Name: Imaging ad alta risoluzione di C. elegans in tutti gli stadi larvali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Scopri un metodo microfluidico per l'imaging time-lapse di C. elegans durante lo sviluppo post-embrionale. Questa tecnica consente osservazioni ad alta risoluzione mantenendo la vitalità dell'animale.

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<ol><li>Sulston, J. E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-embryonic+cell+lineages+of+the+nematode%2C+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Post-embryonic cell lineages of the nematode, Caenorhabditis elegans.</a> Dev Biol. 56 (1), 110-156 (1977).</li>
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<li>Samara, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+in+vivo+femtosecond+laser+neurosurgery+screen+reveals+small-molecule+enhancer+of+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Large-scale in vivo femtosecond laser neurosurgery screen reveals small-molecule enhancer of regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (43), 18342-18347 (2010).</li>
<li>Stirman, J. N., Brauner, M., Gottschalk, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+study+of+synaptic+transmission+at+the+neuromuscular+junction+enabled+by+optogenetics+and+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput study of synaptic transmission at the neuromuscular junction enabled by optogenetics and microfluidics.</a> J Neurosci Methods. 191 (1), 90-93 (2010).</li>
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<li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+microfluidics+providing+high-resolution+and+high-throughput+screening+of+Caenorhabditis+elegans+poly-glutamine+aggregation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Large-scale microfluidics providing high-resolution and high-throughput screening of Caenorhabditis elegans poly-glutamine aggregation model.</a> Nat Commun. 7 (1), 13023(2016).</li>
<li>Berger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+C.+elegans+immobilization+enables+high-resolution+developmental+studies+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Long-term C. elegans immobilization enables high-resolution developmental studies in vivo.</a> Lab Chip. 18 (9), 1359-1368 (2018).</li>
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<li>Spiri, S., Berger, S., Mereu, L., DeMello, A., Hajnal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+EGFR+signaling+in+the+anchor+cell+ensures+precise+inter-organ+connection+during+Caenorhabditis+elegans+vulval+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Reciprocal EGFR signaling in the anchor cell ensures precise inter-organ connection during Caenorhabditis elegans vulval morphogenesis.</a> Development. 149 (1), dev199900(2022).</li>
<li>Gritti, N., Kienle, S., Filina, O., Van Zon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+time-lapse+microscopy+of+C.+elegans+post-embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Long-term time-lapse microscopy of C. elegans post-embryonic development.</a> Nat Commun. 7 (1), 12500(2016).</li>
<li>Keil, W., Kutscher, L. M., Shaham, S., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+high-resolution+imaging+of+developing+C.+elegans+larvae+with+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Long-term high-resolution imaging of developing C. elegans larvae with microfluidics.</a> Dev Cell. 40 (2), 202-214 (2017).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Elettrovalvola 3/2&nbsp;</td><td>Distrelec</td><td>154-22-898 e 154-22-899</td><td>Alternativa al precedente. Elettrovalvola che collega il regolatore di pressione alla valvola on-chip.</td></tr><tr><td>Arduino</td><td>Distrelec</td><td>301-01-956</td><td>Microcontrollore opzionale a seconda del controller e dell'interfaccia selezionati.</td></tr><tr><td>Bacto-Triptone</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>211705</td><td>Per la produzione di brodo.</td></tr><tr><td>Bacto-Lievito</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>212750</td><td>Per la produzione di brodo.</td></tr><tr><td>Ago smussato 23G</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>GGA723050&nbsp;</td><td>Ago smussato che collega il tubo da 1/16" a una siringa.</td></tr><tr><td>Ago smussato 30G</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>IG-TE730050</td><td>Ago smussato che collega il tubo da 1/32" a una siringa.</td></tr><tr><td>C. elegans Costrutto 1</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH5786 LGI: hmr-1(cp21[hmr-1::gfp + LoxP]) Marston, D.J. et al. MRCK-1 guida la costrizione apicale in C. elegans collegando il modello di sviluppo alla generazione di forza. Curr. Biol. 26 (16), 2079-2089. 2016.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH1187 LGII: arIs92[egl-17::cfp] Yoo, A.S., Bais, C., Greenwald, I. Crosstalk tra le vie EGFR e LIN-12/Notch nello sviluppo vulvare di C. elegans. Scienza. 303 (5658), 663-666. 2004.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 3</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH5786 LGV: qyIs50[Pcdh-3>mCherry::moeABD, unc-119(+)] Ziel, J.W., Hagedorn, E.J., Audhya, A., Sherwood, D.R. UNC-6 (netrin) orienta la membrana invasiva della cellula di ancoraggio in C. elegans. Nat. Cell Biol., 11 (2), 183-189. 2009.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 4</td><td>NA</td><td>NA</td><td>ML2615 LGX: dlg-1(mc103[dlg-1::gfp]) Vuong-Brender, T.T.K., Suman, S.K., Labouesse, M. La ECM apicale preserva l'integrità embrionale e distribuisce lo stress meccanico durante la morfogenesi. Sviluppo. 144 (23), 4336-4349. 2017.Cable</td></tr> <tr><td></td><td>Distrelec</td><td>143-46-644</td><td>Necessario se si seleziona il solenoide da distrelec. Cavo che collega il solenoide al MOSFET.</td></tr><tr><td>Clorotrimetilsilano&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>386529-25ML</td><td>Silano per passivazione wafer.</td></tr><tr><td>Colesterolo</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8667</td><td>Per&nbsp; Produzione S-Basale.</td></tr><tr><td>Diodo flyback</td><td>Distrelec</td><td>110-52-628</td><td>Diodo flyback che protegge il microcontrollore.</td></tr><tr><td>Perno cavo in acciaio</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>GGA7R23050&nbsp;</td><td>Perno cavo in acciaio 23G che collega il tubo da 1/16" al dispositivo.</td></tr><tr><td>L Brodo</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparato in casa seguendo la ricetta standard. 10 g di Bacto-triptone, 5 g di Bacto-lievito, 5 g di NaCl, H2O per 1 litro, pH a 7,0 utilizzando 1 M NaOH</td></tr><tr><td>Long-term Imaging Device L1</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Dispositivo di imaging a lungo termine per larve da L1 a L2 precoce/medio. Fatto in casa, disponibile su richiesta. Disponibile anche come variante di scambio media.</td></tr><tr><td>Dispositivo di imaging a lungo termine L1-4</td><td>NA</td><td>NA Dispositivo</td><td>di imaging a lungo termine per larve da L1 a L4 medio. Fatto in casa, disponibile su richiesta. Disponibile anche come variante di scambio media.</td></tr><tr><td>Dispositivo di imaging a lungo termine L2-A</td><td>NA NA</td><td></td><td>Dispositivo di imaging a lungo termine per la metà della L2 fino all'età adulta (eversione). Fatto in casa, disponibile su richiesta. Disponibile anche come variante di scambio media.</td></tr><tr><td>Dispositivo di imaging a lungo termine L3-A</td><td>NA NA</td><td></td><td>Dispositivo di imaging a lungo termine per la metà di L3 fino all'età adulta (eversione). Fatto in casa, disponibile su richiesta. Disponibile anche come variante di scambio media.</td></tr><tr><td>Dispositivo di imaging a lungo termine L4-A</td><td>NA NA</td><td></td><td>Dispositivo di imaging a lungo termine per la metà di L4 fino all'età adulta (eversione). Fatto in casa, disponibile su richiesta. Disponibile anche come variante di scambio media.</td></tr><tr><td>M9 Buffer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparato in casa seguendo la ricetta standard.</td></tr><tr><td>MOSFET</td><td>Distrelec</td><td>303-41-391</td><td>Transistor ad effetto di campo a semiconduttore di ossido di metallo, utilizzato per commutare i 24 V CC necessari per il solenoide.</td></tr><tr><td>Piastre NGM</td><td>NA NA</td><td></td><td>Preparate in casa seguendo la ricetta standard.</td></tr><tr>Adattatore per <td>11776048</td> Fisher <td>Scientific in nylon Luer-Fitting</td><td></td><td>da tubo OD 6mm ad ago smussato 23G.</td></tr><tr><td>Optiprep</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1556</td><td>Liquido corrispondente alla densità.</td></tr><tr><td>PDMS</td><td>Kit elastomero Ameba</td><td>Elastosil RT601A/B</td><td>PDMS.</td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2443</td><td>Tensioattivo non ionico.</td></tr><tr><td>Potassio diidrogeno fosfato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.37039</td><td>Per&nbsp; Produzione S-Basale.</td></tr><tr><td>Potassio idrogeno fosfato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.05099</td><td>Per&nbsp; Produzione S-Basale.</td></tr><tr><td>Alimentazione 24VDC</td><td>Distrelec</td><td>301-63-304</td><td>Alimentatore 24VDC. Selezionare un alimentatore adatto al solenoide selezionato.</td></tr><tr><td>Regolatore di pressione di precisione</td><td>Distrelec</td><td>154-23-578</td><td>Alternativo a sopra. Regolatore di pressione.</td></tr><tr><td>Manometro G1/8</td><td>Distrelec</td><td>154-23-643</td><td>Il manometro si collega al regolatore di pressione.</td></tr><tr><td>Tubo in PU OD 6mm</td><td>Distrelec</td><td>154-23-866</td><td>Tubo che collega la fonte di pressione e il regolatore, nonché il regolatore e l'elettrovalvola.</td></tr><tr><td>Raccordo a innesto G1/8 a 6 mm</td><td>Distrelec</td><td>301-69-330</td><td>Alternativo a sopra. 2x Raccordo a innesto si collega al regolatore di pressione e si collega al tubo da 6 mm.</td></tr><tr><td>Raccordo a innesto M5 a 6 mm</td><td>Distrelec</td><td>301-69-459</td><td>2x Raccordo a innesto si collega al solenoide e al tubo da 6 mm.</td></tr><tr><td>S-Basal Buffer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparato in casa secondo la ricetta standard. 5,85 g di NaCl, 1 g di K2HPO4, 6 g di KH2PO4, 1 ml di colesterolo (5 mg/ml in etanolo), H2O in 1 litro. Sterilizzare in autoclave.</td></tr><tr><td>Cloruro di Sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9625</td><td>Per la produzione di Brodo L e S-Basale.</td></tr><tr><td>Idrossido di sodio (5M)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>567530</td><td>Idrossido di sodio utilizzato durante lo sbiancamento di C. elegans (preparare la soluzione alla concentrazione 5M)</td></tr><tr><td>Ipoclorito di sodio (5%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.05614</td><td>Ipoclorito di sodio utilizzato durante lo sbiancamento di C. elegans (preparare la soluzione alla concentrazione del 5%)</td></tr><tr><td>Filtro 10 &; m</td><td>pluriSelect</td><td>43-10010-40</td><td>Alternativa per la preparazione di alimenti a base di batteri, soprattutto se si utilizzano dispositivi più piccoli.</td></tr><tr><td>Filtro 5 &micro; m</td><td>pluriSelect</td><td>43-10005-40</td><td>Filtro utilizzato per filtrare le larve L1 dopo la fame notturna e i batteri dopo aver completato la preparazione del cibo.</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Gersteltec</td><td>GM1050</td><td>SU-8 per altezze da 1-10 &micro;m.</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Gersteltec</td><td>GM1060</td><td>SU-8 per altezze da 5-30 &micro;m.</td></tr><tr><td>SU-9</td><td>Gersteltec</td><td>GM1070</td><td>SU-8 per altezze da 15-200 &micro;m.</td></tr><tr><td>Siringa da 1 mL</td> Fisher <td>Scientific</td><td>11338763</td><td>siringa da 1 mL. Se si utilizza un tipo diverso, assicurarsi che il corpo della siringa e lo stantuffo siano rigidi, in modo tale da non essere deformati dalla pompa a siringa.</td></tr><tr><td>Pompa a siringa</td><td>WPI</td><td>Al1000-220</td><td>Pompa a siringa (https://www.wpiinc.com/var-2300-aladdin-single-syringe-pump.html).</td></tr><tr><td>Provetta 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-809-220</td><td>Provetta utilizzata per lo sbiancamento dei vermi e la preparazione dei batteri.</td></tr><tr><td>Provetta da 2 mL</td> Fisher <td>Scientific</td><td>NC1186931</td><td>Provetta utilizzata per la preparazione di vermi e batteri.</td></tr><tr><td>Provetta 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-465-232</td><td>Provetta utilizzata per la preparazione e la crescita dei batteri.</td></tr><tr><td>Pinzetta SMD</td><td>Br&uuml; tsch R&uuml; egg Werkzeuge</td><td>448980</td><td>Pinzette utilizzate per collegare il tubo da 1/32" al dispositivo.</td></tr><tr><td>Tygon tubing 1/16"</td><td>Fisher Scientific</td><td>642002</td><td>Tubo flessibile 1/16" OD che collega la maggior parte dei componenti al dispositivo.</td></tr><tr><td>Tygon tubing 1/32"</td><td>Fisher Scientific</td><td>641900</td><td>Tubo flessibile 1/32" OD che collega l'alimentazione dei batteri al dispositivo.</td></tr><tr><td>UV KUB-3</td><td>Kloe</td><td>NA</td><td>Allineatore per maschere e sistema di esposizione ai raggi UV.</td></tr><tr><td>Wafer</td><td>Siegert Wafer</td><td>4P0/>1/525&plusmn; 25/SSP/TTV< 10</td><td>Wafer di silicio.</td></tr><tr><td>Contenitore per rifiuti</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparato in casa utilizzando una provetta da 2 ml o una fiala criogenica e perni cavi in acciaio.</td></tr></tbody></table>

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Ematociti concentrati Drosophila disperdere sulla totalità dello sviluppo dell'embrione. Questo protocollo dimostra come montare e immagine queste migrazioni uso di embrioni con ematociti concentrati fluorescente.

Immagini dal vivo di Drosophila melanogaster Migrazioni Hemocyte embrionali

Imaging C. elegans Gli embrioni utilizzando un microscopio epifluorescente e Software Open Source

Questo articolo descrive una tecnica per la visualizzazione degli eventi precoci dell'embriogenesi nel...

Microscopia time-lapse di Embriogenesi All&#39;inizio del Caenorhabditis elegans

Un semplice dispositivo microfluidico è stato sviluppato per eseguire anestetico...

Semplici dispositivi microfluidici per<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging di<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; E Zebrafish

Questo protocollo descrive come immagine divisione delle cellule all'interno di un tessuto in Caenorhabditis elegans embrioni. Mentre diversi protocolli descrivono come la divisione cellulare l'immagine in embrione precoce, questo protocollo viene descritto come immagine divisione cellulare all'interno di un tessuto in via di sviluppo durante la metà tarda embriogenesi.

Visualizzazione neuroblasti Citocinesi Durante<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriogenesi

L'imaging del comportamento e dell'attività neurale su scale temporali lunghe senza immobilizzazione dell'animale è un prerequisito per comprendere il comportamento. L'imaging delle camere microfluidiche di agarosio (AMI) può essere utilizzato per visualizzare l'attività neurale e il comportamento per tutte le fasi della vita di Caenorhabditis elegans.

Microchambers Agarose per lungo termine Imaging di calcio<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Il trasparente c. elegans intestino può servire come una"nel vivo del tessuto camera" per lo studio della biogenesi di membrana e lume di apicobasal a livello di singola cellula e subcellulare durante tubulogenesis multicellulari. Questo protocollo viene descritto come combinare etichettatura standard, perdita di funzione genetica/RNAi e approcci al microscopio dissezionare questi processi a livello molecolare.

Il c. elegans intestino come un modello per intercellulare Lumen morfogenesi e biogenesi di membrana polarizzata In Vivo a livello di singola cellula: etichettatura da macchiatura dell'anticorpo, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging

Qui, presentiamo un approccio combinatorio utilizzando microscopia ad alta risoluzione, strumenti computazionali, e l'etichettatura a cella singola in vivente embrioni C. elegans per comprendere le singole dinamiche delle cellule durante il neurosviluppo.

Microscopia isotropica leggera e analisi di lignaggio cellulare automatizzate al catalogo Caenorhabditis elegans embriogenesi con risoluzione subcellulare

Questo lavoro descrive un protocollo semi-alto-velocità che consente l'imaging simultaneo 3D time-lapse di embriogenesi in 80-100 C. elegans embrioni in un singolo periodo notturno. Inoltre, sono inclusi strumenti di elaborazione e visualizzazione delle immagini per semplificare l'analisi dei dati. La combinazione di questi metodi con ceppi di reporter personalizzati consente un monitoraggio dettagliato dell'embriogenesi.

Un metodo di imaging semi-alto e un toolkit di visualizzazione dei dati per analizzare lo sviluppo embrionale C. elegans

Il protocollo descrive una semplice progettazione di chip microfluidici e una metodologia di microfabbricazione utilizzata per coltivare C. elegans in presenza di una fornitura continua di cibo fino a 36 ore. Il dispositivo di crescita e imaging consente inoltre l'imaging intermittente ad alta risoluzione a lungo termine dei processi cellulari e subcellulari durante lo sviluppo per diversi giorni.

Un semplice chip microfluidico per la crescita a lungo termine e l'imaging di Caenorhabditis elegans

La microscopia a super-risoluzione può fornire una visione dettagliata dell'organizzazione dei componenti all'interno del complesso sinaptonemale nella meiosi. Qui, dimostriamo un protocollo per risolvere le singole proteine del complesso sinaptonemale Caenorhabditis elegans .

Microscopia a super-risoluzione del complesso sinaptonemale all'interno della linea germinale di Caenorhabditis elegans

Scopri un metodo microfluidico per l'imaging time-lapse di C. elegans durante lo sviluppo post-embrionale. Questa tecnica consente osservazioni ad alta risoluzione mantenendo la vitalità dell'animale.

Imaging ad alta risoluzione di C. elegans in tutti gli stadi larvali

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