H2O (cloruro di calcio diidrato)</td><td>Sigma</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>Clorox Healthcare Salviette germicide con candeggina, non profumate, 6" x 5", confezione da 150 salviette</td> Ufficio <td>deposito</td><td>129202</td><td></td></tr><tr><td>D-(-)-fruttosio</td><td>Sigma</td><td>F0127-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Cellobiosio</td><td>Sigma</td><td>C7252-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucosio</td><td>Sigma</td><td>G8270-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Maltosio monoidrato</td><td>Sigma</td><td>M5885-100G</td><td></td></tr><tr><td>Trapano Spina America Rubinetto a mano DWTP1/4-28</td><td>Home Depot</td><td>305699489</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco, 1X senza Ca e Mg, sterile</td><td>Genesee</td><td>25-508</td><td></td></tr><tr><td>Luer femmina & volte; 1/16&Prime; adattatore per portagomma, Nylon, 25/confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-00</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 24 (1 confezione)</td></tr> <tr><td>Luer femmina & volte; 1/8 & Prime; adattatore per portagomma, Nylon 25 / confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-04</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 6 (1 pacchetto)</td></tr> <tr><td>Luer femmina & volte; 3/32 & Prime; adattatore per portagomma, Nylon, 25 / confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-02</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, bisogno di 6 (1 confezione)</td></tr><tr><td>Femmina luer tee, Nylon, 25/confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-56</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, bisogno di 10 (1 confezione)</td></tr><tr><td>FeSO4 &middot; 7H2O (Ferro [II] Solfato eptaidrato)</td><td>Sigma</td><td>F8633</td><td></td></tr><tr><td>Ematina</td><td>Sigma</td><td>H3281</td><td></td></tr><tr><td>Istidina</td><td>Sigma</td><td>H7750</td><td></td></tr><tr><td>Acido isovalerico</td><td>Sigma</td><td>129542</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 bibasico (idrogeno fosfato dipotassico)</td><td>Sigma</td><td>P2222-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 monobasico (potassio diidrogeno fosfato)</td><td>Sigma</td><td>P0662-500G</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette con orifizio grande</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-134</td><td></td></tr><tr><td>L-cisteina cloridrato</td><td>Sigma</td><td>C1276-10G</td><td></td></tr><tr><td>Luer maschio con anello di bloccaggio & volte; 1/8&Prime; adattatore per portagomma, Nylon, 25/confezione</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-04</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 42 (2 confezioni)</td></tr><tr><td>Estratto di carne</td><td>Sigma</td><td>70164-500G</td><td></td></tr><tr><td>Med Vet International&nbsp; Exel Ago, 20G x 1", Ipodermico, 100/Scatola, 26417</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-209-2532</td><td></td></tr><tr><td>Menadione (Vitamina K3)</td><td>Sigma</td><td>M5625</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp; &punto medio; 7H2O (solfato di magnesio eptaidrato)</td><td>Sigma</td><td>M1880-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q acqua</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl (cloruro di sodio)</td><td>Sigma</td><td>S9888-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 (Bicarbonato di Sodio)</td><td>Sigma</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Omnifi t Q-series tappo di bottiglia a due fori</td><td>Cole-Parmer</td><td>00945Q-2</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, è necessario 1</td></tr><tr><td>PMP IPC-N L 24CHNL 8RLR 115V</td><td>MasterFlex</td><td>ISM939C-115V</td><td>24 canali, richiede 1 per la sorgente e 1 per lo scarico</td></tr><tr><td>Setti in gomma Precision Seal&reg;, bianco, 7 mm O.D. tubo di vetro (100/pk)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z553905-100EA</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 6 setti</td></tr> di <tr><td>acido propionico</td><td>Sigma</td><td>P5561&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tubo per pompa, 2 arresti, Tygon S3 E-Lab, diametro interno 1,02 mm; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-28</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 6&nbsp; (1 confezione)</td></tr><tr><td>Tubo della pompa, 2 arresti, Tygon S3 E-Lab, diametro interno 1,14 mm; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-30</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, sono necessari 6 (1 confezione)</td></tr><tr><td>Puritan Cary-Blair Medium, 5 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>Flaconi rotondi per la conservazione dei terreni in PYREX 2L, con tappo a vite GL45</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1E</td><td></td></tr><tr><td>Lamette da barba</td><td>Genesee</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin, sale sodico</td><td>ACROS Organics di ThermoFisher</td><td>AC41890-0010</td><td></td></tr><tr><td>Amido solubile</td><td>Sigma</td><td>S9765-100G</td><td></td></tr><tr><td>Micro spatole in acciaio inossidabile, lama a cucchiaio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td></td></tr><tr><td>TBNG TYGON ELFL 2.06MMID 100'VWR</td><td></td> <td>MFLX06449-42</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, è necessario</td></tr> un <tr><td>integratore di minerali traccia</td> da 205,5 cm <td>ATCC</td><td>MD-TMS</td><td></td></tr><tr><td>Tripticasi Peptone (BBL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11921</td><td></td></tr><tr><td>Tubo, PTFE, 1/8&Prime; (3,2 millimetri) OD & tempi; 1,5 mm ID, 10 M</td><td>Cole-Parmer</td><td>008 T32-150-10</td><td>Per costruire 1 array a 6 pozzetti, è necessario un</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P1754</td> da 300 mm<td></td></tr><tr><td>Integratore Vitaminico</td><td>ATCC</td><td>MD-VS</td><td></td></tr><tr><td>Estratto di Lievito (Bacto)</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0127-17-9</td><td></td></tr></tbody></table>

assemblaggio di bioreattori per la coltura continua di comunità fecali complesse

Bioreactor Assembly for Continuous Culture of Complex Fecal Communities

I campioni fecali sono stati raccolti da topi colonizzati con liquame fecale umano 2 settimane dopo l'inoculazione e conservati a -80 °C. Il sistema del bioreattore è stato configurato con un flusso continuo di media MEGA per due pozzi di reattore replicato (Figura 3A). Il liquame fecale è stato preparato dai pellet fecali di topo secondo il protocollo descritto nella fase 6 ed entrambi i reattori sono stati inoculati mediante porta di campionamento con il l...

Assemblaggio di bioreattori per la coltura continua di comunità fecali complesse

The microbiota, especially bacteria, respond to various environmental exposures such as micro and macronutrients, pharmacological compounds, and ...

bioreactor-assembly-for-continuous-culture-complex-fecal

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Digestori anaerobici su scala di laboratorio permetterà agli scienziati di ricercare nuovi modi di ottimizzare le applicazioni esistenti della biotecnologia anaerobica e per valutare il potenziale di produzione del metano vari rifiuti organici. Questo articolo introduce un modello generalizzato per la costruzione, inoculazione, il funzionamento e il monitoraggio di un laboratorio su scala continuamente agitata digestore anaerobico.

Continua-mosse digestore anaerobico per convertire i rifiuti organici in biogas: configurazione del sistema e funzionamento di base

Fonte: Ahmadi, S., et al. Un modello di batch-culture in vitro per stimare gli effetti dei regimi interventistici sul microbiota fecale umano. J. Vis. Esp. (2019).Questo video dimostra un metodo per modellare la fermentazione microbica intestinale incubando campioni fecali con fibre fermentabili alimentari in condizioni anaerobiche per studiare la produzione di metaboliti da parte del microbiota intestinale.

In vitro Modello di coltura batch-coltura per imitare la fermentazione colonica da parte del microbiota intestinale umano

La regolazione dei nutrienti che utilizza l'alimentazione continua aggiustata per la crescita migliora i tassi di crescita degli sferoidi delle cellule di mammifero rispetto all'alimentazione intermittente per colture in bioreattori in sospensione agitata.  Questo studio dimostra i metodi necessari per stabilire semplici colture alimentate a tasso aggiustato.

Regolamento nutrienti alimentando in continuo per l&#39;espansione su larga scala di cellule di mammifero in Spheroids

Il comportamento funzionale delle cellule in coltura può essere migliorata coltivando in più in vivo -come ambienti di coltura 3 dimensioni 16-21. Questo manoscritto descrive il set-up e il funzionamento di un sistema a fibra cava bioreattore per vivo -come mammiferi coltura di tessuti in.

Bioreattori fibra cava per<em&gt; In Vivo</em&gt; -come Mammiferi Tissue Culture

Viene presentato un nuovo progetto di reattore, denominato bioreattore ad alta densità (HDBR), per la coltivazione e lo studio di comunità microbiche ad alta densità. Qui, l'HDBR viene applicato con successo in una configurazione di fotobioreattore (PBR) per lo studio del metabolismo dell'azoto da parte di una comunità di alghe miste ad alta densità.

Un bioreattore Novel per l&#39;alta densità di coltivazione diverse comunità microbiche

Interazioni ospite-microbo intestino sono stati valutati utilizzando un approccio innovativo che unisce una comunità orale sintetica, la digestione gastrointestinale in vitro e un modello dell'epitelio dell'intestino tenue. Presentiamo un metodo che può essere adattato per valutare l'invasione delle cellule degli agenti patogeni e multispecie biofilm, o anche per testare la capacità di sopravvivenza dei probiotici formulazioni.

Valutare la fattibilità di un consorzio batterico sintetico sull'interfaccia ospite-microbo In Vitro Gut

Qui, presentiamo un protocollo per la coltura del microbiota dell'intestino, del colon in vitro, , utilizzando una serie di bioreattori che simulano le condizioni fisiologiche del tratto gastro intestinale.

L'applicazione di avanzate In Vitro coltura tecnologia per studiare il Microbiota dell'intestino umano

Qui, presentiamo un protocollo per ottenere la produzione su larga scala di cellule aderenti attraverso un sistema completamente chiuso basato su microcarrier solubili di grado GMP. La coltivazione di cellule staminali mesenchimali umane, cellule HEK293T e cellule Vero è stata convalidata e ha soddisfatto sia le richieste di quantità che i criteri di qualità per l'industria della terapia cellulare e genica.

Produzione di celle su larga scala basata su microcarrier porosi solubili di grado GMP

L'obiettivo di questo documento è quello di descrivere in dettaglio le migliori pratiche per la produzione di terreni per microrganismi anaerobici fastidiosi acquisiti da un ambiente. Questi metodi aiutano a gestire le colture anaerobiche e possono essere applicati per supportare la crescita di microrganismi non coltivati elusivi, la "materia oscura microbica".

Un insieme di mezzi di comunicazione simulati informati in situ per la coltura di microrganismi anaerobici acquisiti nell'ambiente

Il Minibioreactor Array (MBRA) è un sistema di coltura ad alto rendimento, personalizzabile e a flusso continuo che consente la coltivazione di comunità microbiche complesse, supportando esperimenti paralleli per studiare le dinamiche del microbioma, le interazioni terapeutiche e le risposte microbiche ai fattori ambientali.

Protocollo aggiornato per l'assemblaggio e l'uso dell'array di minibioreattori (MBRA)

Impara a montare bioreattori miniaturizzati per la coltura continua di comunità fecali complesse in condizioni anaerobiche. Questo metodo consente esperimenti paralleli controllati per studiare l'interazione tra microbioma e risposta alle terapie.

Assemblaggio di bioreattori per la coltura continua di comunità fecali complesse

Esplora altri video