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Imaging del trasferimento di energia della risonanza di Förster su cellule vive delle dinamiche d...
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JoVE Journal Cancer Research
Live-Cell Förster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

Imaging del trasferimento di energia della risonanza di Förster su cellule vive delle dinamiche di attivazione di Akt metabolicamente regolate nelle cellule HepG2

Full Text
790 Views
08:03 min
May 23, 2025

DOI: 10.3791/68075-v

Javed Akhtar1,2,3,4,5, Muhammad Imran6, Jiahe Wang1,2,3, Gang Ma5, Guanyu Wang1,2,3

1Laboratory of Biocomplexity and Engineering Biology, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, 2Futian Biomedical Innovation R&D Center,The Chinese University of Hong Kong, 3Ciechanover Institute of Precision and Regenerative Medicine, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, 4Department of Immunology and Microbiology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, 5Department of Biology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, 6Department of Computer Science and IT,University of Southern Punjab

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Qui, presentiamo un protocollo per quantificare le dinamiche spazio-temporali dell'attivazione e della fosforilazione di Akt in cellule HepG2 vive. L'imaging a trasferimento di energia per risonanza di Förster (FRET) è uno strumento potente che fornisce preziose informazioni sulle vie di segnalazione dell'insulina e sulla regolazione metabolica nelle cellule tumorali.

L'eterogeneità cellulare è un ostacolo alla descrizione accurata delle complessità delle dinamiche cellulari, che sono essenzialmente mediate. Ecco perché siamo qui per l'imaging di singole cellule. I recenti sviluppi nei biosensori FRET geneticamente codificati hanno migliorato la specificità e rivoluzionato il tracciamento in tempo reale di Akt all'interno delle cellule, che è fondamentale per comprendere l'eterogenetica e sviluppare terapie farmacologiche personalizzate.

Il cancro e il diabete sono attraverso complesse vie metaboliche. Per decodificare la biocomplessità della via di segnalazione dell'insulina nel cancro, utilizziamo l'imaging FRET su cellule vive all'avanguardia con risoluzione di singola cellula. Abbiamo scoperto che l'ottimizzazione del microscopio confocale, la configurazione hardware e software, insieme alla messa a punto della potenza del laser e alla regolazione del guadagno del rivelatore, sono fondamentali per ridurre al minimo il rumore e la diafonia spettrale nei segnali FRET.

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